Как правильно наклеить знак шипы: Знак шипы: куда клеить по правилам?

Содержание

Россия напала на Украину!

Россия напала на Украину!

Мы, украинцы, надеемся, что вы уже знаете об этом. Ради ваших детей и какой-либо надежды на свет в конце этого ада –  пожалуйста, дочитайте наше письмо .

Всем нам, украинцам, россиянам и всему миру правительство России врало последние два месяца. Нам говорили, что войска на границе “проходят учения”, что “Россия никого не собирается захватывать”, “их уже отводят”, а мирное население Украины “просто смотрит пропаганду”. Мы очень хотели верить вам.

Но в ночь на 24-ое февраля Россия напала на Украину, и все самые худшие предсказания  стали нашей реальностью .

Киев, ул. Кошица 7а. 25.02.2022

 Это не 1941, это сегодня. Это сейчас. 
Больше 5 000 русских солдат убито в не своей и никому не нужной войне
Более 300 мирных украинских жителей погибли
Более 2 000 мирных людей ранено

Под Киевом горит нефтебаза – утро 27 февраля, 2022.

Нам искренне больно от ваших постов в соцсетях о том, что это “все сняли заранее” и “нарисовали”, но мы, к сожалению, вас понимаем.

Неделю назад никто из нас не поверил бы, что такое может произойти в 2022.

Метро Киева, Украина — с 25 февраля по сей день

Мы вряд ли найдем хоть одного человека на Земле, которому станет от нее лучше. Три тысячи ваших солдат, чьих-то детей, уже погибли за эти три дня. Мы не хотим этих смертей, но не можем не оборонять свою страну.

И мы все еще хотим верить, что вам так же жутко от этого безумия, которое остановило всю нашу жизнь.

Нам очень нужен ваш голос и смелость, потому что сейчас эту войну можете остановить только вы. Это страшно, но единственное, что будет иметь значение после – кто остался человеком.

ул. Лобановского 6а, Киев, Украина. 26.02.2022

Это дом в центре Киева, а не фото 11-го сентября. Еще неделю назад здесь была кофейня, отделение почты и курсы английского, и люди в этом доме жили свою обычную жизнь, как живете ее вы.

P.S. К сожалению, это не “фотошоп от Пентагона”, как вам говорят. И да, в этих квартирах находились люди.

«Это не война, а только спец. операция.»

Это война.

Война – это вооруженный конфликт, цель которого – навязать свою волю: свергнуть правительство, заставить никогда не вступить в НАТО, отобрать часть территории, и другие. Обо всем этом открыто заявляет Владимир Путин в каждом своем обращении.

«Россия хочет только защитить ЛНР и ДНР.»

Это не так.

Все это время идет обстрел городов во всех областях Украины, вторые сутки украинские военные борются за Киев.

На карте Украины вы легко увидите, что Львов, Ивано-Франковск или Луцк – это больше 1,000 км от ЛНР и ДНР. Это другой конец страны. 25 февраля, 2022 – места попадания ракет

25 февраля, 2022 – места попадания ракет «Мирных жителей это не коснется.»

Уже коснулось.

Касается каждого из нас, каждую секунду. С ночи четверга никто из украинцев не может спать, потому что вокруг сирены и взрывы. Тысячи семей должны были бросить свои родные города.
Снаряды попадают в наши жилые дома.

Больше 1,200 мирных людей ранены или погибли. Среди них много детей.
Под обстрелы уже попадали в детские садики и больницы.
Мы вынуждены ночевать на станциях метро, боясь обвалов наших домов.
Наши жены рожают здесь детей. Наши питомцы пугаются взрывов.

«У российских войск нет потерь.»

Ваши соотечественники гибнут тысячами.

Нет более мотивированной армии чем та, что сражается за свою землю.
Мы на своей земле, и мы даем жесткий отпор каждому, кто приходит к нам с оружием.

«В Украине – геноцид русскоязычного народа, а Россия его спасает.»

Большинство из тех, кто сейчас пишет вам это письмо, всю жизнь говорят на русском, живя в Украине.

Говорят в семье, с друзьями и на работе. Нас никогда и никак не притесняли.

Единственное, из-за чего мы хотим перестать говорить на русском сейчас – это то, что на русском лжецы в вашем правительстве приказали разрушить и захватить нашу любимую страну.

«Украина во власти нацистов и их нужно уничтожить.»

Сейчас у власти президент, за которого проголосовало три четверти населения Украины на свободных выборах в 2019 году. Как у любой власти, у нас есть оппозиция. Но мы не избавляемся от неугодных, убивая их или пришивая им уголовные дела.

У нас нет места диктатуре, и мы показали это всему миру в 2013 году. Мы не боимся говорить вслух, и нам точно не нужна ваша помощь в этом вопросе.

Украинские семьи потеряли больше 1,377,000 родных, борясь с нацизмом во время Второй мировой. Мы никогда не выберем нацизм, фашизм или национализм, как наш путь. И нам не верится, что вы сами можете всерьез так думать.

«Украинцы это заслужили.»

Мы у себя дома, на своей земле.

Украина никогда за всю историю не нападала на Россию и не хотела вам зла. Ваши войска напали на наши мирные города. Если вы действительно считаете, что для этого есть оправдание – нам жаль.

Мы не хотим ни минуты этой войны и ни одной бессмысленной смерти. Но мы не отдадим вам наш дом и не простим молчания, с которым вы смотрите на этот ночной кошмар.

Искренне ваш, Народ Украины

наклейка упразднена, но есть нюанс, как правильно клеить знак Шипы

Знак Шипы на авто: можно ли его не использовать. Уже длительный период времени водители задаются вопросом: является ли необходимостью обязательно наклеивать знак Шипы? Сам знак очень спорным: еще несколько лет назад его отсутствие могло стать поводом для штрафа. Но в том же время многочисленные исследования показывают, что отсутствие знака никак не влияет на количество дорожно-транспортных происшествий.

Из выводов по результатам проведенных анализов следует, что автомобиль без знака Шипы лишь за редким случаем может стать виновником аварии на дорогах России. Закон требовал размещения этого знака, и водители хоть и неохотно, но вынуждены были повиноваться. Как обстоят дела сейчас и штрафуют ли все еще водителей транспортных средств, если соответствующей этикетки на заднем стекле нет.

Наклейка упразднена, но есть нюанс

Если бы участники дорожного движения внимательно следили за изменениями в законодательство, то были бы в курсе, что обязательное наличие знака Шипы было отменено в 2019 году. Но дело в том, что соответствующее постановление все еще не вступило в силу, а значит у сотрудников ГИБДД еще некоторое время будут основания на то, чтобы остановить автомобиль и выписать водителю штраф.

На данный момент проблема отсутствия/наличия наклейки знака шипованной резины на авто лишь в том, что водители, как и гаишники, недостаточно подкованы информационно в плане нововведения в правила дорожного движения. Когда об отмене знака будет объявлено официально, вопрос будет окончательно снят, а водители смогут убрать наклейку с заднего стекла, поскольку точно не получат штрафных санкций за ее отсутствие.

Как правильно клеить знак Шипы?

Пока наличие знака для водителя является лучше, чем его отсутствие, стоит разобраться, каким образом следует его размещать на корпусе автомобиля. Согласно законодательству, единое место для приклеивания знака, как и его размеры, не установлены. Обязательными являются лишь некоторые нормы и параметры:

— единая установленная форма –остроугольный треугольник правильной формы;

— цвет основания только белый, буква Ш на нем – черного цвета;

— полосы по периметру исключительно красного цвета;

— расстояние между вершинами треугольника – минимум 20 см, однако максимальная длина не установлена.

Поскольку в правилах нет четких указания с выбором места для размещения наклейки, оптимальным вариантом будет прицепить ее на багажник или заднее стекло. Главное, чтобы знак не закрывал собой госномер и не мешал водителю смотреть на дорогу.

Для определенных типов автомобилей есть оптимальные места крепления. Если речь идет о внедорожнике, то выбор широкий – заднее стекло, кузов, чехол запаски. Для пикапа вариант с задним стеклом невозможен, поэтому лучше всего знак прикрепить на кузове (задняя часть).

Еще один из вариантов – найти место на тенте. В случае с седаном удачным местом для размещения будет левая часть заднего стекла – чем быстрее водитель машины сзади увидит его, тем лучше.

Как правильно установить знак “шипы”?

Согласно правилам дорожного движения автомобили оборудованные шипованными шинами должны быть обозначены знаком шипы.



1

Зачем устанавливают знак “шипы”?

На это есть ряд причин, основные из них это:

  • автомобиль с шипованными шинами имеет гораздо более короткий путь торможения, зная что автомобиль с шипами, другие водители будут соблюдать большую дистанцию,
  • при движении такого автомобиля возможен выброс шипов из под колес, что на большой скорости может повредить движущийся за ним транспорт.

Однако несмотря на то, что знак существует уже довольно давно, многие водители до сих пор не знают как правильно его наклеить. Ниже приведена небольшая, но понятная инструкция как это сделать.



2

Размер знака шипы по ГОСТ

Согласно правилам знак шипы должен быть нужного размера. Здесь необходимо знать, что обязательным является только минимальный размер, максимальный не ограничен. Знак шипы должен быть треугольной формы с равными сторонами треугольника. Основание треугольника как минимум 200 мм белого цвета. Вокруг знака должна быть окантовка красного цвета толщиной 1\10 от длины основания (например при длине основания 300 мм, толщина каймы 30 мм). Внутрь треугольника должна быть помещена черная буква Ш.

3

Расположение знака

В правилах конкретно не оговаривается точное расположения знака шипы на автомобиле. Но общепринято устанавливать его сзади автомобиля, чтобы он был виден движущимся позади водителям. Не говорится и о том, что знак должен обязательно клеиться. В продаже имеются такие знаки на магнитах и на присосках.

И помните, что установленный знак не только избавит вас от лишних проблем с ГАИ, но и может предотвратить аварию.

Знак начинающий водитель и шипы куда клеить

По своему усмотрению если на то есть основания водитель вправе установить на свой автомобиль знаки:. Шипованные колеса могут стать причиной ДТП, поскольку наличие шипов сокращает тормозной путь автомобиля. Чтобы водитель позади идущего авто располагал данной информацией, Правилами предусмотрено обязательное обозначение ТС, передвигающихся на ошипованной резине. Предупреждающий знак должен быть отчетливо виден с расстояния более 20 метров. Для этого его располагают на заднем стекле авто.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения юридических вопросов, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему — обращайтесь в форму онлайн-консультанта справа или звоните по телефонам, представленным на сайте. Это быстро и бесплатно!

Как и куда наклеить знак «Шипы»

Авто и мото. Редактор раздела Авто. Тогда знак, предупреждающий о том, что машина едет на шипах, был весьма актуален: он призывал водителей, двигающихся следом на всесезонках, соблюдать дистанцию — понятно ведь, что тормозной путь на льду на шипах заметно короче, чем на обычных покрышках. Последние изменения в законодательстве. На движение автомобиля влияет множество факторов и такой знак вводит в заблуждение других участников, не позволяя точно судить о характеристиках машины, отметили в МВД.

Помимо этого наклейка на заднем стекле ухудшает обзор и контроль за дорогой. Собственно, он был нужен и раньше, просто мало кто заморачивался с его установкой.

Максимальные размеры знака могут быть любыми. Но даже самый маленький вариант все равно выходит довольно крупным. Место расположения знака в правилах не прописано вовсе. Так что решать, куда клеить знак «Шипы», — вам. Совершенно не обязательно лепить его на заднее стекло и тем самым ограничивать обзор в зеркало заднего вида. Кстати говоря, сам знак не обязательно должен быть наклейкой: в магазинах можно найти его в исполнении на присоске, а то и в виде магнита, который легко прицепить на дверь или крышку багажника.

Такой значок легко снять в конце сезона. Наклейку тоже хорошо бы отковырять, однако если вы ее оставите на лето, трагедии не произойдет: за это вас оштрафовать не смогут.

И если на автомобиле его не будет, то инспектор оштрафует вас по статье Согласитесь, наклейка обойдется значительно дешевле. Есть ли необходимость в знаке «Шипы»? В тренде. Кино Развлечения Технологии. Полезно знать. Гороскоп ы Календарь праздников Идеи подарков Поздравления. Made on.

Установка знака «Начинающий водитель»

Он предупреждает других автовладельцев о том, что на транспортном средстве используются ошипованные шины. Несмотря на необходимость, далеко не все хозяева машин используют знак. Это связано с незнанием существующих правил.

В правилах дорожного движения, действующих на территории России, прописаны 11 знаков, обязательных к приклеиванию на средство передвижения. Опознавательные наклейки используют для выделения автомашин различных категорий.

Правила дорожного движения должны неуклонно соблюдаться абсолютно каждым водителем. От них напрямую зависит безопасность его самого и прочих автомобилистов. Законодательными нормами предусмотрено обязательное оповещение водителей на одной полосе о некоторых особенностях категорий авто. В частности, восклицательный знак на машине позиционируется как знак начинающий водитель. Такая наклейка информирует автомобилистов о том, что требуется соблюдать некоторую дистанцию.

Как правильно приклеить знак начинающий водитель

На протяжении нескольких последних десятилетий отечественный авторынок демонстрирует экспоненциальный рост. Две и больше машины в семье — сегодня уже отнюдь не экзотика. К сожалению, автомобильная экспансия сопровождается и ростом количества ДТП — желающих получить права оказывается больше, чем фирм, занимающихся обучением вождению. Конечно, рынок реагирует соответствующим образом, и очередей на обучение нет, но его качество постоянно падает, что не может не сказываться на дорожной обстановке. Одним из способов уменьшения аварийности можно назвать выделение транспортных средств, за рулём которых находится неопытный водитель. Нарушил это правило — лишаешься удостоверения со всеми вытекающими последствиями повторное обучение и сдача экзаменов. Во многих странах мира действует знак, аналогичный российскому, а его использование неопытными водителями является обязательным.

Куда можно клеить знак шипы

Есть целый ряд знаков, которые согласно правилам дорожного движения водители должны клеить на заднее или переднее стекло своей машины. Если же речь идет о пассажирском или грузовом транспорте, то обязательными являются следующие знаки:. Кроме того, есть целый ряд наклеек, которые не являются обязательными , но их тоже можно увидеть на задних или передних стеклах автомобилей:. В правилах дорожного движения четко не прописано, куда нужно вешать тот или иной знак.

Существуют правила, по которым автолюбители должны наклеивать обязательные символы на заднее или переднее стекло автомобиля, а также на кузов.

В случае его отсутствия на заднем стекле легкового автомобиля, водитель, стаж вождения которого менее х месяцев, не сможет пройти технический осмотр. Наличие данного знака предупреждает сзади идущие автомобили о том, что за рулем находится новичок, окончивший автошколу и получивший права недавно. Соответственно, они будут интуитивно готовы к любым казусам и смогут легко обогнать данное транспортное средство.

Куда клеить ПДД знаки на машину

Авто и мото. Редактор раздела Авто. Тогда знак, предупреждающий о том, что машина едет на шипах, был весьма актуален: он призывал водителей, двигающихся следом на всесезонках, соблюдать дистанцию — понятно ведь, что тормозной путь на льду на шипах заметно короче, чем на обычных покрышках. Последние изменения в законодательстве.

.

Куда по правилам ПДД клеится знак Шипы («Ш»)?

.

с какой стороны клеить знак у.

.

Знак шипы: куда клеить?

.

Восклицательный знак на машине и другие опознавательные наклейки согласно ПДД

.

.

Знак «Шипы»: обязателен или нет в 2020 году?

.

.

Вывески магазина Ежемесячно специальное открытое издание King Swooper Feather Flag Sign Kit с шестом и шипом Набор из 3 промышленных и научных ziptimberline.com

Набор шипов для грунта из 3 шт. Промышленные и научные ziptimberline.com

Ежемесячный специальный набор знаков флага с перьями King Swooper для подержанных автомобилей с шестом и заземляющим шипом, набор из 3 шт.: Ежемесячный специальный комплект знаков флага с перьями King Swooper для подержанных автомобилей с шестом и заземляющим шипом — пакет из 3: офисные товары, глобальная мода , Как один из центров онлайн-продаж, халява делится каждый день, сравнение цен онлайн-покупок., Cars Ежемесячный специальный открытый набор флаговых знаков King Swooper Feather с шестом и наземным шипом, набор из 3 бывших в употреблении, ежемесячный специальный открытый набор королевских флагов с перьями King Swooper, набор из 3 бывших в употреблении автомобилей.

Специальное ежемесячное предложение для подержанных автомобилей с изображением флага King Swooper Feather Flag, комплект из 3 шт. в упаковке

173,33 долл. США140,4 долл. США СКИДКА 18%

Артикул: ZI33101596

состоит из 100% полиэфирного трикотажа: подержанные автомобили Ежемесячный специальный открытый набор флагов King Swooper Feather с шестом и заземляющим шипом — упаковка из 3: товары для офиса.Размеров 2, и они отлично подходят для рекламы за пределами вашего бизнеса. В комплект входят мачта и крепление. Доступны различные стили. Сшитый рукав легко надевается на флагшток для легкой установки. Этот замечательный яркий флаг стандартного размера идеально подходит для привлечения внимания к вашему бизнесу. Он насыщенного цвета, хорошо виден и долговечен при любых погодных условиях и будет летать при малейшем ветре. 5 футов на 12 футов, включает в себя 3 флага стандартного размера и комплект шеста. Трикотаж из 100% полиэстера.

