Лада х раф: LADA XRAY кроссовер — Официальный сайт LADA

Содержание

383424036R8200884113 Сальник ЛАДА X-Ray КПП комплект 2шт. БАЛАКОВОЗАПЧАСТЬ — 383424036R/8200884113 14806 383424036R

383424036R8200884113 Сальник ЛАДА X-Ray КПП комплект 2шт. БАЛАКОВОЗАПЧАСТЬ — 383424036R/8200884113 14806 383424036R — фото, цена, описание, применимость. Купить в интернет-магазине AvtoAll.Ru Распечатать

8

1

Применяется: ВАЗ

Артикул: 383424036R/8200884113еще, артикулы доп.: 14806, 383424036Rскрыть

Код для заказа: 803384

Добавлено пользователем

450 ₽

В корзину

Способы оплаты: Наличные при получении
VISA, MasterCard, МИР, Google Pay
Долями Оплата через банк Производитель: БАЛАКОВОЗАПЧАСТЬ Получить информацию о товаре или оформить заказ вы можете по телефону 8 800 6006 966. Есть в наличии

Доступно для заказа8 шт.Данные обновлены: 13.04.2022 в 23:30

Код для заказа 803384 Артикулы 383424036R/8200884113, 14806, 383424036R
Производитель БАЛАКОВОЗАПЧАСТЬ Каталожная группа: ..Коробка передач
Трансмиссия
Ширина, м: 0.06 Высота, м: 0.03 Длина, м: 0.06
Вес, кг: 0.04

Отзывы о товаре

Вопрос-ответ

Задавайте вопросы и эксперты
помогут вам найти ответ

Где применяется

Сертификаты

Обзоры

  • Сальник ЛАДА X-Ray КПП комплект 2шт. БАЛАКОВОЗАПЧАСТЬ Артикул: 383424036R/8200884113, 14806, 383424036R Код для заказа: 803384

    450 ₽

    или оформите заказ по телефону 8 800 6006 966
Наличие товара на складах и в магазинах, а также цена товара указана на 13.04.2022 23:30.

Цены и наличие товара во всех магазинах и складах обновляются 1 раз в час. При достаточном количестве товара в нужном вам магазине вы можете купить его без предзаказа.

Интернет-цена — действительна при заказе на сайте или через оператора call-центра по телефону 8 800 6006 966. При условии достаточного количества товара в момент заказа.

Цена в магазинах

— розничная цена товара в торговых залах магазинов без предварительного заказа.

Срок перемещения товара с удаленного склада на склад интернет-магазина.

Представленные данные о запчастях на этой странице несут исключительно информационный характер.

c0727745d8f18f69940b5ae69e65c5aa

Добавление в корзину

Код для заказа:

Доступно для заказа:

Кратность для заказа:

Добавить

Отменить

Товар успешно добавлен в корзину

!

В вашей корзине на сумму

Закрыть

Оформить заказ

Page not found — автомануал заказ автокниг с доставкой в любую точку мира

НАШИ ПАРТНЕРЫ:

Любой современный легковой или грузовой автомобиль можно обслуживать и ремонтировать самостоятельно, в обычном гараже. Все что для этого потребуется – набор инструмента и заводское руководство по ремонту с подробным (пошаговым) описанием выполнения операций. Такое руководство должно содержать типы применяемых эксплуатационных жидкостей, масел и смазок, а самое главное – моменты затяжки всех резьбовых соединений деталей узлов и агрегатов автомобиля. Итальянские автомобили – Fiat (Фиат) Alfa Romeo (Альфа Ромео) Lancia (Лянча) Ferrari (Феррари) Mazerati (Мазерати) имеют свои конструктивные особенности. Также в особую группу можно выделить все французские машины – Peugout (Пежо), Renault (Рено) и Citroen (Ситроен). Немецкие машины сложные. Особенно это относится к Mercedes Benz (Мерседес Бенц), BMW (БМВ), Audi (Ауди) и Porsche (Порш), в чуть меньшей — к Volkswagen (Фольксваген) и Opel (Опель). Следующую большую группу, обособленную по конструктивным признакам составляют американские производители- Chrysler, Jeep, Plymouth, Dodge, Eagle, Chevrolet, GMC, Cadillac, Pontiac, Oldsmobile, Ford, Mercury, Lincoln. Из Корейских фирм следует отметить Hyundai/Kia, GM-DAT (Daewoo), SsangYong.