Специальное ежемесячное предложение для подержанных автомобилей с изображением флага King Swooper Feather Flag, комплект из 3 шт. в упаковке

Женский однотонный костюм с длинными рукавами Кардиган для офиса Тонкая короткая куртка на пуговицах: Покупайте свитера Active Sweaters ведущих модных брендов в ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА. Возможен возврат соответствующих покупок.Обработка камня_1: не улучшено. Мужская футболка с длинным рукавом без тегов Hanes 5586, 2 шт. в упаковке. Панель предназначена для подачи над головой или под землей. Дополнительный усиленный плечевой ремень повышает комфорт и долговечность верхней части спины. Мы держим пари, что вы предпочтете эти штаны вместо ваших любимых леггинсов, и вы чувствуете себя в них грубо; в это время. и срок службы, который вы ожидаете от General Motors. ПОДТЯЖКИ Держите брюки неподвижно. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата.Размер Внимание-пожалуйста, проверьте изображение диаграммы размера перед заказом. Экологические украшения без никеля. Специальное ежемесячное предложение для подержанных автомобилей с изображением флага King Swooper Feather Flag, комплект из 3 шт. в упаковке . Наш запатентованный совершенно новый узел переключателя «двойного действия» делает все, что вам нужно, в переключателе, Cocoweb 16 ‘Светодиодный потолочный светильник Oldage из цельной латуни с регулируемым шнуром — BOA-16SB — -. Небольшое водяное перо легко держать в руках детей, и оно аккуратно хранится прямо в передней крышке. Отправьте в ремонтный центр, если на цифровой микроскоп попала жидкость или другие элементы.Проявите творческий подход и используйте столовое конфетти для идей вечеринки своими руками. Купить женские короткие ботинки Parker Moc FRYE и другие ботильоны и ботинки FRYE можно на сайте. Посеребренная сетчатая цепочка со стразами, регулируемые браслеты на ногу со стразами. пожалуйста, пришлите мне электронное письмо с подробностями. 10 ломтиков плакучей ивы с корой диаметром 3 дюйма БЕСПЛАТНО США, поэтому наши цены наверняка будут лучшими. Примечание: пожалуйста, помните, что воздушные растения — это уникальные живые растения, которые могут незначительно отличаться от изображений на этом сайте. Если опция «добавить отверстие» отсутствует в списке, мы не делаем отверстия для этих предметов, подержанных автомобилей. Ежемесячный специальный набор флагов King Swooper Feather с шестом и шипами. Пакет из 3 шт. . о:, *PDF — Печатные формы и переводные картинки.Ожерелье длиной 19 с большой застежкой-пружиной. Цветочная и жемчужная лоза для волос / головной убор. но мы также приспособим график платежей, с которым вам удобно работать. Этот удивительный студийный пакет теперь доступен с ужасающе милыми кальмарами, Custom Corn Hole October Fest Graphic Cornhole Boards. Наши правила лицензирования действительно щедры и разделены на следующие разделы:. — Мы поддерживаем местное мастерство. Материал: позолоченная латунь (без свинца, кадмия и никеля). Размер: ширина 26 мм. ❤Смойте остатки теплой водой, которая легко и быстро отделится.Купить Карбюратор HIAORS GY6 50cc PD18 Carb для GY6 49cc 50cc 139QMB Четырехтактный китайский скутер-мопед Taotao Lance Eagle Tank Urban VIP Future Champion Запчасти Kymco: карбюраторы — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА возможна при соответствующих покупках. Специальное ежемесячное предложение для подержанных автомобилей с изображением флага King Swooper Feather Flag, комплект из 3 шт. в упаковке . *** размер товара не соответствует размеру домашнего животного, удобная и стабильная зарядка USB-устройств без громоздких адаптеров. но может быть открыт с помощью пилотного сигнала воздуха, чтобы обеспечить свободный поток в обычно «проверяемом» направлении. Легкая сборка: требуется простая сборка и все оборудование входит в комплект.Корректирующее белье для женщин — лучшее корректирующее белье для свадеб, Обеспечение спроса W10766544 Ручка диапазона подходит для W10430807 AP5958476 PS10067059: Обустройство дома, эти чехлы не будут повреждены под дождем, РАЗРАБОТАН И ПРОДАЕТСЯ SPORTYBELLA — семейным бизнесом в США, мы всегда стремимся предлагая нашим клиентам более качественное предпродажное и послепродажное обслуживание. 【Многофункциональность】①Доступ сбоку, 1 летнее одеяло + 2 наволочки для подушек): дом и кухня, вход представляет собой универсальную розетку, которая принимает все типы разъемов (включая: 2- и 3-контактные вилки США, подержанных автомобилей ежемесячно). Специальный открытый комплект знака флага пера короля Swooper с пакетом из 3 шт. , сенсорным экраном Tivolii Зимние теплые перчатки с подкладкой из флиса Термальные перчатки Водонепроницаемые ветроустойчивые перчатки для занятий спортом на открытом воздухе для катания на лыжах: дом и кухня.Используйте прочную липкую чашку, чтобы приклеить ее к стене, не повреждая ее.




Специальное ежемесячное предложение для подержанных автомобилей Open King Swooper Feather Flag Sign с шестом и заземляющим шипом Набор из 3 шт.

###FLAGCSS1###

Ежемесячное специальное предложение для автомобилей с пробегом King Swooper Feather Flag Sign с шестом и заземляющим шипом Набор из 3 шт.

Для подержанных автомобилей Ежемесячный специальный набор флагов с перьями King Swooper, набор из 3 шт. для подержанных автомобилей, специальный ежемесячный набор знаков для флагов с перьями King Swooper, набор из 3 шт., специальный набор из 3 шт. Комплект со стойкой и заземляющим шипом. Ежемесячный пакет из 3 бывших в употреблении автомобилей.

📍 Впервые в Spike? Начните здесь

Что такое Спайк?

Spike — это современный почтовый ящик, который объединяет вашу электронную почту, звонки, заметки, задачи и задачи в единый централизованный узел.

Будучи первой в мире электронной почтой в диалоговом режиме, Spike превращает ваши электронные письма в простые, удобные для навигации беседы в чате, которые выглядят точно так же, как цепочка текстовых сообщений, улучшая способ общения, экономя ваше время и устраняя путаницу.

Общайтесь со своими контактами в режиме реального времени, чтобы делиться самыми важными моментами жизни, когда они происходят, с помощью онлайн-заметок и задач, голосовых заметок и звонков, живого чата и многого другого.

 

Все, что вам нужно, это адрес электронной почты, чтобы начать работу, и Spike легко синхронизируется на всех ваших устройствах, поэтому вы ничего не пропустите. Это больше, чем просто электронная почта — это универсальное рабочее пространство для повышения вашей производительности и поддержания рабочего процесса в рабочем состоянии.

 

 

Для кого предназначен Спайк?

Проще говоря — Spike предназначен для всех, у кого есть адрес электронной почты. Spike идеально подходит для тех, кто хочет повысить свою продуктивность и улучшить качество общения. Он привнесет в вашу папку «Входящие» нотки общения, ориентированного на людей.

 

Независимо от того, работаете ли вы в малом или среднем бизнесе, являетесь ли вы фрилансером или частью более крупной организации, общение является ключом к успеху. В общем, Spike делает ваш рабочий день проще, а совместную работу — веселее.

 

Почему моя команда должна использовать Spike?

На самом деле нет никаких причин, по которым ваша команда не должна использовать Spike! Зачем вашей команде использовать дополнительное программное обеспечение, когда все, что вам нужно, уже может быть в вашей электронной почте? Большая часть вашего общения, как внутреннего, так и внешнего, происходит в вашей электронной почте, поэтому продолжайте разговор там, где вы уже находитесь.Нет необходимости переключаться между разными инструментами. Все, что вам нужно, встроено в вашу электронную почту с помощью Spike, включая «Голосовые сообщения», «Голосовые вызовы», «Видеозвонки» и «Группы».

 

 

Почему Спайк может помочь?

 

С шипами все просто. Превратив вашу электронную почту в естественную беседу, Spike убирает беспорядок и избавляется от бесконечных, трудно отслеживаемых веток электронной почты. Организовав папку «Входящие» на основе людей, с которыми вы общаетесь чаще всего, и сразу же переместив нежелательную почту в папку «Другие», вы сможете сначала увидеть, что важно, а потом разобраться с остальными.

 

  • Нужны каналы? У нас есть «Группы», встроенные в ваш почтовый ящик.
  • Хотите онлайн-заметки и задачи, чтобы ваши проекты были организованы и эффективны? Нет проблем — у нас есть.
  • Все ваши разные календари? Сделанный. Найдите единый календарь прямо в папке «Входящие».
  • Хотите знать, прочитал ли кто-нибудь ваше сообщение? У нас есть отчеты о прочтении.
  • Не хотите забыть ответить на письмо? Получил это тоже, с «Отложить». 

Хотите больше? Идеально! У нас есть видеовызовы, голосовые вызовы и голосовые заметки — все они доступны прямо из вашего почтового ящика, поэтому ваши дни переключения вкладок и использования нескольких приложений для достижения цели остались в прошлом.

 

В нашем бесконечном списке возможностей есть еще что-то, но лучше увидеть, так что попробуйте Spike сегодня!

 

Преимущества бесшовных рабочих процессов с Spike

 

В рамках традиционного рабочего процесса задачи, информация и документы передаются от одного участника к другому для действия, которое необходимо выполнить, например редактирования, публикации и т. д. Способность Spike обеспечить бесперебойный рабочий процесс может помочь вам улучшить этот процесс. за счет повышения командной коммуникации и производительности.Spike — единственное унифицированное рабочее пространство, которое не прерывает ваш рабочий процесс, объединяя традиционные инструменты общения с современными инструментами для совместной работы в реальном времени.

 

Преимущества наличия всего в одном месте:

  1. Повышение эффективности, производительности и организации

    Spike автоматически сортирует ваши сообщения, чтобы выделить самые важные. Эти сообщения будут появляться в папке «Приоритетные». Такие функции, как «Заметки», «Задачи» и «Видеозвонки», позволяют управлять всем рабочим процессом в одном месте — в папке «Входящие».

  2. Нет необходимости переходить от программы к программе

    Чтение сообщений, управление совместной работой, отметка задач, управление файлами и многое другое прямо из папки «Входящие» означает, что вам больше не нужно переходить к другим окнам или приложениям.

  3. Поиск по рабочему процессу в одном месте

    Найти то, что вам нужно, легко и быстро. У вас есть одно окно поиска, которое будет сканировать все ваши группы, файлы, заметки и задачи, чтобы получить то, что вам нужно.Эта сверхспособность становится еще сильнее, когда вы подключаете все свои учетные записи к единому почтовому ящику Spike.

  4. Ничего не пропустите

    Каждая часть вашего рабочего процесса сосредоточена в папке «Входящие» и синхронизирована на всех ваших устройствах, что снижает вероятность пропуска важной задачи. Если вы хотите заняться задачей позже, отложите ее и заставьте цепочку исчезнуть из папки «Входящие» и снова появиться в выбранное вами время.

Создание учетной записи на Spike

 

После загрузки Spike просто войдите в систему, указав свой адрес электронной почты.Вуаля! Вы на пути к своему самому продуктивному рабочему дню.

 

Загрузите Spike из App Store, перейдя по этой ссылке здесь. Загрузка выполняется быстро и просто, и Spike не займет все ваше драгоценное место для хранения.

💡При весе всего 33 МБ Spike намного легче, чем Outlook (260 МБ), Gmail (200 МБ) и Yahoo (165 МБ).

На каких устройствах работает Spike?

 

 

Чтобы загрузить Spike, нажмите здесь.

 

Что такое приоритетные и другие почтовые ящики?

 

При создании учетной записи Spike ваш почтовый ящик будет разделен на две категории.Они помечены как «Приоритет» и «Другое». Ваш почтовый ящик «Приоритет» — это все важные сообщения, которые вы получаете, а «Другое» — это неприоритетные сообщения, такие как информационные бюллетени, рекламные предложения и уведомления в социальных сетях.

 

Кому я могу написать?

Вы можете отправить сообщение любому из Спайка! Буквально! все, что им нужно, это адрес электронной почты.

Вам не нужно создавать учетную запись или новый адрес электронной почты, чтобы использовать Spike. Вместо этого Spike работает поверх вашей существующей электронной почты.Таким образом, вы можете отправлять и получать сообщения на/с любого адреса электронной почты.

 

Если у человека, которому вы отправляете сообщение, нет Spike, он все равно получит ваше сообщение в свой обычный почтовый ящик. Вы увидите чат, а они увидят обычную профессиональную электронную почту. Будущее электронной почты еще не мертво — это разговорный

 

Понимание вашего списка контактов

 

«Список контактов» расположен в правом нижнем углу значка рядом со значком «Группы».По умолчанию Spike отображает контакты на основе отправленных и полученных сообщений. Затем Spike сортирует контакты в зависимости от того, как часто вы отправляете сообщения каждому человеку.

 

 

Кто может написать мне?

 

Любой, кто знает ваш адрес электронной почты, может отправить вам сообщение. Независимо от того, использует ли отправитель Spike, вы получите его сообщение.

Если ваш получатель не использует Spike, он получит ваш ответ в традиционном формате электронной почты.

 

Если вы не хотите получать сообщения от кого-либо, вы можете заблокировать их.

Подробнее о блокировке отправителей.

 

 

Кто может создать учетную запись Spike?

 

Любой, у кого есть существующая учетная запись электронной почты (Gmail, Office365 (например, Outlook), Exchange, iCloud, Yahoo и любая учетная запись IMAP), может использовать Spike, если их почтовый клиент поддерживает интеграцию со Spike.

 

Что делать, если у меня несколько адресов электронной почты?

 

Отлично! Spike — идеальное место для вас благодаря единому почтовому ящику.Единый почтовый ящик объединяет почтовые ящики всех ваших учетных записей в одном удобном месте!

 

Либо просмотреть все учетные записи в едином представлении, либо сохранить их отдельно:

 

 

Как я могу добавить еще одну учетную запись?

 

Мобильный

  1. Проведите вправо, чтобы перейти в главное меню. Нажмите «Добавить учетную запись».

  2. Введите свои учетные данные и вуаля! Добавлен новый аккаунт.

 

Настольный

  1. Нажмите на изображение своего профиля в левом верхнем углу, чтобы открыть главное меню.

     

  2. После того, как вы нажмете «Добавить учетную запись», появится экран входа в систему.

  3. Введите свои учетные данные и вуаля! Добавлен новый аккаунт.

 

Цветовое кодирование учетной записи

Настройте каждую учетную запись с помощью определенного цвета, чтобы вы могли легко различать свои учетные записи электронной почты и сразу видеть, что важно.

При просмотре папки «Входящие» в качестве единой папки «Входящие» в ленте будет отображаться собственный цвет каждой учетной записи, чтобы можно было легко увидеть, к какой учетной записи принадлежит каждое электронное письмо, групповой чат, заметка и задача, а также из какой учетной записи отправляется новое сообщение.

 

 

Чтобы изменить цвета учетной записи по умолчанию:
  1. Щелкните/коснитесь своего аватара, чтобы открыть меню, и щелкните/коснитесь «Настройки»

  2. Выберите учетную запись и в разделе «Внешний вид» нажмите/коснитесь «Цвет учетной записи», чтобы выбрать цвет, который вы хотите назначить учетной записи.

Чтобы отключить цветовую кодировку учетной записи:
  1. Щелкните/коснитесь своего аватара, чтобы открыть меню, и щелкните/коснитесь «Настройки»

  2. В разделе «Внешний вид» отключите переключатель «Цветовое кодирование учетной записи»

Как отправить новое сообщение?

 

Мобильный

  1. Нажмите на значок ручки «Новое сообщение» в правом нижнем углу.

     

  2. Выберите, кому вы хотите отправить сообщение.

  3. Начните вводить сообщение. Добавляйте вложения или используйте расширенные функции, чтобы стильно донести свое сообщение.

 

Настольный

  1. Щелкните значок ручки «Новое сообщение» в левом нижнем углу ленты «Входящие». нижний, правый угол.

  2. Выберите, кому вы хотите отправить сообщение.

  3. Начните вводить сообщение. Добавляйте вложения или используйте расширенные функции, чтобы стильно донести свое сообщение.

     

Объяснение значков чата

 

Любопытны маленькие значки, которые появляются в вашем приложении Spike? Вот краткое описание каждого из них:

  • Зеленая галочка

    Ваше сообщение отправлено.

  • Зеленый глаз

    Ваше сообщение было просмотрено получателем. В группах зеленый глаз означает, что его прочитал как минимум 1 член группы.

  • Серая стрелка вверх

    Сообщение отправляется.

  • Красный восклицательный знак

    Ваше сообщение не было отправлено.

Добавление календарей в Spike

 

Мобильный

Календарь Spike

на мобильном устройстве синхронизируется с календарем вашего устройства по умолчанию. Другими словами, любая учетная запись электронной почты, синхронизированная с календарем вашего телефона, будет синхронизироваться с Spike Calendar.

  1. Нажмите «Настройки» и прокрутите вниз до «Пароли и учетные записи».

  2. Нажмите «Добавить учетную запись»

  3. В зависимости от типа используемого календаря выберите один из вариантов ниже.

    Если вашего календаря нет в списке, коснитесь опции «Другое» внизу. CalDAV* — это один из вариантов, который необходимо добавить с помощью параметра «Другое». Для получения дополнительной информации о CalDAV вы можете прочитать больше здесь.

  4. Если вы выбрали один из указанных выше вариантов, введите данные своей электронной почты, и ваша учетная запись будет добавлена.

     

    Если вы выбрали «Другое»: в разделе «Календари» выберите «Добавить CalDAV» или «Подписной календарь» по мере необходимости.

    Обратите внимание:

     

    Хотя Spike поддерживает CalDav, мы полагаемся на функции, которые есть не у всех поставщиков электронной почты. Если ваш провайдер электронной почты поддерживает CalDav, календарь должен работать.

    Сам протокол IMAP не связан с календарем или контактами, но мы синхронизируем контакты и календари для учетных записей, которые его поддерживают.

     

    В некоторых случаях все еще могут быть проблемы, и в этом случае, пожалуйста, свяжитесь с [email protected], и мы сможем помочь.

     

    👉 Нажмите здесь, чтобы прочитать полное описание того, как добавлять календари на iPhone.

     

    * CalDAV (распределенное создание и управление версиями календаря) — это сетевой протокол, позволяющий получать доступ к файлам календаря и синхронизировать их.

 

Настольный

 

В настольном приложении/веб-браузере Spike Spike будет синхронизироваться с календарями, которые уже подключены к вашей учетной записи электронной почты.

 

Например: если вы используете учетную запись Gmail в настольном приложении Spike и хотите, чтобы ваш календарь iOS отображался в Spike, вам необходимо сначала подключить свой календарь iOS к календарю Google (подробнее о добавлении вашего iCal в Календарь Google).

 

Spike извлечет информацию из календарей, синхронизированных с подключенными учетными записями электронной почты.

 

Календарь Spike

в настольном приложении работает с Gmail, iCloud, Exchange и Office 365 .
Обратите внимание, что учетные записи IMAP будут синхронизировать только электронные письма и папки, но не календари и контакты.

 

 

Описание календаря

 

Мобильный

 

Если виджеты включены, уведомления о ваших предстоящих событиях будут отображаться поверх ваших сообщений.

 

 

Коснитесь значка часов, чтобы просмотреть прошедшие и предстоящие события. В календаре коснитесь синего значка плюса внизу, чтобы добавить событие.Событие появится в вашем календаре Spike, а также в вашем личном мобильном календаре.

 

 

Настольный

Щелкните значок часов в левом нижнем углу папки «Входящие», чтобы перейти к временной шкале встроенного календаря. Щелкните число в правом верхнем углу календаря, чтобы перейти к текущему дню.

 

 

Нажмите значок плюса внизу, чтобы добавить новое событие.

 

Используйте число в правом верхнем углу вашего календаря, чтобы перейти к текущему дню (если вы еще не на нем).

 

Щелкните серый значок календаря в левом верхнем углу, чтобы выбрать, какой календарь вы хотите отобразить.

 

 

👉 Чтобы подключить свой календарь, читайте здесь.

👉 Если вы не видите свой календарь в Spike, вот шаги для решения проблемы.

Знак Spike

— магазин знаков UK

«Отличное качество, воспользуюсь им снова»

«»Отличный сервис и качество, именно то, что мы хотели»»

«Отличный сервис.Именно то, что я искал, и потрясающее качество.»

«Мы были очень довольны покупкой 2 знаков. Теперь мы установили их на место, и они выглядят очень хорошо и пока хорошо справляются с остановкой транспортных средств, использующих наш привод в качестве поворотного круга.»

«Элегантный зеленый знак, очень практичный»

«Отличный знак. Быстрая доставка. Буду обращаться в эту компанию снова»

«Умный и стильный; он будет хорошо смотреться за пределами моего нового дома, когда я туда доберусь, но он не кажется таким прочным, как я ожидал, хотя время может доказать, что я ошибался.»

Этот знак-шип выполнен из алюминиевого композита. Его легко установить на подъездной дорожке, так как шипы позволяют легко работать в траве или почве. Это может служить важным сообщением, например, чтобы другие знали, что здесь нет парковки.

Текст напечатан цифровым способом с использованием наших УФ-принтеров, что означает, что он полностью защищен от атмосферных воздействий и не выцветает.

  • Качественная темно-зеленая панель с порошковым покрытием ACM (алюминиевый композитный материал)
  • Доступен в 2 размерах
  • 30 см x 27 см: площадь знака 30 см x 15 см — длина шипов 12 см
  • 30 см x 45 см: площадь знака 30 см x 30 см — длина шипов 15 см
  • Цифровая печать с использованием УФ-отверждаемых красок
  • 100% защита от атмосферных воздействий
  • Простота установки

Каждый знак дома поставляется со всеми необходимыми деталями.Мы максимально упростили установку вашего нового знака в кратчайшие сроки.

Знак шипа поставляется с:

Доступны обновления

Что такое АКМ?
Алюминиевый композитный материал (ACM) состоит из заднего слоя пластика, зажатого между двумя тонкими слоями алюминия. Он широко используется в индустрии вывесок, так как он легкий и прочный. Мы поставляем лучшие материалы для наших вывесок, поэтому мы используем только оригинальный Alupanel® ACM.Это отличный выбор для окружающей среды, поскольку каждая панель обычно на 85% состоит из переработанного материала.

Простота в обслуживании 
Вам не нужно ничего делать с вывеской дома после ее установки. Однако, если он испачкается, вы можете быстро протереть его влажной тканью… не беспокойтесь о деталях вывески, они не оторвутся.

Возникли проблемы с установкой знака?  
Не стесняйтесь обращаться к нам через Live Chat, чтобы получить полезный совет.

Держатель таблички T-Cade Ground

Независимо от того, являетесь ли вы новичком или профессионалом, когда речь идет об художественном оформлении, мы здесь, чтобы дать вам рекомендации, необходимые для того, чтобы конечный результат был идеальным для печати.

У меня нет готового изображения для печати, можете ли вы сделать его для меня?

Если у вас есть такие элементы, как текст, логотипы и текст, мы можем взять их и создать для вас готовый к печати дизайн-макет за небольшую дополнительную плату. У нас есть несколько пакетов с доступной ценой, доступных для удовлетворения любых требований.Многие из наших продуктов имеют услугу дизайна в качестве дополнительной опции для мгновенного заказа. Для продуктов, которые не пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы обсудить ваш бриф. Посетите нашу страницу дизайнерских услуг, чтобы узнать больше.

Предоставлю готовые работы для печати.

Многие из наших печатных продуктов имеют возможность загружать свои иллюстрации на страницу продукта. Если этот вариант недоступен, вскоре после размещения заказа вы получите электронное письмо с инструкциями о том, как отправить файлы с изображениями.

Чтобы избежать задержек в производстве, следуйте приведенным ниже рекомендациям, чтобы убедиться, что ваша работа готова к работе. Если у вас есть какие-либо вопросы, пожалуйста, не стесняйтесь связаться с одним из наших сотрудников.

Разрешение

— 100 точек на дюйм в полном размере

Как правило, 100 dpi является хорошим стандартом для изображений с размером документа, установленным на полный размер широкоформатной печатной продукции. Например, если вы хотите заказать отпечаток размером 40 x 60 дюймов, размер изображения должен быть 4000 пикселей (40 x 100) на 6000 пикселей (60 x 100) при разрешении 100 точек на дюйм.

100% масштаб при 100 dpi
Масштаб 50% при 200 dpi
Масштаб 25% при разрешении 400 dpi
Масштаб 10 % при разрешении 1000 dpi

Если какой-либо размер продукта превышает 5000 мм, пожалуйста, сделайте рисунок в масштабе. Для очень больших художественных работ, таких как стены-щиты, можно использовать масштаб 10% при разрешении 1000 точек на дюйм для изображений или использовать векторы, поскольку они будут идеально масштабироваться.

Кровотечение — 5 мм по всему периметру при окончательном размере отпечатка

Если вы создаете иллюстрацию заданного размера для оборудования, используйте шаблон продукта.Если вы заказали продукт нестандартного размера, убедитесь, что вы включили 5 мм кровотечения в свой дизайн.

Добавлять обрез к иллюстрации нужно только в том случае, если рисунок доходит до края страницы. Если весь ваш текст и изображения находятся в центре дизайна и окружены простым белым фоном, вам не нужно беспокоиться о растекании печати, поскольку края будут плавно сливаться с общим дизайном. Если какой-либо элемент дизайна доходит до края страницы, необходим отступ 5 мм со всех сторон.

цвета — Пожалуйста, предоставьте все цвета как CMYK+

Компьютерные экраны используют RGB, а принтеры — CMYK. Вы можете спросить, почему это важно? Большинство цветов, созданных в RGB, могут быть близки к CMYK, но некоторые не могут. Если цвета имеют решающее значение, мы всегда предлагаем заказать печатную пробную версию.

Что еще можно сделать, чтобы проверить свои цвета:

— Используйте откалиброванный монитор (цвета варьируются от монитора к монитору)
— Используйте распечатанный образец цвета CMYK, чтобы проверить ваши цвета
— Не проверяйте образцы с настольного принтера
— Закажите у нас распечатку (это может привести к увеличению времени выполнения)

Шрифты — вставьте, сведите или преобразуйте в кривые

Для широкоформатной печати мы рекомендуем использовать минимальный размер шрифта 8pt (кегль).

Предпочтительным форматом файлов для готовых к печати иллюстраций является PDF. Пожалуйста, убедитесь, что вы встроили любые шрифты для идеального результата. При работе с файлами других форматов убедитесь, что шрифты, используемые в вашем дизайне, преобразованы в контуры и включают все шрифты и изображения, используемые при отправке файлов нам.

Вам нужны доказательства?

Если вы предоставляете готовые к печати иллюстрации, мы не предоставляем стандартную цветопробу, что позволяет нам быстрее доставить вам печать. Если вам нужны доказательства, пожалуйста свяжитесь с нами, чтобы обсудить.Мы предоставляем бесплатную проверку технических файлов в стандартной комплектации, как описано ниже.

Мы можем предоставить машинную пробную печать за дополнительную плату в размере 25 фунтов стерлингов плюс доставка. Это включает в себя печать цветопробы формата A3 на машине, которая будет использоваться для изготовления вашего документа. окончательная печать. Это даст вам точное представление о цвете. Если вы пользуетесь нашей услугой по проектированию, мы отправляем PDF-доказательство, которое является точным представление контента и позиционирование. Это не точный показатель конечного цвета из-за ограничений экранов.

Сроки доставки для печати указаны с момента утверждения художественного произведения, поэтому имейте в виду, что запрос подтверждения может привести к задержке даты доставки вашего продукта.

Доставка

После того, как вы разместили заказ, предварительная дата отправки и доставки будет отправлена ​​вам по электронной почте.

Стандартный срок доставки полиграфической продукции составляет 2-5 рабочих дней после утверждения иллюстраций к печати. Если у вас есть конкретные сроки, пожалуйста, свяжитесь с нами чтобы убедиться, что мы можем удовлетворить это.Пожалуйста, убедитесь, что ваша работа соответствует приведенным выше рекомендациям, чтобы избежать задержек с утверждением.

Бесплатная проверка художественного произведения

Перед печатью мы проведем бесплатную техническую проверку вашей работы. Если возникнут какие-либо проблемы, мы свяжемся с вами, чтобы сообщить, что нужно сделать измененный.

Подбор цвета

Наши принтеры и носители соответствуют самым высоким стандартам и тщательно откалиброваны для получения ярких полноцветных отпечатков. Процесс включает в себя печать CMYK и это означает, что не всегда возможно сопоставить цвета Pantone, но они будут преобразованы в ближайший эквивалент CMYK.

Если точное совпадение цветов имеет решающее значение, отправьте нам физическую копию другого печатного материала, например фирменного бланка или брошюры, и мы проверим ваш файл перед отправкой. печать. Если мы не сможем достичь разумного соответствия, мы позвоним вам для обсуждения.

Пожалуйста, присылайте физические образцы по адресу: Discount Displays, 31-35 Wortley Road, Croydon, Surrey, CRO 3EB.

Комплект 17-дюймовых парусных знаков премиум-класса (двухсторонний с заземляющим шипом) — Haven Solutions

Комплект 17-футовых парусных знаков премиум-класса (двусторонний с заземляющим шипом) — Haven Solutions

Спасибо, что заглянули! Отправьте нам письмо по адресу [email protected]решения!

Комплект 17-дюймовых парусных знаков Premium Blade (двусторонний с заземляющим шипом)

Комплект 17-дюймовых парусных знаков Premium Blade (двусторонний с заземляющим шипом)

511,00 $

В наличии

Добавить в корзину

$511.00

17′ Premium Blade Sail Sign Kit (двухсторонний с заземляющим шипом)

  • Описание
  • Персонализация
  • Отзывы (0)

Описание

6 .Флаг укреплен карманами на шесте из нейлоновой тесьмы. Флаг крепится к фиксированному крюку с помощью банджи-шнура. Однородная конструкция накладки из углеродного композита с глянцевой черной краской. Полированные алюминиевые концы сегментов штанги с воротником и эргономичная, армированная резиной рукоятка. Заземленный шип изготовлен из хромированной стали с покрытием из нейлонового полимера. Пожизненная гарантия на оборудование; один год гарантии на заземляющий шип. Размер: 9″ Ш x 9″ В x 61″ Г

Персонализация, индивидуальная для ВАС

При добавлении товара в корзину используйте текстовое поле и кнопку загрузки выше, чтобы дайте нам знать, что вы хотели бы выгравировать или напечатать на изделии.Загрузите логотип или дизайн, и если вы покупаете более одного, обязательно укажите персонализацию каждого из них.

 

Есть вопросы? Напишите нам по адресу [email protected]!

 

*Обратите внимание, что не все награды могут быть напечатаны в цвете. Мы стараемся, чтобы это было указано выше, независимо от того, может ли оно быть напечатано в цвете или нет, однако по мере изменения производственных процессов некоторые награды поступают к нам без печати, хотя раньше мы могли их напечатать. Это бывает редко, но если это произойдет, мы свяжемся с вами и как можно быстрее разработаем альтернативный план!

Наши художники разработают для вас индивидуальный дизайн и отправят вам пробный образец по электронной почте.Как только вы подтвердите свое доказательство, мы запустим ваш заказ в производство и отправим его вам!

Разместите свой заказ

Получите бесплатную проверку и внесите любые изменения

Получите вашу персональную вещь!


Только зарегистрированные клиенты, которые приобрели этот продукт, могут оставить отзыв.

Вы только что добавили этот товар в корзину: Просмотреть корзину Продолжить

COVID-19 СООБЩЕНИЕ: Мы ОТКРЫТЫ и ВЫПОЛНЯЕМ ЗАКАЗЫ с заботой о безопасности. Спасибо!
Наш интернет-магазин новый… Мы добавляем продукты ежедневно — если вы не можете что-то найти, напишите нам по адресу [email protected]! Уволить

Употребление наркотиков и свиданий для изнасилования

Напитки с добавлением алкоголя или наркотиков могут сделать человека очень уязвимым. В Соединенном Королевстве за подпитку чьего-либо напитка можно получить до 10 лет тюремного заключения. 1

Всегда следите за своим напитком, чтобы кому-то было труднее его подсыпать. Это руководство может помочь вам распознать симптомы алкогольного опьянения, чтобы вы могли быстро действовать, чтобы помочь себе или другой возможной жертве этого преступления.

Подсыпать чью-то выпивку — серьезное преступление

Подмешивание напитка — будь то дополнительная порция алкоголя или другого вещества — является серьезным преступлением. Любому, кто это сделает, грозит серьезное уголовное преследование, и это может иметь очень опасные последствия для здоровья человека, чей напиток подсыпан.

Добавление напитка с целью сделать кого-то более уязвимым для нападения, изнасилования или грабежа является еще более серьезным преступлением. Секс с кем-то без его согласия всегда является преступлением, независимо от обстоятельств.Нападение, изнасилование и грабеж влекут за собой дополнительные наказания.

Что такое добавление напитков?

Напиток человека может быть подсыпан, чтобы сделать его более уязвимым по разным мотивам, включая кражу или сексуальное насилие.

Различные типы добавок могут включать добавление в напитки следующих веществ:

  • Алкоголь

  • Препараты для изнасилования на свидании

  • Незаконные наркотики

  • Лекарства, отпускаемые по рецепту (например,грамм. стимуляторы, транквилизаторы, седативные средства, опиаты)

Всплеск может случиться с любым типом напитка, будь то алкогольный или безалкогольный. Последствия могут быть непредсказуемыми, но, вероятно, будут более серьезными, если кто-то, кто выпил алкоголь, также употреблял больше алкоголя или других наркотиков. Это происходит из-за комбинации эффектов от разных препаратов, действующих одновременно.

В напитки можно добавлять порции алкоголя, чтобы сделать их крепче, в результате чего кто-то опьянеет намного быстрее, чем ожидалось.Или иногда в напиток добавляют наркотики, специально предназначенные для того, чтобы кого-то вывести из строя.

Из-за отсутствия официальной статистики трудно узнать истинный масштаб преступления. Часто люди не сообщают об употреблении алкоголя, потому что не помнят подробностей ночи или чувствуют себя смущенными.

Это может быть пугающим опытом, и важно уметь распознавать признаки того, что ваш напиток был подмешан, или как помочь тому, кто, как вы подозреваете, стал жертвой.

Что такое наркотики для изнасилования на свидании?

Рогипнол (или Руфи) и Гамма-гидроксибутират (ГОМК) являются наиболее известными препаратами для «изнасилования на свидании». Оба препарата могут использоваться для совершения физических и сексуальных посягательств, поскольку они могут успокоить жертву или вывести ее из строя, делая ее более уязвимой для нападения.

Если в ваш напиток добавлено лекарство от изнасилования на свидании, маловероятно, что вы увидите, почувствуете запах или вкус какой-либо разницы, независимо от того, какой тип напитка вы пьете. Большинство препаратов для изнасилования на свидании начинают действовать в течение 15-30 минут, а симптомы обычно длятся несколько часов.

«Снадобья для изнасилования на свидании» могут быть без запаха, цвета и вкуса. Они также покидают тело в течение короткого промежутка времени, что затрудняет их обнаружение.

Рекреационные наркотики, такие как экстази, диэтиламид лизергиновой кислоты (ЛСД), кетамин и другие «наркотики для вечеринок», иногда используются для подпитки алкогольных напитков. Смешивание алкоголя и стимуляторов может быть очень опасным и может вызвать серьезные проблемы со здоровьем, от тошноты до комы.