Совсем недавно японские машины отличались относительно низкой первоначальной стоимостью и доступными ценами на запасные части, но в последнее время они догнали по этим показателям престижные европейские марки. Причем это относится практически в одинаковой степени ко всем маркам автомобилей из страны восходящего солнца – Toyota (Тойота), Mitsubishi (Мицубиси), Subaru (Субару), Isuzu (Исудзу), Honda (Хонда), Mazda (Мазда или как говорили раньше Мацуда), Suzuki (Сузуки), Daihatsu (Дайхатсу), Nissan (Ниссан). Ну, а машины, выпущенные под японо-американскими брендами Lexus (Лексус), Scion (Сцион), Infinity (Инфинити), Acura (Акура) с самого начала были недешевыми.

 

Отечественные автомобили также сильно изменились с введением норм евро-3. лада калина, лада приора и даже лада нива 4х4 теперь значительно сложнее в обслуживании и ремонте.

что делать если машина не заводится, как зарядить аккумулятор, как завести машину в мороз. ответы на эти вопросы можно найти на страницах сайта и книг. представленных здесь же

Автомануал — от англ. manual — руководство. Пособие по ремонту автомобиля или мотоцикла. различают заводские руководства и книги , выпущенные специализированными автомобильными издательствами.

Cайт Автомануал не несет никакой ответственности за возможные повреждения техники или несчастные случаи, связанные с использованием размещенной информации.

История автозаводов ЗИЛ, АЗЛК, РАФ и почему они не выжили

На протяжении всего своего существования закрытый Советский Союз стремился к самодостаточности, поэтому изо всех сил развивал свою автомобильную промышленность, станкостроение, производство машин и агрегатов. Грузовики, тракторы, комбайны, малолитражки удовлетворяли запросы советского общества. Но и требования большинства людей к качеству авто не были слишком высокими.

Но со временем технологическая отсталость, отсутствие новых разработок привели к потере позиций на автомобильном рынке, который предлагал более современные и дешевые автомобили.

Поэтому гиганты советской автомобильной промышленности прекратили свое существование относительно быстро после распада этой страны.

ЗИЛ

Территория бывшего советского автомобильного производителя является на данный момент проблемой московского руководства.

С 2010 года обсуждаются различные версии реконструкции завода имени Лихачева. На базе этого предприятия предлагается реализовать множество проектов, ни один из которых не получил достаточной поддержки.

С закрытия предприятия на его северной стороне не сохранилось вообще никаких зданий. На территории южной части сохранился цех по сборке машин марки Renault. С другой стороны здесь царит запустение.

Земельный участок северной части бывшего завода ЗИЛ был выставлен на продажу. Конкурс выиграла фирма «Группа ЛСР», которая занимается постройкой элитного жилья панельного типа.

Предыдущие владельцы планировали сохранить производство автомобилей, привнеся элементы шоу. Позднее от этой идеи отказались. В конечном итоге было принято решение снести все здания, кроме Весниных построек 20-30-х годов прошлого века, которые расположены вдоль центральной аллеи.

Таким образом, на сегодняшний день существует большое количество предложений от различных инвесторов, каждое из которых могло бы сказаться на дальнейшей судьбе легендарного предприятия. При этом каждый инвестор преследует свой собственный интерес.

Важно сохранить по максимуму материальную субстанцию общей территории завода.

Читайте также

Почему старые ЗИЛы голубые?
ЗИЛ-130 пришел на смену грузовику ЗИЛ-164. Его нельзя назвать просто очередной моделью грузовых автомобилей. Эта машина…

 

АЗЛК

История этого легендарного производства началась после Второй мировой войны весной 1945 года, когда было принято решение о постройке завода по выпуску малолитражек. Вначале в 1947 машины производились под маркой «Москвич-400».

При этом основой автомобиля стала известная немецкая модель Opel Kadet образца 1938 года. После двадцати лет успешного производства была произведена реконструкция завода.

Было установлено оборудование фирмы Renault. До начала 90-х годов прошлого века предприятие АЗЛК стало крупнейшим по выпуску машин для населения.

После распада Советского Союза основные рынки сбыта были утрачены и с 2001 года выпуск всех автомобилей был приостановлен. Уже в 2006 году эта советская автомобильная легенда прекратила свое существование с объявлением решения о банкротстве завода.

Сейчас на территории некогда огромного производства гуляет ветер.

Читайте также

Советские ВАЗы в лесу Финляндии — почему их бросили
Сегодня в лесах Финляндской Республики можно найти целые кладбища автомобилей. Среди них можно обнаружить десятки, а…

 

РАФ

Из-за финансовых проблем популярное производство RAF в Елгаве прекратило выпуск микроавтобусов еще в 1998 году.

На данный момент компанией владеет гражданин Украины Шумейко Кирилл. По его словам на базе завода РАФ планируется наладить производство небольших троллейбусов, другого электрического городского транспорта в виде гибридов автобуса и троллейбуса небольшими партиями.

Для его эффективного функционирования требуется наладить расширенную сеть зарядных станций.

Латвийские специалисты возлагают большие надежды на будущий проект развития электротранспорта. Кроме того, в следующем году на данных производственных мощностях планируется выпуск автомобильных прицепов, минивэнов под известной маркой RAF.

Читайте также

Какой советский грузовик самый проходимый
Грузовые советские автомобили можно и сегодня встретить на автострадах по всей территории РФ, а также на вооружении…

 

Таким образом, популярные автомобили советских времен остались далеко в прошлом. Вернуть к жизни отдельные производства могут только новые современные проекты, технологии. Это доказывает латвийский опыт.

Загрузка…

LADA VESTA 1.6T

РАЗМЕРЫ
— Длина — 4410 мм
— Ширина — 1820 мм
— Колесная база — 2635 мм
— Дорожный просвет — 80 мм
— Снаряженная масса без водителя — 1115 кг 

ДВИГАТЕЛЬ
— Базовый — ВАЗ-21129
— 4-х цилиндровый 16-клапанный с турбонадувом
— Рабочий объем — 1597 см3
— Максимальная мощность — 255 л.с при 5500 об\мин
— Максимальный крутящий момент — 340 Нм при 4400об\мин
— Максимальные обороты — 7000 об\мин 
— Топливо — бензин А-100
— Турбонагнетатель GARRETT
— Рестриктор согласно технического регламента, диаметр 32мм 

ТРАНСМИССИЯ
— Сцепление однодисковое металлокерамическое с гидроприводом
— КПП 6-ти ступенчатая кулачковая с последовательным переключением
— Дифференциал повышенного трения
— Привод колес с валами равной длины и с промопорой
— Рулевое управление реечного типа с гидроусилителем

ПОДВЕСКА
— Передняя типа McPherson
— Подрамник усиленный LADA VESTA
— Рычаги сварные из стальной трубы с ШС и регулировкой геометрии
— Стабилизатор регулируемый
— Амортизаторная стойка на газонаполненных амортизаторах с изменяемой характеристикой
— Задняя на полузависимой балке модели LADA VESTA
— Стабилизатор регулируемый
— Амортизаторы газонаполненные с изменяемой характеристикой
— Тормозная система 2-х контурного типа с напольными педалями

ТОРМОЗНАЯ СИСТЕМА
— Тормоз передних колес: суппорт 4-х поршневой  AP RACING, диски вентилируемые диаметром 330 мм
— Тормоз задних колес: суппорты 2-х поршневые AP RACING, диски диаметром 278мм
— Регулятор тормозных усилий в контуре задних колес
— Ручной тормоз с гидроприводом
— Колеса 9J-R17 из алюминиевого сплава
— Шины 245\610-17

КУЗОВ
— Облегченный в соответствии с техническими требованиями
— Каркас безопасности вварного типа имеет омологацию РАФ
— Аэродинамический комплект с анти крылом задней оси.

РСКГ | LADA Vesta 1.6T SP

Шины сухие: Yokohama Advan A005 240/610-R17
Шины дождевые: Yokohama Aavan A006 240/610-R17

Рабочий объем двигателя

1600 куб.см

Мощность

255 л.с

Шасси

Ohlins

Масса

1220 кг

Тормозная система

AP Racing

Длина

4410

Ширина

1820

Пилоты

Ранее участвовали

Команда:

Стартовый номер:

10

Класс:

Супер-продакшн

Команда:

Стартовый номер:

37

Класс:

Супер-продакшн

Команда:

Личный зачет

Стартовый номер:

45

Класс:

Супер-продакшн

Команда:

Стартовый номер:

50

Класс:

Супер-продакшн

Команда:

Личный зачет

Стартовый номер:

52

Класс:

Супер-продакшн

Описание

ДВИГАТЕЛЬ
— Базовый — ВАЗ-21129
— 4-х цилиндровый 16-клапанный с турбонадувом
— Рабочий объем — 1597 см3
— Максимальная мощность — 255 л.с при 5500 об\мин
— Максимальный крутящий момент — 340 Нм при 4400об\мин
— Максимальные обороты — 7000 об\мин 
— Топливо — бензин А-100
— Турбонагнетатель GARRETT
— Рестриктор согласно технического регламента, диаметр 32мм 

ТРАНСМИССИЯ
— Сцепление однодисковое металлокерамическое с гидроприводом
— КПП 6-ти ступенчатая кулачковая с последовательным переключением
— Дифференциал повышенного трения
— Привод колес с валами равной длины и с промопорой
— Рулевое управление реечного типа с гидроусилителем

ПОДВЕСКА
— Передняя типа McPherson
— Подрамник усиленный LADA VESTA
— Рычаги сварные из стальной трубы с ШС и регулировкой геометрии
— Стабилизатор регулируемый
— Амортизаторная стойка на газонаполненных амортизаторах с изменяемой характеристикой
— Задняя на полузависимой балке модели LADA VESTA
— Стабилизатор регулируемый
— Амортизаторы газонаполненные с изменяемой характеристикой
— Тормозная система 2-х контурного типа с напольными педалями

ТОРМОЗНАЯ СИСТЕМА
— Тормоз передних колес: суппорт 4-х поршневой  AP RACING, диски вентилируемые диаметром 330 мм
— Тормоз задних колес: суппорты 2-х поршневые AP RACING, диски диаметром 278мм
— Регулятор тормозных усилий в контуре задних колес
— Ручной тормоз с гидроприводом
— Колеса 9J-R17 из алюминиевого сплава
— Шины 240\610-17

КУЗОВ
— Облегченный в соответствии с техническими требованиями
— Каркас безопасности вварного типа имеет омологацию РАФ
— Аэродинамический комплект с анти крылом задней оси.

РАФ 2203 Лада сервис техничка

Модель в масштабе 1/43.

Материал металл,пластик,резина.

Состояние модели на фото.

Дополнительная информация и фото по запросу.

Пересылка по России согласно тарифам «Почты России».

Пересылка за пределы РФ по договоренности.

В Москве самовывоз.Район  метро «Сходненская» 

ПРОСЬБА УТОЧНЯТЬ НАЛИЧИЕ МОДЕЛИ ПЕРЕД ПОКУПКОЙ,Т.К. МОДЕЛИ ВЫСТАВЛЕНЫ НА РАЗЛИЧНЫХ ТОРГОВЫХ ПЛОЩАДКАХ.

Информация о продавце
Пользователь
kosmax71 (336)
Дата регистрации
07.11.2015
Был на сайте
13.04.2022 22:50:50
Местонахождение
Россия, г Москва
Рейтинг
342
Другие лоты продавца

5100₽

2д, 22ч 28м

Россия, город Москва

9500₽

6д, 22ч 25м

Россия, Москва, Тверской, Москва

12500₽

2д, 22ч 6м

Россия, город Москва

4500₽

2д, 22ч 6м

Россия, город Москва

1950₽

2д, 21ч 56м

Россия, город Москва

3500₽

2д, 21ч 42м

Россия, город Москва

3500₽

2д, 21ч 42м

Россия, город Москва

8950₽

2д, 21ч 41м

Россия, город Москва

История продаж
Пользователь Цена Кол-во Дата
ESTyler (82) 7950₽ 1 29.09.2021 13:22:30

«Ему лучше не возвращаться в Россию». Карякин — о странном жесте гонщика Северюхина

Российский гонщик Сергей Карякин отреагировал на странное празднование своего соотечественника Артема Северюхина, который изобразил жест, похожий на нацистский.

«К счастью, я не слышал про этого гонщика до этого ужасного момента. Надеюсь, что скоро его забуду, как и другие россияне, так как это настоящий позор. Это подло, низко осквернить честь тех людей, которые воевали за нас, отдали жизнь, и восхвалять ту грязь и нечисть, которая унесла столько жизней наших солдат во время Второй Мировой.

Поэтому я оцениваю крайне негативно и даже хуже, считаю, что этому человеку лучше не возвращаться в Россию, ему нет здесь места. Это позор для него, для его родителей. И в целом я думаю, что такое не смывается. Его смех, который был после этого знака, считаю знаком психологического расстройства. И лучше человек будет болеть, чем в здравом уме совершит такой поступок.

Я считаю, что для России его карьера закончена, потому что те люди,которые будут его поддерживать, будут причастны к тому, что он сделал», — сказал Карякин «СЭ».