Симптомы выброса алкоголя

Эффекты подпитки зависят от того, чем вас подсыпали.Ваши симптомы могут включать:

  • Пониженные запреты

  • Потеря равновесия

  • Чувство сонливости

  • Проблемы со зрением

  • Путаница

  • Тошнота

  • Рвота

  • Бессознательное состояние

Симптомы будут зависеть от множества факторов, таких как вещество или смесь веществ (включая дозу), ваш размер и вес, а также количество алкоголя, которое вы уже выпили.

Если вы или ваш друг начинаете чувствовать себя странно или пьянее, чем следует, немедленно обратитесь за помощью.

Как избежать употребления алкоголя

Обеспечение безопасности всех мест проведения мероприятий от нападений и домогательств, таких как распитие спиртных напитков, является коллективной ответственностью. Все места, имеющие лицензию на продажу алкоголя, несут юридическую ответственность за общественную безопасность и предотвращение преступлений и беспорядков в своих помещениях, и это контролируется местными властями. 2,3 Эти лицензии на продажу алкоголя обычно включают условия, обеспечивающие надлежащую безопасность мест проведения мероприятий и обучение персонала.

В некоторых заведениях выдают пробки для бутылок, чтобы никто не уронил что-нибудь в ваш напиток.

Существуют также наборы для тестирования, которые можно использовать для обнаружения определенных наркотиков. Но они не проверяют наличие всех видов наркотиков, поэтому не всегда работают, и они не могут обнаружить лишний алкоголь в вашем напитке.

Сообщить о подозрении на употребление алкоголя в заведение и в полицию — это один из способов убедиться, что принимаются достаточные меры для обеспечения безопасности людей.

Как отдельные лица, мы тоже можем кое-что сделать, чтобы не стать жертвой пьянства.

Всплеск выпивки может случиться в любой ситуации, дома или на вечеринке. Однако есть несколько вещей, которые вы можете сделать, чтобы защитить себя:

  • Никогда не оставляйте свой напиток без присмотра, будь он алкогольным или нет

  • Не принимайте напиток от незнакомого человека

  • Избегайте чрезмерного употребления алкоголя, придерживаясь британских рекомендаций по употреблению алкоголя с низким уровнем риска

  • Держитесь вместе с друзьями и берегите друг друга

Как помочь другу, которого, по вашему мнению, усыпили

Если вы считаете, что ваш друг подсыпал алкоголь, и у него проявляются какие-либо из описанных выше симптомов, вы можете сделать несколько вещей, чтобы помочь:

  • Сообщить менеджеру бара, вышибале или сотруднику

  • Оставайтесь с ними и продолжайте разговаривать с ними

  • Вызовите скорую помощь, если их состояние ухудшится

  • Не отпускай их домой одних

  • Не позволяйте им уйти с кем-то, кого вы не знаете или кому не доверяете

  • Не позволяйте им пить больше алкоголя — это может привести к более серьезным проблемам

Что делать, если вы считаете, что подверглись нападению

Одним из эффектов наркотиков для изнасилования на свидании может быть амнезия или потеря памяти.Это означает, что вы, возможно, не будете уверены, подверглись ли вы нападению. Но если вы подозреваете, что подверглись физическому или сексуальному насилию, важно сообщить об этом кому-нибудь. Попробуйте довериться кому-то, кому вы доверяете, например, другу или члену семьи.

Вы можете обратиться в полицию или больницу скорой помощи. Если вы чувствуете, что не можете сделать это сразу, есть телефоны доверия благотворительной организации Rape Crisis, куда вы можете обратиться за поддержкой и советом:

.
  • Англия и Уэльс: 0808 802 9999 (12–2.19:00 и 19:00-21:30 каждый день)
  • Шотландия: 0808 801 0302 или текстовое сообщение 07537 410 027 (с 18:00 до полуночи каждый день)
  • Северная Ирландия: 08000 246 991 (понедельник и четверг, с 18:00 до 20:00)

Если вы или кто-то из ваших знакомых пострадали от преступления, в том числе от сексуальных домогательств или любого рода сексуального вреда, вы можете получить помощь и поддержку. Victim Support — независимая благотворительная организация для жертв и свидетелей преступлений. Они предлагают бесплатную конфиденциальную помощь всем, кто пострадал от сексуальных домогательств.Позвоните по номеру 08 08 16 89 111 или посетите веб-сайт службы поддержки жертв.

Посетите веб-сайт поддержки жертв

Механизмы проникновения коронавируса в клетку, опосредованные вирусным шиповидным белком

Вирусы. 2012 июнь; 4(6): 1011–1033.

Сандрин Белузар

1 Центр инфекций и иммунитета Лилля, CNRS UMR8204, INSERM U1019, Институт Пастера Лилля, Северный университет Лилля, 59000 Лилль, Франция; Электронная почта: [email protected]

1 Центр инфекций и иммунитета Лилля, CNRS UMR8204, INSERM U1019, Институт Пастера в Лилле, Университет Лилль-Норд-де-Франс, 59000 Лилль, Франция; Электронная почта: рф[email protected] * Автор, которому следует направлять корреспонденцию; Электронная почта: [email protected]; Тел.: +1-607-253-4021; Факс: +1-607-253-3384.

Поступила в редакцию 8 мая 2012 г.; Пересмотрено 13 июня 2012 г.; Принято 14 июня 2012 г.

Авторские права © 2012 принадлежат авторам; лицензиат MDPI, Базель, Швейцария. Эта статья цитировалась другими статьями в PMC.

Abstract

Коронавирусы представляют собой оболочечные вирусы с положительной цепью РНК, которые реплицируются в цитоплазме. Чтобы доставить свой нуклеокапсид в клетку-хозяин, они полагаются на слияние своей оболочки с мембраной клетки-хозяина.Спайковый гликопротеин (S) опосредует проникновение вируса и является основной детерминантой клеточного тропизма и патогенеза. Он классифицируется как слитый белок класса I и отвечает за связывание с рецептором на клетке-хозяине, а также за опосредование слияния мембраны хозяина и вируса — процесс, обусловленный основными конформационными изменениями белка S. В этом обзоре обсуждаются механизмы проникновения коронавируса с акцентом на различные триггеры, используемые коронавирусами для инициации конформационного изменения белка S: связывание с рецептором, воздействие низкого pH и протеолитическая активация.Мы также подчеркиваем общие черты между S-белками коронавируса и другими слитыми белками вирусов класса I, а также отличительные особенности, которые придают коронавирусам различные характеристики тропизма, патогенности и межвидовой передачи хозяина.

Ключевые слова: коронавирус, спайк, проникновение вируса, слияние, протеолитическая активация Вспышка (атипичной пневмонии) потрясла мир в 2002–2003 гг.Интерес к этому семейству вирусов вырос после этой эпидемии, что привело к выявлению многих новых членов семейства. Этот эпизод также пролил свет на способность коронавирусов переходить из одного вида в другой. До того, как в 2003 году они приобрели значение для общественного здравоохранения, заболевания, связанные с коронавирусами, представляли в основном ветеринарный интерес. Коронавирусы поражают большое количество млекопитающих и птиц, вызывая респираторные и кишечные заболевания, а в некоторых, более редких случаях, гепатит и неврологические заболевания.Инфекция может быть острой или персистирующей [2].

Коронавирусы классифицируются по четырем разным родам, исторически основанным на серологическом анализе, а теперь и на генетических исследованиях: альфа-, бета-, гамма- и дельта-CoV (). Коронавирусы принадлежат к подсемейству Coronavirinae , которое вместе с Torovirinae образуют семейство Coronaviridae в порядке Nidovirales .

Коронавирусы представляют собой оболочечные, сферические или плеоморфные вирусы с типичными размерами от 80 до 120 нм.Они обладают одноцепочечным РНК-геномом с положительным смыслом, закрытым 5′, длиной от 26,2 до 31,7 т.п.н., что является самым длинным среди всех РНК-вирусов. Геном состоит из шести-десяти открытых рамок считывания (ОРС). Первая ORF включает две трети генома и кодирует белки-репликазы, тогда как последняя треть содержит гены структурных белков в фиксированном порядке: (HE)-S-E-M-N (A). Между этими генами присутствует различное количество ORF, кодирующих дополнительные белки. Геном упакован в спиральный нуклеокапсид, окруженный двойным липидным слоем хозяина.Оболочка вириона содержит по крайней мере три вирусных белка: шиповидный белок (S), мембранный белок (M) и белок оболочки (E) (B). Кроме того, некоторые коронавирусы также содержат гемагглютининэстеразу (HE). В то время как белки M и E участвуют в сборке вируса, шиповидный белок является ведущим медиатором проникновения вируса. Спайковый белок также является основным игроком в определении круга хозяев [3,4].

Проникновение вируса зависит от тонкого взаимодействия между вирионом и клеткой-хозяином.Инфекция инициируется взаимодействием вирусной частицы со специфическими белками на поверхности клетки. После первоначального связывания рецептора оболочечным вирусам необходимо слить свою оболочку с мембраной клетки-хозяина, чтобы доставить свой нуклеокапсид в клетку-мишень. Белок спайка играет двойную роль при проникновении, опосредуя связывание рецептора и слияние мембран. Процесс слияния включает большие конформационные изменения шиповидного белка. Коронавирусы используют различные рецепторы и триггеры для активации слияния, однако фундаментальные аспекты, обеспечивающие этот начальный этап жизненного цикла вируса, сохраняются.В этом обзоре мы рассмотрим стратегии проникновения коронавирусов и то, как эти механизмы связаны с тропизмом и патогенностью хозяина.

Таблица 1

Роды, виды и использование рецепторов-хозяев коронавирусов.

5
Род Вид Рецептор
     Коронавирус кошек (FCoV) серотип 2 Аминопептидаза N
     Коронавирус собак (CCoV) серотип 2 Аминопептидаза N
Трансмиссивный вирус гастроэнтерита (TGEV) аминопептидазы N
• Человеческий коронавирус 229Е аминопептидазы N
• Человеческий коронавирус NL63 ACE2
• Свиной Эпидемический Диарея коронавируса (PEDV) аминопептидазы N
• Коронавирус летучей мыши-носорога HKU2
• SCOTOPHILUS BAT Coronavirus 512/05
• Miniopterus BAT Coronavirus 1
• Miniopterus BAT Coronavirus HKU8
Betacoronavirus • Бетакоронавирус 1 включен:
     Коронавирус крупного рогатого скота (BCoV) Neu 5,9 Ac2
     Коронавирус человека OC43 (HCoV-OC43) Neu 5,9 Ac2
     Коронавирус лошадей (ECoV)
Enterical Cononavirus (HECOV)
Кремагглютинирующий вирус энцефаломиелит (PHEV)
• мышиный коронавирус, включающий:
Существующие виды вируса гепатита мышей (MHV) CEACAM1
Рац коронавируса
Puffinosis вируса
• Человеческий коронавирус HKU9
• летучие собаки битой коронавируса HKU4
• Tylonycteris биту coronvirus HKU5
• SARSr-CoV (Коронавирус, связанный с SARS), включающий
человека SARS-COV ACE2
Rhinolophus BAT Viruses
Gamma-Coronavirus • Avian Coronavirus, содержащий:
IBV
Различные коронавирусы инфекции Турции, фазана, утки, гуся и голубя
• Белуга кит Coronavirus SW1
Delta-Coronavirus • Bulbul Coronavirus HKU11
• Коронавирус молочницы HKU12
• Коронавирус Munia HKU13

Изображен геном четырех разных коронавирусов. Открытая рамка считывания (ORF)1a/b окрашена в красный цвет. Ген HE, присутствующий в MHV-A59, представлен фиолетовым цветом. Ген структурных белков S (синий), Е (розовый), М (темно-розовый) и N (голубой) локализован в 3′-части генома. ORF, кодирующие дополнительные белки, представлены серым цветом. Структура вириона коронавируса (

B ).

2. Белок шипа

Белок шипа представляет собой большой трансмембранный белок типа I, содержащий от 1160 аминокислот для вируса инфекционного бронхита птиц (IBV) и до 1400 аминокислот для коронавируса кошек (FCoV).Кроме того, этот белок сильно гликозилирован, так как содержит от 21 до 35 сайтов N-гликозилирования. Спайковые белки собираются в тримеры на поверхности вириона, образуя характерную «корону» или короноподобный вид. Эктодомен всех шиповидных белков CoV имеет одинаковую организацию в двух доменах: N-концевой домен, называемый S1, который отвечает за связывание с рецептором, и С-концевой домен S2, ответственный за слияние (рис. 2 и 3). Заметное различие между шиповидными белками разных коронавирусов заключается в том, расщепляется он или нет во время сборки и экзоцитоза вирионов.За некоторыми исключениями, у большинства альфа-коронавирусов и бета-коронавируса SARS-CoV вирионы содержат нерасщепленный спайковый белок, тогда как у некоторых бета- и всех гамма-коронавирусов белок расщеплен между доменами S1 и S2, как правило, фурином, аппаратом Гольджи. -резидентная протеаза хозяина (). Интересно, что в пределах видов бета-коронавируса мышиного гепатита (MHV) разные штаммы, такие как MHV-2 и MHV-A59, предъявляют разные требования к расщеплению. Это имеет важные последствия для их фузогенности, как подробно описано в разделе 4.Субъединица S2 является наиболее консервативной областью белка, тогда как последовательность субъединицы S1 расходится даже среди видов одного коронавируса. S1 содержит два субдомена, N-концевой домен (NTD) и С-концевой домен (CTD). Оба способны функционировать как рецептор-связывающие домены (RBD) и связывать различные белки и сахара.

Спайковый белок коронавируса представляет собой слитый белок класса I [5]. Для этого класса гибридных белков характерно образование α-спиральной спиральной структуры, которые содержат в своей С-концевой части области, которые, как предполагается, имеют α-спиральную вторичную структуру и образуют спиральные спирали.Белок HA гемагглютинина гриппа является прототипом члена семейства гибридных белков класса I и одним из наиболее хорошо охарактеризованных на сегодняшний день [6]. HA синтезируется как предшественник HA0 и собирается в тримеры. Белок становится способным к слиянию путем расщепления НА0 на НА1 и НА2. Гибридный пептид, представляющий собой очень консервативную гидрофобную последовательность, расположен на N-конце НА2. В конформации перед слиянием центральная спираль тримера образована тремя длинными спиралями с тремя более короткими спиралями, упакованными вокруг них.В этой конформации слитый пептид защищен, спрятан внутри поверхности тримера. Во время слияния происходят два основных изменения конформации. При эндосомальном закислении неструктурированный линкер становится спиральным, что позволяет образовать длинную спираль в N-концевой части. В этой конформации, называемой пре-шпилькой, слитый пептид направляется к мембране-мишени, где затем встраивается, соединяя мембраны вируса и клетки-мишени. Второе конформационное изменение состоит из инверсии С-спирали, которая упаковывается в бороздки N-концевых тримерных спиральных спиралей, образующих пучок из шести спиралей (6HB).В полученной конформации трансмембранный домен и слитый пептид, заякоренный в мембране-мишени, оказываются в непосредственной близости друг от друга, облегчая слияние вирусной и клеточной мембран.

Шипообразные белки коронавируса содержат два гептадных повтора в своем домене S2, что типично для слитых белков вирусов класса I. Гептадные повторы содержат повторяющийся гептапептид a bc d efg , причем a и d являются гидрофобными.Для SARS-CoV и MHV были решены структуры HR после слияния; они образуют характерный шестиспиральный пучок [7,8]. Функциональная роль HR MHV и SARS-CoV была подтверждена мутацией ключевых остатков и экспериментами по ингибированию с использованием пептидов HR2 [9,10].

Рисунок 2

Схема спайкового белка тяжелого острого респираторного синдрома (SARS)-CoV. Эктодомен шиповидного белка состоит из доменов S1 и S2. Домен S1 содержит домен связывания рецептора и отвечает за распознавание и связывание с рецептором клетки-хозяина.Домен S2, ответственный за слияние, содержит предполагаемый пептид слияния (синий) и гептадный повтор HR1 (оранжевый) и HR2 (коричневый). Трансмембранный домен представлен фиолетовым цветом. Сайты расщепления указаны стрелками.

Важная роль шиповидного белка в клеточном тропизме была продемонстрирована на примере химерных вирусов. Существует много штаммов вируса гепатита мышей (MHV), вирусов, поражающих главным образом головной мозг и печень. Из-за различных типов заболеваний, связанных с различными штаммами MHV, участие их спайкового белка в тканевом тропизме было тщательно изучено.Штамм JHM обладает высокой вирулентностью, вызывая тяжелый энцефалит, который часто приводит к летальному исходу, но плохо гепатотропен. Штамм MHV-A59 вызывает гепатит и легкий энцефалит. MHV-2 обладает высокой гепатотропностью. Используя химерные вирусы между этими различными штаммами, было показано, что белок S связан с тропизмом и патогенезом MHV. Введение генов JHM или MHV-2 S на фоне MHV-A59 увеличивает нейровирулентность и гепатотропность рекомбинантного вируса соответственно [11,12]. Однако замена последовательности белка S JHM на ген S MHV-A59 на фоне JHM не придает гепатотропизму, что позволяет предположить, что другие факторы модулируют тропизм вируса.Из персистентно инфицированных клеток микроглии был выделен мутантный штамм MHV-A59 с измененным тропизмом [13]. Единственная мутация Q159L в домене S1 ответственна за снижение репликации в печени и низкий гепатотропизм вируса [14]. Важная роль спайкового белка в тропизме показана и для других коронавирусов. IBV является важным патогеном домашних птиц, который размножается в дыхательных путях, а также в эпителиальных клетках почек, яйцевода и кишечника. In vitro клинические штаммы ИБК инфицируют только клетки почек куриных эмбрионов и растут на яйцах с эмбрионами. Штамм IBV Beaudette представляет собой аттенуированный штамм, полученный серийным пассированием IBV на яйцах. IBV Beaudette, помимо клеток почек куриного эмбриона, также инфицирует клетки CEF, BHK-21 и Vero. Замена гена S на фоне Бодетта на таковой у штамма М41 ИБК ограничивает тропизм вируса к первичным куриным клеткам [15]. Однако in vivo этот химерный вирус имеет аттенуированный фенотип Бодетта.Эти данные показывают, что изменение тропизма Бодетта в культуре клеток в основном определяется белком S, хотя авирулентность также является результатом аттенуирующих мутаций в других генах [16].