Напомним, что скандал произошел после победы российского картингиста на Гран-при Португалии среди юниоров. На церемонии награждения он вдруг показал жест, похожий на нацистский (так называемый «римский салют»).

Глава Российской автомобильной федерации (РАФ) Виктор Кирьянов назвал это «страшной глупостью со стороны молодого гонщика» и призвал сначала дождаться объяснений от самого Северюхина. 

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

Российский гонщик попал в скандал из-за своего жеста на награждении

В Российской автомобильной федерации отреагировали на странный жест нашего гонщика

Ras-связывание открывает c-Raf, обнажая сайт стыковки для митоген-активируемой протеинкиназы киназы

Abstract

Ключевая сигнальная молекула, c-Raf, расположена ниже по течению от Ras и выше по течению от митоген-активируемой протеинкиназы (MEK). ). Мы изучили механизм, лежащий в основе передачи сигнала от Ras к MEK, с помощью зондов, основанных на принципе резонансной передачи энергии флуоресценции. В соответствии с предыдущими моделями было обнаружено, что c-Raf принимает две конформации: открытую активную и закрытую неактивную.Связывание Ras индуцирует переход c-Raf из закрытой в открытую конформацию, что позволяет c-Raf связываться с MEK. В присутствии цитозольного мутанта Ras c-Raf связывался с MEK в цитоплазме, но не фосфорилировал его. Напротив, цитозольный мутант Ras значительно усиливал фосфорилирование MEK с помощью c-Raf, нацеленного на мембрану. Эти результаты продемонстрировали существенную роль индуцированного Ras конформационного изменения в активации MEK c-Raf.

Ключевые слова: флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET), Raf, Ras, митоген-активируемая протеинкиназа (MEK), зеленый флуоресцентный белок (GFP)

Введение

c-Raf серин-треонинкиназа регулирует различные клеточная функция, включая пролиферацию, дифференцировку и онкогенную трансформацию высших эукариотических клеток (Avruch et al. , 1994; Daum et al. , 1994).В дополнение к Ras несколько серин-треониновых киназ, включая Akt, PAK, PKC и PKA, регулируют Raf как положительно, так и отрицательно (Kolch, 2000). Кроме того, каркасные белки, такие как 14-3-3, spred, KSR и RKIP, также играют важную роль в передаче сигналов от Raf к нижестоящим каскадам митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK) (Tzivion et al. , 1998; Yeung и др. , 1999; Morrison, 2001; Wakioka и др. , 2001; Corbit и др. , 2003). Несмотря на большое количество данных о регуляции c-Raf, многие вопросы остаются нерешенными.Например, до сих пор ведутся споры относительно того, является ли рекрутирование c-Raf в компартмент мембраны единственной ролью Ras: то есть остается неясным, требуется ли конформационное изменение, вызванное связыванием Ras, для активации c-Raf.

Недавняя разработка технологии, основанной на зеленом флуоресцентном белке (GFP) и резонансном переносе энергии флуоресценции (FRET), позволила нам отслеживать конформационные изменения в сигнальных молекулах, происходящие в живых клетках (Miyawaki, 2003).Здесь мы разработали основанный на FRET зонд для c-Raf, обозначенный как фотометрический индикатор Raf (Prin), который использовали для изучения влияния связывания Ras на конформационные изменения c-Raf.

Результаты и обсуждение

Зонд для конформационных изменений c-Raf

Мы разработали зонд, обозначенный как Prin–c-Raf, для мониторинга конформационных изменений c-Raf в живых клетках путем слияния желтого флуоресцентного белка (YFP) и циановый флуоресцентный белок (CFP) на амино- и карбоксильном концах c-Raf соответственно ().Гибкий линкер помещали между c-Raf и CFP для минимизации влияния взаимной ориентации переходных диполей флуорофоров на эффективность FRET. Используя эту конструкцию зонда, эффективность FRET увеличивается, когда c-Raf принимает неактивную закрытую конформацию в цитозоле, и эффективность снижается, когда c-Raf принимает активную открытую конформацию на плазматической мембране. Основные характеристики этого зонда описаны в дополнительной информации в Интернете (включая дополнительный рисунок 1 в Интернете).