Коронавирусы кошек (FCoV) представляют собой увлекательный пример критического участия спайкового белка в тропизме и патогенезе [17]. В пределах этого вида альфакоронавируса есть два известных серотипа, 1 и 2, на основе серологических и генетических характеристик их шипа. Кроме того, в каждом серотипе есть два биотипа, оба из которых связаны с чрезвычайно контрастным патологическим потенциалом.Кошки обычно заражаются кошачьим кишечным коронавирусом (FECV), биотипом, который вызывает обычно бессимптомные или легкие инфекции кишечного тракта и может сохраняться у хозяина. Напротив, у некоторых кошек, инфицированных FCoV, спорадически развивается неизменно фатальное иммуноопосредованное заболевание, называемое кошачьим инфекционным перитонитом (FIP). В этом случае возбудитель называется вирусом инфекционного перитонита кошек (FIPV). Поразительной характеристикой FIPV, которая отличает их от FECV, является их способность эффективно реплицироваться в моноцитах и ​​макрофагах [18].Считается, что это переключение тропизма с кишечного эпителия на подвижные клетки моноцитов/макрофагов является решающим переломным моментом на пути к развитию FIP, поскольку оно позволяет вирусу распространяться по организму хозяина.

В настоящее время известно, что мутации FECV у персистентно инфицированного хозяина вызывают его превращение в вирулентный FIPV [19]. Хотя было высказано предположение, что мутации или делеции в определенных генах, таких как 3c и 7b, могут быть связаны с появлением FIPV [19], причинные мутации для переключения биотипа до сих пор неизвестны.Однако есть доказательства того, что мутации в спайковом гене могут играть ключевую роль в передаче тропизма от кишечного эпителия к макрофагам. Ротье и его коллеги сосредоточились на генетически близкой и адаптированной в лабораторных условиях паре FECV 79–1683 и FIPV 79–1146 типа 2 [20]. Хотя оба вируса имеют схожие характеристики роста в укоренившихся кошачьих эпителиальных клетках, только FIPV 79–1146, но не FECV 79–1683, обладает способностью эффективно инфицировать и реплицироваться в макрофагах. Используя систему целевой рекомбинации РНК [21], авторы смогли создать рекомбинантный химерный вирус для определения областей генома, важных для инфицирования макрофагов, происходящих из костного мозга.Они обнаружили, что замена гена S FIPV 79-1146 на ген FECV 79-1683 в генетическом фоне FIPV 79-1146 сильно снижает способность химерного рекомбинантного вируса инфицировать макрофаги по сравнению с рекомбинантным FIPV 79-1146 дикого типа. Кроме того, были созданы дополнительные химеры для более точного картирования областей спайков, которые важны для тропизма макрофагов. Неожиданно было обнаружено, что С-концевая область шипа (от остатка 874 до С-конца), а не N-концевая область (которая содержит домен, связывающий рецептор S1), отвечает за тропизм макрофагов в этой системе.В общей сложности десять аминокислотных замен дифференцируют С-концевые области FECV 79–1683 и FIPV 79–1146, однако точные мутации, вызывающие переключение тропизма, еще предстоит определить [20].

В то время как FCoV серотипа 2 был изучен относительно подробно, в частности, потому, что он легче размножается in vitro , FCoV серотипа 1, которые имеют большее клиническое значение, поскольку они более распространены, менее изучены. И хотя можно предположить, что вирусы обоих серотипов ведут себя сходным образом на протяжении большей части своего жизненного цикла, остается выяснить, будет ли один и тот же или разный набор мутаций причиной смены биотипа у двух серотипов.Таким образом, необходимы дополнительные усилия для изучения FCoV серотипа 1. Такие усилия прольют свет на патогенез FCoV.

Различие в тропизме, опосредованное S-белками, является результатом различных механизмов, связанных с двумя основными функциями белка: связыванием с рецептором и слиянием, которые будут обсуждаться далее.

3. Связывание рецепторов и тропизм

Первым идентифицированным рецептором коронавируса был рецептор MHV в 1991 году [22]. MHV связывается с молекулой адгезии CEACAM1 (раково-эмбриональный антиген-молекула адгезии клеток) для инфицирования клеток.CEACAM1 представляет собой трансмембранный белок типа I, принадлежащий к суперсемейству иммуноглобулинов. CEACAM1 является многофункциональным белком, который, среди прочего, играет роль в адгезии и передаче клеточных сигналов. Эктодомен CEACAM1 содержит четыре константных участка Ig, подобных доменам, N, A1, B и A2. N-концевой домен N CEACAM1 участвует в связывании MHV [23,24]. Существуют две аллельные формы CEACAM1, CEACAM1a и CEACAM1b. Оба они могут функционировать как рецепторы, однако связывание с помощью CEACAM1a гораздо эффективнее [23].Было изучено участие использования рецепторов и тропизма штаммов MHV. Показано, что нейровирулентность ЮГМ связана с быстрым распространением вируса в головном мозге, частично независимым от CEACAM1. In vitro , MHV-JHM требует CEACAM1 для проникновения, однако in vivo , JHM способен заражать мышей ceacam-/-, но с летальной дозой в 100 раз выше [25]. Как следствие, было высказано предположение, что JHM в отсутствие CEACAM1 использует альтернативный, менее эффективный рецептор, который еще предстоит определить, чтобы инициировать инфекцию.После первичного заражения вирус может очень быстро размножаться за счет слияния клеток независимо от рецептора (распространение, независимое от рецептора) [26]. In vivo , MHV-A59 строго зависит от CEACAM1 в плане инфицирования [27], но персистентная инфекция мышиных клеток приводит к появлению вирусов с расширенным тропизмом [28]. Вирус MHV/BHK заражает клетки зависимым от гепарансульфата и независимым от CEACAM1 образом из-за приобретения двух сайтов связывания гепарансульфата в белке S [29,30].Было показано, что оба сайта связывания необходимы для приобретения CEACAM1-независимого фенотипа [30].

Для штамма JHM существует множество изолятов, различающихся по уровню нейровирулентности. Вирулентность коррелирует с длиной гипервариабельной области, присутствующей в S1. Изолят MHV-4 JHM содержит самую длинную область и связан с независимым слиянием и распространением клеток CEACAM1 [31]. Предполагается, что конформационным изменениям шиповидного белка способствует менее устойчивая ассоциация субъединиц S1 и S2 [32].Это говорит о том, что чем выше фузогенный потенциал шиповидного белка, тем меньше вирус зависит от своего рецептора для проникновения.

Среди альфа-коронавирусов два человеческих вируса (HCoV-229E и HCoV-NL63) могут быть обнаружены наряду с вирусами, поражающими животных, и могут быть причиной тяжелых заболеваний: трансмиссивный гастроэнтерит CoV (TGEV) и собачий CoV (CCoV) вызывают кишечные заболевания у свиней и собак соответственно, в то время как кошачьи коронавирусы вызывают кишечные и системные заболевания у кошек.

HCoV-229E, TGEV, FCoV серотипа 2 и CCoV используют белок аминопептидазы N (APN) своего естественного хозяина в качестве рецептора.Интересно, что помимо своего специфического APN хозяина, эти вирусы способны связываться с APN кошек. Было высказано предположение, что эти вирусы могли произойти от общего предка коронавируса, заражающего кошачьих, который использовал APN в качестве рецептора [2]. APN, также известный как CD13, представляет собой трансмембранный белок типа II, экспрессируемый на апикальном домене эпителиальных клеток дыхательных и кишечных путей. APN представляет собой Zn 2+ зависимую протеазу, которая преимущественно расщепляет пептиды или белки с N-концевой нейтральной аминокислотой.Показано, что различия в тропизме этих вирусов обусловлены способностью их шиповидных белков распознавать небольшие видоспецифичные аминокислотные различия в АПН [33]. Спайковые белки HCoV-229E, TGEV, FCoV и CCoV обладают высокой гомологией, однако связывающие домены расположены в негомологичных областях.

TGEV инфицирует эпителиальные клетки тонкой кишки, но также способен инфицировать клетки дыхательных путей. В середине 1980-х годов в Бельгии был выделен аттенуированный вариант TGEV, свиной респираторный коронавирус (PRCoV).Этот вирус представляет собой пример измененной тропности к тканям из-за делеции, происходящей в гене шипа [34]. В отличие от TGEV, PRCoV поражает только клетки легочного эпителия. Оба шиповидных белка связывают APN свиньи, при этом рецептор-связывающий домен расположен между остатками 522 и 744 белка TGEV S. Спайковый белок TGEV обладает гемагглютинирующей активностью, отсутствующей у PRCoV, поскольку эта активность содержится в делетированной N-концевой части белка [35]. Одним из последствий отсутствия активности является неспособность PRCoV размножаться в кишечнике.Гемагглютинирующая активность была картирована с остатками 145–155 шиповидного белка TGEV, и было показано, что мутация, отменяющая эту активность, снижает энтеропатогенность вируса [36]. Кроме того, исследование показало, что активность TGEV по связыванию сиаловой кислоты отвечает за связывание дополнительного белка, называемого муциноподобным гликопротеином (MPG), в мембранах щеточной каемки [37]. Было высказано предположение, что это связывание может защитить вирус от действия эмульгаторов кишечника [38].Роль NTD и связывания углеводов в TGEV дает интересное представление об энтеротропизме коронавируса, свойстве, которое обычно приписывают вирусам без оболочки. Роль NTD в других кишечных альфа-коронавирусах, таких как FCoV и собачий коронавирус (CCoV), до сих пор неизвестна.

Другие коронавирусы обладают активностью связывания сиаловой кислоты, в частности бычий коронавирус (BCoV) и человеческий HCoV-OC43 [39]. Способность бетакоронавирусов связывать углеводы была сопоставлена ​​со складчатой ​​структурой галектина, присутствующей в S1 NTD [40].До сих пор, кроме связывания конъюгатов Neu5,9Ac2, для этих вирусов не идентифицированы другие специфические рецепторы. Они принадлежат к группе бета-коронавирусов и содержат белки HE, поэтому они напоминают вирус гриппа, поскольку имеют фермент, разрушающий рецепторы. Однако точная роль HE при проникновении коронавируса остается неясной. IBV также проявляет активность связывания сиаловой кислоты, но роль такой активности в патогенности неизвестна. Для IBV расширенный круг хозяев штаммов Beaudette в клеточной культуре был связан с наличием сайта связывания гепарина в шиповом белке [41].

Другой пример связывания гепарансульфата обнаружен с пиком FCoV типа 1. Инкубируя вирусы с гепарин-агарозными гранулами (гепарин имеет структуру, очень похожую на гепарансульфат, и используется в анализах связывания), де Хаан и его коллеги продемонстрировали количественным определением вирусной РНК, ассоциированной с гранулами, что вирус FIPV типа 1, адаптированный к клеточной культуре Штамм UCD1 может связывать гепарин [42]. Очень интересно, что предполагаемый мотив связывания гепарина, предложенный авторами, находится в дефектном сайте расщепления фурином на границе между доменами S1 и S2.FIPV типа 2 79–1146, а также UCD1-связанный FIPV типа 1 UCD, который содержит функциональный сайт расщепления фурином, не были способны связывать гранулы гепарина. Это подтверждает представление о том, что мотив узнавания нерасщепленного гепарансульфата необходим для активности связывания. Кроме того, авторы обнаружили, что инокуляция UCD1 в клетки FCWF в присутствии конкурирующего гепарина значительно снижает инфекцию. Инфекция FIPV типа 2 79–1146 не была затронута этим анализом конкуренции гепарина.

Как упоминалось выше, спайка белка/рецептора коронавируса является ключевым фактором, определяющим тропизм.Чтобы заразить новый вид хозяина, коронавирусы должны адаптироваться к рецептору своего нового хозяина либо путем мутации, либо путем рекомбинации с коронавирусом, заражающим их нового хозяина. В случае с SARS-CoV вирус появился в 2002 году на розничных рынках живых животных в Китае. Родственные вирусы были выделены из гималайских пальмовых циветт, енотовидных собак и китайских хорьков; однако считается, что эти животные были не резервуаром вируса, а промежуточными хозяевами во время скачка вида. Рецептором SARS-CoV является ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2) [43].ACE2 представляет собой интегральный мембранный белок типа I, обильно экспрессируемый в легочной ткани; это монокарбоксипептидаза, гидролизующая ангиотензин II. Анализ использования рецепторов коронавируса человека и гималайской пальмовой циветы показал, что человеческий SARS-CoV может связывать ACE2 как человека, так и пальмовой циветты, тогда как вирус пальмовой циветы не может связывать hACE2. Показано, что адаптация вируса к человеку была обусловлена ​​двумя точечными мутациями, K479N и S487T, в связывающем домене S-белка SARS-CoV [44]. Дальнейшая характеристика Wu et al .адаптивных мутаций RBD привели к выявлению мутаций, усиливающих взаимодействие либо с ACE2 человека, либо с пальмовой циветтой [45]. Вирусы, подобные SARS-CoV, были выделены у летучих мышей. В этом случае проникновение происходит не через ACE2, и их рецептор(ы) неизвестен/неизвестен; однако замена аминокислотной последовательности, обнаруженной между остатками 323 и 505, на соответствующую последовательность RBD SARS-CoV достаточна для использования человеческого рецептора ACE2 [46].

Коронавирусы способны использовать многие молекулы клеточной поверхности — как белки, так и углеводы — для проникновения в клетки-мишени.Было признано, что зависимые от кальция (C-типа) лектины хозяина играют роль в инфицировании SARS-CoV, IBV и FCoV. Неинтегрин, захватывающий молекулу межклеточной адгезии-3, специфичную для дендритных клеток (DC-SIGN), представляет собой лектин С-типа, экспрессируемый на макрофагах и дендритных клетках. Его функция заключается в распознавании паттернов гликозилирования с высоким содержанием маннозы, обычно встречающихся у вирусных и бактериальных патогенов. Вирусная эксплуатация DC-SIGN лучше всего задокументирована в ВИЧ-1, который прикрепляется через N-гликозилированные остатки на поверхности вируса.ВИЧ-1 использует DC-SIGN, чтобы подорвать иммунную защиту хозяина, проникая и инициируя инфекцию дендритных клеток или макрофагов напрямую ( in-cis ) или перемещаясь с клеткой в ​​лимфатические узлы, где вирус передается Т-клеткам. в иммунологическом синапсе ( ин-транс ). Как и gp120 ВИЧ-1, шип коронавируса сильно гликозилирован, что дает вирусу возможность взаимодействовать с лектинами хозяина, такими как DC/L-SIGN. Сообщается, что L-SIGN, который экспрессируется на эндотелиальных клетках печени, а также в легких, является альтернативным рецептором для SARS-CoV и HCoV-229E [47,48]. In-trans передача SARS-CoV от дендритных клеток к восприимчивым клеткам-мишеням была задокументирована. Хотя изученные дендритные клетки были способны переносить инфекционные вирионы через синапсоподобную структуру, инфицирования in-cis не наблюдалось [49]. Сайт-направленный мутагенез идентифицировал гликозилирование остатков аспарагина 109, 118, 119, 158, 227, 589 и 699 как критическое для входа, опосредованного L-SIGN/DC-SIGN [50].

FIPV является примером коронавируса, который нацелен на иммунные клетки, особенно на моноциты и макрофаги, для достижения системного распространения.Инфицирование непермиссивных типов клеток было достигнуто за счет экзогенной экспрессии DC-SIGN, демонстрируя, что FIPV как 1-го, так и 2-го типа используют DC-SIGN в качестве корецептора или альтернативного рецептора для fAPN соответственно [51,52]. В случае с IBV эксперименты показали, что DC-SIGN и близкородственный L-SIGN усиливают инфекцию других непермиссивных клеток независимым от сиаловой кислоты образом [53]. Роль лектинов в инфекции ИБК in vivo не установлена.

4.Вхождение и слияние

Внедрение оболочечного вируса может происходить непосредственно на клеточную поверхность после связывания с рецептором или после интернализации посредством эндоцитоза со слиянием, происходящим в эндосомальном компартменте. Слияние вирусных мембран с мембранами хозяина обусловлено большими конформационными изменениями шиповидного белка. Со временем коронавирусы модифицировали свои шиповидные белки, что привело к разнообразию триггеров, используемых для активации их слияния. Эти конформационные изменения могут быть инициированы связыванием с рецептором, но могут нуждаться в дополнительных триггерах, таких как подкисление pH или протеолитическая активация.Механизмы проникновения коронавируса сложны и различаются между видами и штаммами коронавируса. Например, в зависимости от штамма MHV слияние может происходить непосредственно на клеточной поверхности после связывания с рецептором или после эндоцитоза. Штамм JHM MHV-4 сливается при нейтральном рН, но вирус был обнаружен и в эндосомальных везикулах [54]. Вполне вероятно, что MHV-4 способен проникать непосредственно на клеточную поверхность или через эндосомальный путь. Выбор механизма входа может зависеть от типа клетки. В обоих случаях слияние запускается исключительно связыванием с рецептором.Действительно, было показано, что инкубация шиповидного белка JHM с растворимой формой рецептора CEACAM1 вызывает модификации гидрофобности S и конформационные изменения области S2 [55, 56, 57]. Кроме того, JHM способен распространяться из клеток DBT в клетки BHK, которые не экспрессируют рецептор MHV. Инкубация с растворимым рецептором увеличивает это независимое от рецептора размножение [58]. Способность шиповидного белка сливаться при нейтральном pH зависит от свойств механизма слияния. Вариант MHV-4, выделенный из персистентно инфицированных клеток, требует воздействия низкого pH для продуктивной инфекции.Различие в рН, необходимом для слияния между мутантным вирусом и вирусом дикого типа, было связано с тремя точечными мутациями в областях гептадных повторов [59]. Сообщалось о противоречивых результатах относительно механизмов проникновения MHV-A59. Qui и др. сообщили, что родительский штамм MHV-A59 был нечувствителен к лизомотропному агенту, тогда как рекомбинантный штамм, содержащий спайковый белок MHV-2, для проникновения зависит от низкого pH [60]. Действительно, для проникновения MHV-2 требуются эндосомальные протеазы с низким pH-активированием (катепсин B и L), и, если сайт расщепления введен в спайковый белок MHV-2, проникновение вируса больше не требует этих протеаз; эти данные свидетельствуют в пользу рН-независимого слияния, индуцированного связыванием с рецептором.Эйфарт и др. . бросил вызов этому сценарию. Комбинируя различные подходы к заражению и микроскопии, авторы показали, что инфекция MHV-A59 чувствительна к лизомотропному агенту и что вирус интернализуется, что позволяет инициировать инфекцию, предполагая, что для запуска вирусного слияния требуется подкисление pH [61]. Вполне вероятно, что связывание с рецептором является ключевой детерминантой проникновения MHV, однако потребность в дополнительном триггере слияния остается неясной. Для MHV-2 был дополнительно охарактеризован механизм эндоцитоза: вирус интернализуется клатрин-зависимым путем, не зависящим от адаптера eps15 [62].

Подкисление эндосомального pH является триггером слияния для многих вирусов, таких как вирус гриппа и вирус везикулярного стоматита (VSV). В течение многих лет считалось, что слияние IBV происходит при нейтральном pH, поскольку инфицированные клетки образуют большие синцитии при нейтральном pH. Однако это было показано Chu et al. что инфекция блокируется лизомотропным агентом и что процесс слияния IBV активируется низким pH [63]. Авторы непосредственно оценили зависимость слияния IBV от pH в анализах детушения флуоресценции.Они показали, что слияние происходит при кислом рН, при этом полумаксимальная скорость слияния происходит при рН 5,5. Чтобы заразить клетки, IBV проникает путем эндоцитоза. Ингибирующие препараты клатрин-опосредованного пути, такие как хлорпромазин, также устраняли инфекцию ИБК. Вирионы IBV содержат расщепленные шиповидные белки, при этом расщепление происходит между доменами S1 и S2. Штамм IBV Beaudette имеет особенность содержать второй сайт расщепления фурином в домене S2 шипа. Инфекция и образование синцитиев подавляются присутствием ингибитора фурина.Мутация или делеция сайта расщепления S1-S2 в шиповидном белке Бодетта задерживает размножение вируса, но не отменяет образование синцитиев. Эти мутанты все еще чувствительны к ингибированию фурином. Мутанты, содержащие минимальный сайт расщепления XXXR690/S, являются инфекционными, однако продуктивная инфекция зависит от сериновых протеаз [64].

Взаимосвязь между расщепляемостью шиповидного белка коронавируса и его фузогенностью была предметом споров для исследователей в течение многих лет.Когда белки слияния вирусов экспрессируются на клеточной поверхности, активация слияния вирусов приводит к слиянию клеток и образованию гигантских многоядерных клеток, называемых синцитиями. Обычно считается, что образование синцитиев, при котором происходит слияние клеточных мембран, отражает процесс слияния между мембранами вируса и клетки-хозяина. Однако в настоящее время выясняется, что механизмы слияния клеток и вирусов могут различаться. В самом деле, из-за различий в таких факторах, как кривизна мембраны и/или плотность гликопротеинов оболочки вируса, процессы, вовлеченные в слияние клеток и вирусов, могут существенно различаться механистически.Кроме того, не для всех коронавирусов наблюдается образование синцитиев в инфицированных клетках. Расщепление слитого белка является общей характеристикой вирусных слитых белков класса I. Для гриппа большое значение в патогенности вируса имеет природа сайта расщепления НА. Событие расщепления, необходимое для подготовки белка к слиянию, может происходить на пути секреции фурином или во время инфицирования протеазами дыхательных путей хозяина. Штаммы вируса гриппа, расщепляемые фурином хозяина, высокопатогенны, поскольку вызывают системную инфекцию [65].Для коронавирусов хорошо установлена ​​взаимосвязь между расщеплением белка S и его способностью к межклеточному слиянию. Расщепленные белки проявляют более высокую склонность к слиянию клеток. Введение мутации H716D в шиповидный белок MHV-A59 сильно нарушало расщепление белка и замедляло слияние клеток [66]. Спайковый белок штамма MHV-2 не расщепляется, и мутация последовательности сайта расщепления MHV-A59 соответствующей последовательностью S-белка MHV-2 задерживает слияние клеток.Введение сайта расщепления в спайковый белок MHV-2 индуцирует образование синцитиев при нейтральном рН. In vitro расщепление шиповидного белка играет важную роль в фузогенности, однако роль в слиянии вирусов и патогенности менее ясна. Например, MHV-A59 с мутацией H716D очень похож по патогенности на вирус дикого типа [67]. Вирусный штамм MHV-A59, продуцируемый в присутствии ингибитора фурина для блокирования расщепления шипа, проникает в клетки с кинетикой, сходной с вирусом дикого типа [68].Более того, исследование Хингли и его сотрудников показало, что шип вируса, выделенный из гомогенатов печени мышей, инфицированных MHV-A59, не расщеплялся, что является дополнительным свидетельством того, что протеолитическая обработка шипа не является существенной для проникновения и распространения in vivo []. 69]. Для коронавирусов, у которых есть шип, который расщепляется фурином, важно отметить, что эта протеаза принадлежит к семейству ферментов, называемых пропротеинконвертазами (ПК), которое состоит из девяти членов [70]. Наряду с фурином шесть других протеаз PC, PC1, PC2, PC4, PC5, PACE4 и PC7, имеют один и тот же основной мотив узнавания: R/K-[X] 0,2,4,6 -R/K (где X — любая аминокислота) [71].Остается определить, могут ли другие ПК, связанные с фурином, также распознавать и расщеплять шиповидные белки коронавируса.

Для некоторых коронавирусов, которые содержат нерасщепленный белок-шип на своей поверхности, таких как MHV-2 и SARS-CoV, было показано, что они зависят от эндосомальных протеаз для продуктивного проникновения. Действительно, проникновение MHV-2 зависит от катепсина L и B клетки-хозяина [60]. Эта зависимость устраняется введением сайта расщепления фурином между доменами S1 и S2.Для SARS-CoV связь между расщеплением и слиянием более сложная (2). Было показано, что инфекция SARS-CoV ингибируется лизомотропными агентами из-за ингибирования низкорН-активной протеазы катепсина L [72]. Кроме того, слияние клетки с клеткой и вируса с клеткой может быть вызвано обработкой трипсином [73]. Это привело к гипотезе о том, что слияние SARS-CoV было вызвано протеолитическим процессингом шиповидного белка. Было показано, что разные протеазы усиливают инфекцию SARS-CoV in vitro : трипсин, термолизин и эластаза [74].Анализ обработки шиповидного белка SARS-CoV трипсином и эластазой пролил свет на слияние SARS-CoV [75,76]. Было показано, что трипсин активирует слияние путем последовательного расщепления шиповидного белка в двух дискретных сайтах. Первое событие расщепления на границе S1-S2 (R667), вероятно, облегчает второе событие расщепления в положении R797 (область S2′), которое отвечает за активацию слияния [75,77]. Второе расщепление происходит непосредственно на N-конце слитого пептида. Расщепление по R667 не требуется для активации слияния, но оно усиливает слияние клетки с клеткой или вируса с клеткой.Эластаза опосредует расщепление по остатку Т795, а не непосредственно рядом с пептидом слияния. Спайковый белок SARS-CoV проявляет определенную степень пластичности в положении сайта расщепления для праймирования слияния. Наоборот, когда НА вируса гриппа расщепляется эластазой Pseudomonas , положение расщепления сдвигается на одну аминокислоту, что приводит к некомпетентности слияния [78]. Остаток 795 S SARS-CoV, вероятно, менее доступен для расщепления, чем остаток 797, и слияние, вызванное расщеплением в положении 797, более эффективно.Разница в эффективности слияния также может быть результатом его расположения на N-конце слитого пептида. Эти данные предполагают, что слияние модулируется пространственной регуляцией сайта расщепления. Было показано, что катепсин L расщепляет спайковый белок SARS-CoV в граничной области S1-S2 по остатку T678, однако до сих пор окончательно не продемонстрировано расщепление в области S2’ [79].

SARS-CoV способен сливаться непосредственно на поверхности клетки в присутствии соответствующей экзогенной протеазы.Считается, что этот путь проникновения в 100-1000 раз более эффективен, чем эндосомальный путь [74]. Доступность протеаз во внеклеточной среде является ключевым фактором тропизма. SARS-CoV является респираторным патогеном, и давно известно, что протеазы из дыхательных путей, такие как члены подсемейства трансмембранных протеаз/серинов (TMPRSS), TMPRSS2 или HAT (TMPRSS11d), способны расщеплять НА вируса гриппа [80]. ]. Действительно, TMPRSS2 и HAT (или TMPRSS11d) способны индуцировать слияние SARS-CoV [81,82,83,84].Заражение клеток-мишеней S-псевдотипированными вирионами SARS-CoV менее чувствительно к ингибиторам катепсина, когда клетки-мишени экспрессируют TMPRSS2 [83,84]. S-псевдотипированные вирионы SARS-CoV, продуцируемые в клетках, экспрессирующих TMPRSS2, по-прежнему полагаются на эндосомальный катепсин для проникновения, хотя они менее чувствительны к нейтрализующим антителам. Этот эффект связывают с высвобождением фрагментов шипов в супернатанте, которые привлекают антитела и могут иметь большое значение для распространения вируса [83]. Было показано, что процессинг шиповидного белка с помощью HAT и TMPRSS2 может различаться: HAT расщепляет S-белок SARS-CoV в основном на R667, тогда как TMPRSS2 расщепляет белок в нескольких местах, особенно в области вблизи S2′, хотя точное расположение сайты расщепления этой протеазы еще предстоит определить [81].Экспрессия HAT в клетках-мишенях не придает NH 4 Cl или ингибитору катепсина устойчивости к проникновению S-псевдотипированного вириона SARS-CoV [84]. Вероятно, пространственная и временная модуляция активации протеазами играет важную роль. Расщепление поступающих вирионов до их связывания с клеткой, вероятно, прервало бы инфекцию за счет инактивации вириона. Интересно, что TMPRSS2 связан с ACE2, рецептором SARS-CoV [81]. TMPRSS2, вероятно, играет ключевую роль в первоначальном заражении и распространении вируса; однако важность этой протеазы при инфекции SARS-CoV обусловлена ​​тонким балансом между двумя антагонистическими эффектами на инфекцию: выделением рецептора и активацией слияния.

Таблица 2

Протеолитическая обработка шиповидного белка SARS-CoV, важного для слияния клеток и/или проникновения вируса. В таблице представлены различные протеазы, участвующие в расщеплении шиповидного белка SARS-CoV, и их роль в активации межклеточного слияния и/или проникновения вируса.

Вирус запись + n.д. +
Протеаза Расщепление сайт слияния клеток-клеток
катепсина L [72,79] S1 / S2 HTVSLLRSTSQKSIVAYTMSL +
эластазы [74,85] S2′ LPDPLKPTKRSFIEDLLFNKV +
НАТ (TMPRSS11d) [84] S1 / S2 HTVSLLRSTSQKSIVAYTMSL + —
Plasmin [82] S1/S2 HTVSLLRSTSQKSIVAYTMSL
S2′ LPDPLKPTKRSFIEDLLFNKV
+ +
TMPRSS11A [82] S1 / S2 htvsllrstsqsivaytmsl
S2 ‘ lpdplkptkrsfiedllfnkv
N.d. +
TMPRSS2 [81,83,84] Несколько сайтов +
трипсина [7373,75] S1 / S2
HTVSLLRSTSQKSIVAYTMSL S2 LPDPLKPTKRSFIEDLLFNKV
+ +

Для FCoV хорошо изученный пример роли протеолитической активации спайков получен в результате исследования пары FCoV типа 2 FECV 79–1689–1683 и FIPV 783 ].Используя специфические ингибиторы катепсина, авторы показали, что два штамма существенно различаются по использованию ими активирующих протеаз, используемых во время проникновения. В то время как штамм FECV 79–1683, как было обнаружено, зависит как от катепсина B, так и от L, а также от кислой эндосомальной среды, штамм FIPV 79–1146 зависел только от активности катепсина B. Это было дополнительно подтверждено биохимическим анализом, который показал, что FECV 79–1683 может расщепляться катепсином B и L, тогда как FIPV 79–1146 может расщепляться только катепсином B.На основании молекулярных масс продуктов расщепления катепсина было высказано предположение, что сайт расщепления находится не в пограничной области между доменами S1 и S2, а в области, расположенной в С-концевой части S2 [86].

5. Гибридный пептид

Важнейшей особенностью любого вирусного гибридного белка является так называемый «гибридный пептид», представляющий собой относительно неполярный участок из 15–25 аминокислот, взаимодействующий с мембранами и играющий существенную роль в гибридизации реакции [6,87,88].Слитые пептиды вирусных слитых белков класса I обычно классифицируют как «внешние» или «внутренние» в зависимости от их расположения относительно сайта протеолитического расщепления [89]. Одной из ключевых особенностей вирусных слитых пептидов является то, что в конкретном семействе вирусов существует высокая консервативность аминокислотных остатков; однако между слитыми пептидами разных семейств вирусов мало сходства [90]. В случае НА гриппа, который является классическим примером «внешнего» пептида слияния, N- и С-концевые части пептида слияния (которые являются α-спиральными) проникают через наружный листок мембраны-мишени с излом на поверхности фосфолипидов.Внутренняя часть перегиба содержит гидрофобные аминокислоты с заряженными остатками на внешней поверхности [91]. Внутренние слитые пептиды (например, обнаруженные в GP вируса Эбола) часто состоят из петель, но также требуют смеси гидрофобных и гибких остатков, подобных N-концевым слитым пептидам [87,92]. Важно отметить, что, несмотря на наличие ключевых гидрофобных остатков, вирусные слитые пептиды часто не проявляют значительных участков гидрофобности и могут содержать один или несколько заряженных остатков [93].

На сегодняшний день точное местонахождение и последовательность слитого пептида коронавируса неизвестны [94], однако, по аналогии с другими слитыми белками вирусов класса I, предполагается, что он находится в домене S2. Расположение слитого пептида наиболее тщательно изучено для SARS-CoV. Три мембранотропные области в SARS-CoV S2 первоначально были предложены в качестве потенциальных гибридных пептидов [95,96]. Основываясь на анализе последовательности и анализе гидрофобности белка S с использованием шкалы межфазной гидрофобности Wimley-White (WW), первоначальные указания на то, что слитый пептид SARS-CoV находится в N-концевой части HR1 [5,97], который сохраняется в Coronaviridae .Мутагенез этого предсказанного пептида слияния ингибировал слияние в анализах синцитий S-экспрессирующих клеток [98]. Эта область SARS-CoV также была проанализирована другими группами в биохимических анализах [96, 99, 100] и была определена как область Второй мировой войны (остатки 864–886), хотя Sainz et al. [99] фактически идентифицировал другую, менее консервативную и менее гидрофобную область (WW I, остатки 770–778) как наиболее важную для слияния. Пептиды, соответствующие этой области, также изучались в биохимических анализах другими группами [101].Кроме того, было показано, что третья ароматическая область, примыкающая к трансмембранному домену (проксимальный к мембране домен), важна для слияния SARS-CoV [102, 103, 104, 105]. Этот проксимальный к мембране домен, вероятно, действует совместно со слитым пептидом в эктодомене S2, опосредуя окончательное слияние бислоя, как только конформационные изменения обнажают слитый пептид в эктодомене.

Основываясь на обнаружении того, что S SARS-CoV может быть протеолитически расщеплен в нижнем положении в S2, в остатке 797 [75,76,77], были проведены дальнейшие исследования, чтобы определить, может ли расщепление в этом внутреннем положении в S2 подвергать домен со свойствами вирусного слитого пептида.Изучение мутагенеза остатков S 798–815 SARS-CoV, участка, расположенного между областями Первой и Второй мировых войн, в сочетании с смешиванием липидов и структурными исследованиями выделенного пептида, показало важность этой области как нового гибридного пептида. для SARS-CoV. Последовательность, расположенная непосредственно на С-конце сайта расщепления R797 S SARS-CoV, представляет собой SFIEDLLFNKVTLADAGF, и примечательно, что как R797, так и эта нижестоящая последовательность высоко консервативны в Coronaviridae . В частности, мотив IEDLLF показал лишь минимальную дивергенцию с редкими консервативными заменами [106].

Исследование предложенного слитого пептида IEDLLF в контексте структурной модели гомотримера S SARS-CoV показывает, что он расположен снаружи посередине тримера и, как таковой, должен располагаться надлежащим образом для функционирования в качестве пептид слияния. Примечательно, что L803, L804 и F805 являются начальными остатками основной антигенной детерминанты SARS-CoV S (Leu 803–Ala 828), способной индуцировать нейтрализующие антитела [107]. Этот эпитоп SARS-CoV также гомологичен иммунодоминантному нейтрализующему домену (эпитоп 5B19) на субъединице S2 MHV [108].Хотя кристаллическая структура эктодомена SARS-CoV S еще не решена, доступна прогностическая модель четвертичной структуры: запись PDB 1T7G [109]. В контексте этой модели новый слитый пептид S2 является в основном спиральным (особенно консервативные остатки SxIEDLLF), с короткой центральной неструктурированной областью и находится в относительно открытом положении посередине тримерного шиповидного белкового комплекса. Эта структура и положение внутри тримера S согласуются с его функцией вирусного слитого пептида.Сравнение с другими слитыми белками выявило некоторое сходство с «внутренними» слитыми пептидами вируса Эбола и вируса птичьего лейкоза. Подобно этим вирусам, слитый пептид коронавируса подвергается протеолитическому расщеплению [6, 89, 110], но не является классическим «внешним» слитым пептидом, таким как НА гриппа.

Рисунок 3

Трехмерная прогнозируемая структура шиповидного белка SARS-CoV. Это представление показывает тримерную (вставка) и мономерную формы белка и основано на трехмерной предсказанной модели, найденной в базе данных PDB (запись PDB 1T7G, [109]).Обратите внимание, что предсказанная модель не включает остатки 681-736 белка. Выделены домены S1 и S2, а также сайты расщепления и предполагаемый слитый пептид.

6. Выводы

За последние десять лет выявлено много новых коронавирусов. Они заражают широкий круг хозяев от млекопитающих до птиц. Близкородственные коронавирусы были выявлены у дальнеродственных животных, что свидетельствует о недавних межвидовых скачках. Разнообразие коронавирусов в основном связано с низкой точностью кодируемой вирусом РНК-зависимой РНК-полимеразы, которая генерирует от 10 -3 до 10 -5 замен на сайт в год.Большой размер и стратегия репликации генома коронавируса также допускают частую гомологичную рекомбинацию — процесс, который обеспечивает обмен генетическим материалом во время коинфекции. Персистирующая инфекция приводит к накоплению адаптивных мутаций. Последствия преодоления барьера между видами коронавирусов могут быть разрушительными и приводить к тяжелым заболеваниям и смертности, примером чего может служить вспышка атипичной пневмонии. Спайковый белок является основным фактором, определяющим тропизм коронавирусов. Модификация спайка может изменить клеточный и тканевой тропизм, а в некоторых случаях в сочетании с другими факторами вируса и хозяина может привести к изменению патогенности вируса.Зоонозы представляют реальную опасность для здоровья человека. В прошлом коронавирусы часто демонстрировали свою склонность заражать новых хозяев, подчеркивая способность вирусной эволюции и необходимость наблюдения. Большой прогресс был достигнут в понимании функций спайковых белков, однако по-прежнему невозможно предсказать эффект мутаций, которые может приобрести вирус.

Благодарности

Мы приносим свои извинения всем авторам, чьи работы не могут быть процитированы из-за нехватки места.Мы благодарим Sophana Ung (Центр инфекций и иммунитета Лилля) за подготовку иллюстраций. Работа в лаборатории автора (G.W) поддерживается исследовательскими грантами от Национального института здоровья (R21 AI1076258), Winn Feline Foundation, Morris Animal Foundation и Cornell Feline Health Center.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Ссылки и примечания

1. Hudson C.B., Beaudette F.R. Заражение клоаки вирусом инфекционного бронхита.Наука. 1932;76:34. [PubMed] [Google Scholar]2. Вайс С.Р., Навас-Мартин С. Патогенез коронавируса и возникающий возбудитель тяжелого острого респираторного синдрома коронавирус. микробиол. Мол. биол. 2005; 69: 635–664. doi: 10.1128/MMBR.69.4.635-664.2005. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Энхуанес Л., Алмазан Ф., Сола И., Зунига С. Биохимические аспекты репликации коронавируса и взаимодействия вирус-хозяин. Анну. Преподобный Микробиолог. 2006; 60: 211–230. doi: 10.1146/annurev.micro.60.080805.142157. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Бош Б. Дж., ван дер Зее Р., де Хаан К. А., Ротье П. Дж. Спайковый белок коронавируса представляет собой слитый белок вируса класса I: структурная и функциональная характеристика комплекса слитого ядра. Дж. Вирол. 2003; 77: 8801–8811. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]6. Уайт Дж. М., Делос С. Э., Брехер М., Шорнберг К. Структуры и механизмы белков слияния вирусных мембран: многочисленные вариации на общую тему. крит. Преподобный Биохим. Мол. биол.2008;43:189–219. doi: 10.1080/10409230802058320. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Сюй Ю., Коул Д.К., Лу З., Лю Ю., Цинь Л., Ли С., Бай З., Юань Ф., Рао З., Гао Г.Ф. Разработайте дизайн, биофизическую и биохимическую характеристику ядра слияния из шиповидного белка вируса гепатита мыши (коронавирус). Белок Экспр. Очист. 2004; 38: 116–122. doi: 10.1016/j.pep.2004.08.005. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Супекар В.М., Брукманн К., Ингаллинелла П., Бьянки Э., Песси А., Карфи А. Структура протеолитически устойчивого ядра из слитого белка S2 коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. проц. Натл. акад. науч. США 2004; 101:17958–17963. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Чан У.Э., Чуанг С.К., Йе С.Х., Чанг М.С., Чен С.С. Функциональная характеристика мутантов гептадного повтора 1 и 2 шиповидного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. Дж. Вирол. 2006;80:3225–3237. doi: 10.1128/ОВИ.80.7.3225-3237.2006. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10. Луо З., Мэтьюз А.М., Вайс С.Р. Аминокислотные замены в домене лейциновой молнии шиповидного белка мышиного коронавируса вызывают дефекты олигомеризации и способность индуцировать слияние клеток. Дж. Вирол. 1999; 73:8152–8159. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11. Навас С., Сео С.Х., Чуа М.М., Дас Сарма Дж., Лави Э., Хингли С.Т., Вайс С.Р. Спайковый белок мышиного коронавируса определяет способность вируса размножаться в печени и вызывать гепатит.Дж. Вирол. 2001; 75: 2452–2457. doi: 10.1128/ОВИ.75.5.2452-2457.2001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]12. Навас С., Вайс С.Р. Гепатит, вызванный коронавирусом мышей: генетический фон JHM устраняет гепатотропизм, определяемый спайком A59. Дж. Вирол. 2003; 77: 4972–4978. doi: 10.1128/ОВИ.77.8.4972-4978.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]13. Хингли С.Т., Гомбольд Дж.Л., Лави Э., Вайс С.Р. Слитые мутанты MHV-A59 аттенуированы и проявляют измененный гепатотропизм.Вирусология. 1994; 200:1–10. doi: 10.1006/viro.1994.1156. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Лепарк-Гоффарт И., Хингли С.Т., Чуа М.М., Филлипс Дж., Лави Э., Вайс С.Р. Направленная рекомбинация в спайковом гене мышиного коронавируса вируса гепатита мышей-A59: Q159 является детерминантой гепатотропизма. Дж. Вирол. 1998; 72: 9628–9636. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]15. Casais R., Dove B., Cavanagh D., Britton P. Рекомбинантный вирус инфекционного бронхита птиц, экспрессирующий гетерологичный ген шипа, демонстрирует, что белок шипа является детерминантой клеточного тропизма.Дж. Вирол. 2003; 77: 9084–9089. doi: 10.1128/ОВИ.77.16.9084-9089.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Ходжсон Т., Касайс Р., Дав Б., Бриттон П., Кавана Д. Рекомбинантный коронавирус инфекционного бронхита Beaudette с геном спайкового белка патогенного штамма M41 остается аттенуированным, но вызывает защитный иммунитет. Дж. Вирол. 2004;78:13804–13811. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Хайема Б.Дж., Ротье П., де Гроот Р.П. Кошачьи коронавирусы: рассказ о двуличных типах.В: Тиль В., редактор. Молекулярная и клеточная биология коронавирусов. Кэйстер Академик Пресс; Норфолк, Великобритания: 2007. стр. 183–204. [Google Академия] 18. Pedersen N.C. Вирусологические и иммунологические аспекты вирусной инфекции инфекционного перитонита кошек. Доп. Эксп. Мед. биол. 1987; 218: 529–550. doi: 10.1007/978-1-4684-1280-2_69. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Vennema H., Poland A., Foley J., Pedersen N.C. Вирусы инфекционного перитонита кошек возникают в результате мутации эндемичных кишечных коронавирусов кошек.Вирусология. 1998; 243:150–157. doi: 10.1006/viro.1998.9045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]20. Ротье П.Дж.М., Накамура К., Шеллен П., Волдерс Х., Хайема Б.Дж. Приобретение тропизма макрофагов в патогенезе инфекционного перитонита кошек определяется мутациями в спайковом белке кошачьего коронавируса. Дж. Вирол. 2005;79:14122–14130. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]21. Хайема Б. Дж., Волдерс Х., Ротье П. Дж. Переключение видового тропизма: эффективный способ манипулирования геномом кошачьего коронавируса.Дж. Вирол. 2003; 77: 4528–4538. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]22. Двекслер Г. С., Пенсьеро М. Н., Карделличио С. Б., Уильямс Р. К., Цзян Г. С., Холмс К. В., Диффенбах К. В. Клонирование рецептора вируса гепатита мыши (MHV): экспрессия в клеточных линиях человека и хомяка придает восприимчивость к MHV. Дж. Вирол. 1991; 65: 6881–6891. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Тагучи Ф., Хираи-Юки А. Рецептор вируса гепатита мышей как определяющий фактор восприимчивости мышей к инфекции MHV.Передний. микробиол. 2012;3:68. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]24. Двекслер Г.С., Пенсьеро М.Н., Диффенбах К.В., Карделличио К.Б., Базиле А.А., Элиа П.Е., Холмс К.В. Штамм A59 вируса гепатита мыши и моноклональное антитело, блокирующее антирецептор, связываются с N-концевым доменом клеточного рецептора. проц. Натл. акад. науч. США, 1993; 90:1716–1720. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Миура Т.А., Траванти Э.А., Око Л., Билефельдт-Оманн Х., Вайс С.Р., Бошемин Н., Холмс К.V. Спайковый гликопротеин мышиного коронавируса MHV-JHM опосредует рецептор-независимую инфекцию и распространение в центральной нервной системе мышей Ceacam1a-/-. Дж. Вирол. 2008; 82: 755–763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]26. Накагаки К., Тагучи Ф. Независимое от рецепторов распространение высоконейротропного штамма мышиного коронавируса JHMV из изначально инфицированных клеток микроглии в смешанных нейронных культурах. Дж. Вирол. 2005; 79: 6102–6110. doi: 10.1128/ОВИ.79.10.6102-6110.2005. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]27.Hemmila E., Turbide C., Olson M., Jothy S., Holmes K.V., Beauchemin N. Мыши Ceacam1a-/- полностью устойчивы к заражению вирусом мышиного гепатита мышиного коронавируса A59. Дж. Вирол. 2004; 78:10156–10165. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]28. Шикли Дж.Х., Зелус Б.Д., Вентворт Д.Е., Савицки С.Г., Холмс К.В. Штамм A59 вируса мышиного гепатита мышиного коронавируса из персистентно инфицированных мышиных клеток демонстрирует расширенный круг хозяев. Дж. Вирол. 1997;71:9499–9507. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29.де Хаан К.А., Те Линтело Э., Ли З., Раабен М., Вурдингер Т., Бош Б.Дж., Роттиер П.Дж. Совместное участие субъединиц S1 и S2 шиповидного белка мышиного коронавируса в связывании с рецептором и расширенном диапазоне хозяев. Дж. Вирол. 2006; 80:10909–10918. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. де Хаан К.А., Ли З., те Линтело Э., Бош Б.Дж., Хайема Б.Дж., Ротье П.Дж. Мышиный коронавирус с расширенным кругом хозяев использует гепарансульфат в качестве входного рецептора. Дж. Вирол. 2005; 79:14451–14456. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]31.Филлипс Дж.Дж., Чуа М., Сео С.Х., Вайс С.Р. Множественные области гликопротеина спайка мышиного коронавируса влияют на нейровирулентность. Дж. Нейровирол. 2001; 7: 421–431. doi: 10.1080/135502801753170273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]32. Крюгер Д.К., Келли С.М., Левицки Д.Н., Руффоло Р., Галлахер Т.М. Вариации в разных областях шиповидного белка мышиного коронавируса влияют на инициацию слияния мембран. Дж. Вирол. 2001; 75: 2792–2802. doi: 10.1128/ОВИ.75.6.2792-2802.2001.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]33. Туселл С.М., Шиттоне С.А., Холмс К.В. Мутационный анализ аминопептидазы N, рецептора для нескольких коронавирусов группы 1, идентифицирует ключевые детерминанты диапазона вирусных хозяев. Дж. Вирол. 2007; 81: 1261–1273. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Rasschaert D., Duarte M., Laude H. Респираторный коронавирус свиней отличается от вируса трансмиссивного гастроэнтерита несколькими геномными делециями. Дж. Генерал Вирол. 1990; 71: 2599–2607. doi: 10.1099/0022-1317-71-11-2599.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Шульце Б., Кремпл К., Бальестерос М.Л., Шоу Л., Шауэр Р., Энхуанес Л., Херрлер Г. Коронавирус трансмиссивного гастроэнтерита, но не родственный респираторный коронавирус свиней, обладает активностью связывания сиаловой кислоты (N-гликолилнейраминовой кислоты) . Дж. Вирол. 1996; 70: 5634–5637. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]36. Кремпл С., Шульце Б., Лауд Х., Херрлер Г. Точечные мутации в белке S связывают активность связывания сиаловой кислоты с энтеропатогенностью коронавируса трансмиссивного гастроэнтерита.Дж. Вирол. 1997;71:3285–3287. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]37. Schwegmann-Wessels C., Zimmer G., Schroder B., Breves G., Herrler G. Связывание коронавируса трансмиссивного гастроэнтерита с сиалогликопротеинами мембраны щеточной каймы. Дж. Вирол. 2003; 77: 11846–11848. doi: 10.1128/ОВИ.77.21.11846-11848.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]38. Кремпл С., Бальестерос М.Л., Циммер Г., Энжуанес Л., Кленк Х.Д., Херрлер Г. Характеристика связывающей сиаловую кислоту активности коронавируса трансмиссивного гастроэнтерита путем анализа мутантов с дефицитом гемагглютинации.Дж. Генерал Вирол. 2000; 81: 489–496. [PubMed] [Google Scholar]40. Пэн Г., Сунь Д., Раджашанкар К.Р., Цянь З., Холмс К.В., Ли Ф. Кристаллическая структура домена, связывающего рецептор мышиного коронавируса, в комплексе с его мышиным рецептором. проц. Натл. акад. науч. США 2011; 108:10696–10701. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]41. Маду И.Г., Чу В.К., Ли Х., Реган А.Д., Бауман Б.Е., Уиттакер Г.Р. Гепарансульфат является селективным фактором прикрепления для вируса инфекционного бронхита птичьего коронавируса Beaudette.Птичий. Дис. 2007; 51:45–51. doi: 10.1637/0005-2086(2007)051[0045:HSIASA]2.0.CO;2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]42. де Хаан К.А.М., Хайема Б.Дж., Шеллен П., Шреур П.В., те Линтело Э., Веннема Х., Ротье П.Дж.М. Расщепление шиповидных белков коронавируса группы 1: как расщепление фурина компенсируется связыванием гепарансульфата при адаптации клеточной культуры. Дж. Вирол. 2008; 82: 6078–6083. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]43. Ли В., Мур М.Дж., Васильева Н., Суй Дж., Вонг С.К., Берн М.A., Somasundaran M., Sullivan J.L., Luzuriaga K., Greenough T.C., et al. Ангиотензинпревращающий фермент 2 является функциональным рецептором коронавируса SARS. Природа. 2003; 426:450–454. doi: 10.1038/nature02145. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]44. Li W., Zhang C., Sui J., Kuhn J.H., Moore M.J., Luo S., Wong S.K., Huang I.C., Xu K., Vasilieva N., et al. Рецепторные и вирусные детерминанты адаптации SARS-коронавируса к ACE2 человека. EMBO J. 2005; 24: 1634–1643. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]45.Ву К., Пэн Г., Уилкен М., Герати Р.Дж., Ли Ф. Механизмы адаптации рецепторов хозяина к коронавирусу SARS. Дж. Биол. хим. 2012; 287:8904–8911. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46. Ren W., Qu X., Li W., Han Z., Yu M., Zhou P., Zhang SY, Wang LF, Deng H., Shi Z. Разница в использовании рецепторов при коронавирусе тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) и SARS-подобный коронавирус летучих мышей. Дж. Вирол. 2008; 82: 1899–1907. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]47. Джефферс С.А., Таселл С.M., Gillim-Ross L., Hemmila E.M., Achenbach J.E., Babcock G.J., Thomas W.D., Thackray L.B., Young MD, Mason R.J., et al. CD209L (L-SIGN) является рецептором коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. проц. Натл. акад. науч. США 2004; 101:15748–15753. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Джефферс С.А., Хеммила Э.М., Холмс К.В. Коронавирус человека 229E может использовать CD209L (L-SIGN) для проникновения в клетки. Доп. Эксп. Мед. биол. 2006; 581: 265–269. doi: 10.1007/978-0-387-33012-9_44. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]49.Ян З.-Ю., Хуан Ю., Ганеш Л., Леунг К., Конг В.-П., Шварц О., Суббарао К., Набель Г.Дж. pH-зависимое проникновение коронавируса с тяжелым острым респираторным синдромом опосредуется шиповидным гликопротеином и усиливается за счет переноса дендритных клеток через DC-SIGN. Дж. Вирол. 2004; 78: 5642–5650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]50. Хан Д. П., Лохани М., Чо М. В. Специфические сайты гликозилирования, связанные с аспарагином, имеют решающее значение для проникновения коронавируса, опосредованного DC-SIGN и L-SIGN, при тяжелом остром респираторном синдроме.Дж. Вирол. 2007;81:12029–12039. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]51. Риган А.Д., Уиттакер Г.Р. Использование DC-SIGN для проникновения кошачьих коронавирусов в клетки-хозяева. Дж. Вирол. 2008; 82:11992–11996. doi: 10.1128/ОВИ.01094-08. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]52. Риган А.Д., Оустераут Д.Г., Уиттакер Г.Р. Активность кошачьих лектинов имеет решающее значение для проникновения в клетки вируса инфекционного перитонита кошек. Дж. Вирол. 2010;84:7917–7921. doi: 10.1128/ОВИ.00964-10. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]53.Чжан Ю., Баклз Э., Уиттакер Г.Р. Экспрессия лектинов C-типа DC-SIGN или L-SIGN изменяет восприимчивость клетки-хозяина к птичьему коронавирусу, вирусу инфекционного бронхита. Вет. микробиол. 2012; 157: 285–293. doi: 10.1016/j.vetmic.2012.01.011. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]54. Нэш Т. С., Бухмайер М. Дж. Проникновение вируса гепатита мышей в клетки эндосомальным и неэндосомным путями. Вирусология. 1997; 233:1–8. doi: 10.1006/viro.1997.8609. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]55.Мацуяма С., Тагучи Ф. Индуцированные рецептором конформационные изменения шиповидного белка мышиного коронавируса. Дж. Вирол. 2002;76:11819–11826. doi: 10.1128/ОВИ.76.23.11819-11826.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]56. Стурман Л.С., Рикард К.С., Холмс К.В. Конформационное изменение гликопротеина пепломера коронавируса при рН 8,0 и 37°С коррелирует с агрегацией вируса и индуцированным вирусом слиянием клеток. 1990. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]57. Зелус Б.Д., Шикли Дж.Х., Блау Д.М., Вайс С.Р., Холмс К.В. Конформационные изменения в шиповидном гликопротеине мышиного коронавируса индуцируются при 37°С либо растворимыми мышиными рецепторами CEACAM1, либо рН 8. J. Virol. 2003; 77: 830–840. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]58. Тагучи Ф., Мацуяма С. Растворимый рецептор потенцирует независимую от рецептора инфекцию мышиным коронавирусом. Дж. Вирол. 2002; 76: 950–958. doi: 10.1128/ОВИ.76.3.950-958.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]59. Галлахер Т.М., Эскармис С., Бухмайер М. Дж. Изменение рН-зависимости индуцированного коронавирусом слияния клеток: влияние мутаций в гликопротеине спайка. Дж. Вирол. 1991; 65: 1916–1928. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60. Цю З., Хингли С.Т., Симмонс Г., Ю С., Дас Сарма Дж., Бейтс П., Вайс С.Р. Эндосомальный протеолиз катепсинами необходим для проникновения вируса мышиного гепатита мышиного коронавируса типа 2, опосредованного спайками. Дж. Вирол. 2006; 80: 5768–5776. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]61. Эйфарт П., Людвиг К., Bottcher C., de Haan C.A., Rottier PJ, Korte T., Herrmann A. Роль эндоцитоза и низкого pH в проникновении клеток штамма A59 вируса гепатита мышей. Дж. Вирол. 2007; 81: 10758–10768. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]62. Pu Y., Zhang X. Вирус гепатита мыши типа 2 проникает в клетки через клатрин-опосредованный эндоцитарный путь, независимый от Eps15. Дж. Вирол. 2008; 82: 8112–8123. doi: 10.1128/ОВИ.00837-08. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]63. Чу В.К., МакЭлрой Л.Дж., Чу В., Бауман Б.Э., Уиттакер Г.Р. Вирус инфекционного бронхита птичьего коронавируса подвергается прямой зависимой от низкого pH активации слияния во время проникновения в клетки-хозяева. Дж. Вирол. 2006; 80: 3180–3188. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]64. Ямада Ю., Лю Д.Х. Протеолитическая активация шиповидного белка в новом мотиве RRRR/S вовлечена в фурин-зависимое проникновение, образование синцития и инфекционность вируса коронавирусного инфекционного бронхита в культивируемых клетках. Дж. Вирол. 2009; 83: 8744–8758. doi: 10.1128/ОВИ.00613-09. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]65. Штайнхауэр Д.А. Роль расщепления гемагглютинина в патогенности вируса гриппа. Вирусология. 1999; 258:1–20. doi: 10.1006/viro.1999.9716. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]66. Лепарк-Гоффарт И., Хингли С.Т., Чуа М.М., Цзян С., Лави Э., Вайс С.Р. Измененный патогенез мутанта мышиного коронавируса MHV-A59 связан с заменой аминокислоты Q159L в шиповидном белке. Вирусология. 1997; 239:1–10. doi: 10.1006/viro.1997.8877. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]67. Гомбольд Дж.Л., Хингли С.Т., Вайс С.Р. Дефектные по слиянию мутанты вируса гепатита мыши A59 содержат мутацию в сигнале расщепления шиповидного белка. Дж. Вирол. 1993;67:4504–4512. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]68. де Хаан К. А., Стадлер К., Годеке Г. Дж., Бош Б. Дж., Ротье П. Дж. Ингибирование расщепления шиповидного белка мышиного коронавируса фуриноподобным ферментом влияет на слияние клеток, но не вирус-клетка. Дж. Вирол. 2004; 78: 6048–6054.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]69. Хингли С.Т., Лепарк-Гоффарт И., Вайс С.Р. Спайковый белок мышиного коронавируса штамма А59 вируса мышиного гепатита не расщепляется в первичных глиальных клетках и первичных гепатоцитах. Дж. Вирол. 1998; 72: 1606–1609. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]70. Сейда Н.Г., Прат А. Биология и терапевтическое нацеливание пропротеиновых конвертаз. Нац. Преподобный Друг Дисков. 2012; 11: 367–383. doi: 10.1038/nrd3699. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]71. Сейда Н.G. Конвертазы пропротеинов, 20 лет спустя. Методы Мол. биол. 2011; 768: 23–57. doi: 10.1007/978-1-61779-204-5_3. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]72. Симмонс Г., Госалия Д.Н., Реннекамп А.Дж., Ривз Дж.Д., Даймонд С.Л., Бейтс П. Ингибиторы катепсина L предотвращают проникновение коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. проц. Натл. акад. науч. США 2005; 102:11876–11881. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]73. Симмонс Г., Ривз Дж. Д., Реннекамп А. Дж., Амберг С. М., Пифер А. Дж., Бейтс П. Характеристика тяжелого острого респираторного синдрома, связанного с коронавирусом (SARS-CoV), опосредованного гликопротеином проникновения вируса.проц. Натл. акад. науч. США 2004; 101:4240–4245. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]74. Мацуяма С., Удзике М., Морикава С., Таширо М., Тагучи Ф. Опосредованное протеазами усиление коронавирусной инфекции тяжелого острого респираторного синдрома. проц. Натл. акад. науч. США 2005; 102:12543–12547. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]75. Белузар С., Чу В.К., Уиттакер Г.Р. Активация спайкового белка коронавируса SARS посредством последовательного протеолитического расщепления в двух разных местах. проц.Натл. акад. науч. США 2009;106:5871–5876. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]76. Белузар С., Маду И., Уиттакер Г.Р. Опосредованная эластазой активация шиповидного белка коронавируса SARS в дискретных участках в домене S2. Дж. Биол. хим. 2010; 285:22758–22763. doi: 10.1074/jbc.M110.103275. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]77. Ватанабэ Р., Мацуяма С., Ширато К., Маэдзима М., Фукуши С., Морикава С., Тагучи Ф. Попадание с клеточной поверхности коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома с расщепленным белком S, выявленным псевдотипом вируса, несущего расщепленный S белок.Дж. Вирол. 2008;82:11985–11991. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]78. Каллан Р.Дж., Хартманн Ф.А., Вест С.Е., Хиншоу В.С. Расщепление гемагглютинина h2 вируса гриппа А респираторными бактериальными протеазами свиней. Дж. Вирол. 1997; 71: 7579–7585. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]79. Bosch BJ, Bartelink W., Rottier PJ Катепсин L функционально расщепляет слитый белок коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома I выше, а не рядом с слитым пептидом. Дж.Вирол. 2008; 82: 8887–8890. doi: 10.1128/ОВИ.00415-08. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]80. Ботчер Э., Матросович Т., Бейерле М., Кленк Х.Д., Гартен В., Матросович М. Протеолитическая активация вирусов гриппа сериновыми протеазами TMPRSS2 и HAT из эпителия дыхательных путей человека. Дж. Вирол. 2006; 80: 9896–9898. doi: 10.1128/ОВИ.01118-06. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]81. Шулла А., Хилд-Сарджент Т., Субраманья Г., Чжао Дж., Перлман С., Галлахер Т. Трансмембранная сериновая протеаза связана с рецептором коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома и активирует проникновение вируса.Дж. Вирол. 2011; 85: 873–882. doi: 10.1128/ОВИ.02062-10. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]82. Кам Ю.В., Окумура Ю., Кидо Х., Нг Л.Ф., Бруццоне Р., Альтмейер Р. Расщепление шиповидного гликопротеина коронавируса SARS протеазами дыхательных путей усиливает проникновение вируса в бронхиальные эпителиальные клетки человека in vitro . ПЛОС Один. 2009;4:e7870. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]83. Гловацка И., Бертрам С., Мюллер М.А., Аллен П., Суйе Э., Пфефферле С., Штеффен И., Цегайе Т.С., Хе Ю., Гнирсс К. и др. Доказательства того, что TMPRSS2 активирует шиповидный белок коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома для слияния мембран и снижает вирусный контроль за счет гуморального иммунного ответа. Дж. Вирол. 2011;85:4122–4134. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]84. Бертрам С., Гловацка И., Мюллер М.А., Лаванда Х., Гнирсс К., Нельмайер И., Нимейер Д., Хе Ю., Симмонс Г., Дростен К. и др. Расщепление и активация шиповидного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома трипсиноподобной протеазой дыхательных путей человека.Дж. Вирол. 2011;85:13363–13372. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]85. Белузар С., Маду И., Уиттакер Г.Р. Опосредованная эластазой активация шиповидного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома в дискретных участках в домене S2. Дж. Биол. хим. 2010; 285:22758–22763. doi: 10.1074/jbc.M110.103275. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]86. Риган А.Д., Шрайбман Р., Коэн Р.Д., Уиттакер Г.Р. Дифференциальная роль низкого pH и катепсин-опосредованного расщепления вирусного шиповидного белка при проникновении кошачьих коронавирусов серотипа II.Вет. микробиол. 2008; 132: 235–248. doi: 10.1016/j.vetmic.2008.05.019. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]87. Эрп Л.Дж., Делос С.Е., Парк Х.Е., Уайт Дж.М. Многие механизмы белков слияния вирусных мембран. Курс. Верхняя. микробиол. Иммунол. 2005; 285:25–66. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]88. Тамм Л.К., Хан X. Вирусные слитые пептиды: набор инструментов для разрушения и соединения биологических мембран. Бионауч. Представитель 2000; 20: 501–518. doi: 10.1023/A:1010406920417. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]89.Лай А.Л., Ли Ю., Тамм Л.К. Взаимодействие белков и липидов при проникновении вируса путем слияния мембран. В: Тамм Л.К., изд. Белково-липидные взаимодействия. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA; Вайнхайм, Германия: 2005. стр. 279–303. [Google Академия]91. Хан Х., Бушвеллер Дж.Х., Кафизо Д.С., Тамм Л.К. Структура мембраны и инициирующее слияние конформационное изменение домена слияния из гемагглютинина гриппа. Нац. Структура биол. 2001; 8: 715–720. дои: 10.1038/

. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]92.Гомара М.Дж., Мора П., Мингарро И., Ниева Дж.Л. Роль консервативного пролина во внутреннем слитом пептиде гликопротеина Эбола. ФЭБС лат. 2004; 569: 261–266. [PubMed] [Google Scholar]93. Durell S.R., Martin I., Ruysschaert JM, Shai Y., Blumenthal R. Что исследования слитых пептидов говорят нам о слиянии мембран, опосредованном гликопротеином оболочки вируса (обзор) Mol. член биол. 1997; 14:97–112. doi: 10.3109/096876897070. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]94. Бош Б. Дж., Ротье П. Дж. Проникновение нидовирусов в клетки.В: Перлман С., Галлахер Т., Снайдер Э.Дж., редакторы. Нидовирусы. АСМ Пресс; Вашингтон, округ Колумбия, США: 2008. стр. 157–178. [Google Академия]95. Guillen J., Kinnunen P.K., Villalain J. Мембранная вставка трех основных мембранотропных последовательностей гликопротеина S2 SARS-CoV. Биохим. Биофиз. Акта. 2008; 1778: 2765–2774. doi: 10.1016/j.bbamem.2008.07.021. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]96. Гильен Дж., Перес-Берна А.Дж., Морено М.Р., Виллалайн Дж. Идентификация мембраноактивных областей гликопротеина шиповидной мембраны коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома с использованием 16/18-мерного пептидного сканирования: последствия для механизма вирусного слияния.Дж. Вирол. 2005; 79: 1743–1752. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]97. Чемберс П., Прингл К.Р., Истон А.Дж. Последовательности гептадных повторов расположены рядом с гидрофобными областями в нескольких типах гликопротеинов слияния вирусов. Дж. Генерал Вирол. 1990;71:3075–3080. doi: 10.1099/0022-1317-71-12-3075. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]98. Пети С.М., Мелансон Ж.М., Чуленко В.Н., Колгроув Р., Фарзан М., Книпе Д.М., Кусулас К.Г. Генетический анализ функциональных доменов гликопротеиновых шипов SARS-коронавируса, участвующих в экспрессии на клеточной поверхности и слиянии клеток с клетками.Вирусология. 2005; 341: 215–230. doi: 10.1016/j.virol.2005.06.046. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]99. Сайнс Б., мл., Рауш Дж.М., Галлахер В.Р., Гарри Р.Ф., Уимли В.К. Идентификация и характеристика предполагаемого слитого пептида шиповидного белка коронавируса, связанного с тяжелым острым респираторным синдромом. Дж. Вирол. 2005; 79: 7195–7206. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]100. Гильен Дж., Перес-Берна А.Дж., Морено М.Р., Виллалайн Дж. Второй гликопротеин S2 SARS-CoV, внутренний мембраноактивный пептид. Биофизическая характеристика и мембранное взаимодействие.2008;47:8214–8224. [PubMed] [Google Scholar] 101. Гильен Дж., де Алмейда Р.Ф., Прието М., Виллален Дж. Структурная и динамическая характеристика взаимодействия предполагаемого слитого пептида белка вируса S2 SARS-CoV с липидными мембранами. Дж. Физ. хим. Б. 2008; 112:6997–7007. [PubMed] [Google Scholar] 102. Сайнс Б., мл., Рауш Дж.М., Галлахер В.Р., Гарри Р.Ф., Уимли В.К. Ароматический домен вирусного слитого белка коронавируса класса I вызывает пермеабилизацию мембраны: предполагаемая роль во время проникновения вируса.Биохимия. 2005; 44: 947–958. [PubMed] [Google Scholar] 103. Ховард М.В., Траванти Э.А., Джефферс С.А., Смит М.К., Венньер С.Т., Тэкрей Л.Б., Холмс К.В. Ароматические аминокислоты в околомембранном домене гликопротеина спайка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома важны для рецептор-зависимого проникновения вируса и слияния клеток. Дж. Вирол. 2008; 82: 2883–2894. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]104. Лу Ю., Нео Т.Л., Лю Д.С., Там Дж.П. Важность области шиповидного белка SARS-CoV, богатой Trp, в вирусной инфекционности.Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 2008; 371: 356–360. doi: 10.1016/j.bbrc.2008.04.044. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]105. Гильен Дж., Морено М.Р., Перес-Берна А.Дж., Бернабеу А., Виллален Дж. Взаимодействие пептида из претрансмембранного домена шиповидного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома с фосфолипидными мембранами. Дж. Физ. хим. Б. 2007; 111:13714–13725. [PubMed] [Google Scholar] 106. Маду И.Г., Рот С.Л., Белоузар С., Уиттакер Г.Р. Характеристика высококонсервативного домена в домене S2 шиповидного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома с характеристиками вирусного слитого пептида.Дж. Вирол. 2009; 83: 7411–7421. doi: 10.1128/ОВИ.00079-09. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]107. Zhang H., Wang G., Li J., Nie Y., Shi X., Lian G., Wang W., Yin X., Zhao Y., Qu X. и др. Идентификация антигенной детерминанты в домене S2 гликопротеина спайка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома, способного индуцировать нейтрализующие антитела. Дж. Вирол. 2004; 78: 6938–6945. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]108. Дэниел К., Андерсон Р., Бухмайер М.Дж., Флеминг Дж. О., Спаан В. Дж., Веге Х., Талбот П. Дж. Идентификация иммунодоминантного домена линейной нейтрализации в части S2 гликопротеина спайка мышиного коронавируса и доказательства того, что он является частью сложной трехмерной структуры. Дж. Вирол. 1993; 67: 1185–1194. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]109. Бернини А., Спига О., Чутти А., Кьеллини С., Браччи Л., Ян С., Чжэн Б., Хуан Дж., Хе М.Л., Сонг Х.Д. и др. Прогнозирование четвертичной сборки пепломера коронавируса SARS.Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 2004; 325:1210–1214. doi: 10.1016/j.bbrc.2004.10.156. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]110.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.