Влияние аминокислотных замен на конформацию и активность c-Raf. ( A ) Схематическое изображение Prin–c-Raf. Эффективность FRET увеличивается, когда Prin-c-Raf принимает закрытую конформацию в цитозоле. Связывание Ras на плазматической мембране изменяет конформацию на открытое состояние, при котором эффективность FRET снижается. ( B ) Схематическое изображение аминокислотных остатков, проанализированных в этом исследовании. ( C ) Индекс конформации (CFP/YFP) клеток Cos-1, экспрессирующих мутанты Prin-c-Raf в присутствии или в отсутствие H-RasV12 или Akt-active.Столбцы и линии представляют среднее значение и стандартное отклонение соответственно ( n = 20). ( D ) Клетки Cos-1, экспрессирующие мутанты Prin-c-Raf в присутствии или в отсутствие H-RasV12 или Akt-active, анализировали с помощью иммуноблоттинга с антителом против c-Raf-фосфосер 259 или против c-Raf.

Предыдущие биохимические анализы идентифицировали несколько аминокислотных остатков, которые имеют решающее значение для регуляции c-Raf киназы (рассмотрено в Morrison & Cutler, 1997; Avruch et al. , 2001; Chong et al. , 2003;).Во-первых, мы исследовали роли Ser 259 и Ser 621, которые при фосфорилировании служат сайтами связывания 14-3-3. Замена этих остатков аланином заставила Prin-c-Raf принять открытую конформацию и сделать зонд невосприимчивым как к RasV12, так и к Akt-активному. Это наблюдение поддерживает ранее опубликованное предположение о том, что 14-3-3 негативно регулирует c-Raf, удерживая его в закрытой конформации, и что Akt подавляет c-Raf путем фосфорилирования Ser 259 (Zimmermann & Moelling, 1999; Kolch, 2000; Avruch et al. al , 2001).Было обнаружено, что вторая мутация Cys168Ser в богатом цистеином домене консервативной области (CR) 1 приводит к открытой конформации Prin-c-Raf. Это наблюдение снова согласуется с предыдущим отчетом о том, что мутация Cys168Ser нарушает внутримолекулярное связывание CR1 с киназным доменом CR3 и повышает базовую активность c-Raf (Morrison et al. , 1993). В-третьих, мутация Arg89Leu в Ras-связывающем домене Prin-c-Raf не только отменяет Ras-зависимую индукцию открытой конформации, но и повышает уровень Prin-c-Raf в закрытой конформации в присутствии RasV12. .Это наблюдение можно интерпретировать как отражение Ras-индуцированной активации Akt, которая приводит к увеличению уровня фосфорилирования Ser 259 (Dhillon et al , 2002a). Наконец, мы оценили роль двух кластеров связанных с активацией сайтов фосфорилирования в c-Raf (Mason et al , 1999; Chong et al , 2001; Wan et al , 2004): Ser 338/Tyr 341 и Thr 491/Ser 494. Мутации этих остатков у мутантов S338A/Y341A и T491A/S494A не изменили общий ответ Prin-c-Raf на RasV12 и Akt-active, отрицая участие их фосфорилирования в обнаруживаемых конформационных изменениях. по нашему зонду.

Ингибирующая роль фосфорилирования Ser 259 в активности c-Raf широко признана (Tzivion et al. , 1998; Jaumot & Hancock, 2001; Dhillon et al. , 2002b; Kubicek et al. и др. , 2002; Dumaz & Marais, 2003). Однако сообщалось, что фракция c-Raf, фосфорилированного по Ser 259, мала в клетках NIh4T3 и COS (Morrison et al. , 1993; Dhillon et al. , 2002b). Действительно, мы обнаружили, что в клетках Cos-1 менее 10% Prin-c-Raf было фосфорилировано по Ser 259 по сравнению с Prin-c-Raf в присутствии RasV12 или Akt-active (1).Из наблюдения, что Ser 621 фосфорилируется конститутивно (Morrison et al , 1993) и что 14-3-3 связывается с CRD независимым от фосфорилирования образом (Kolch, 2000; Avruch et al , 2001), Можно предположить, что фосфорилирование Ser 259 необходимо для индукции связывания 14-3-3 с CRD, но оно не является необходимым для сохранения закрытой конформации.

МЕК связывается с c-Raf в открытой конформации. ( A ) Конформация Prin-c-Raf в присутствии или отсутствии H-RasV12 или H-RasV12ΔC в клетках Cos-1 ( n =20).( B ) Связывание CFP-c-Raf, CFP-c-RafR89L и c-Raf-CFP с YFP или MEK-YFP анализировали в присутствии или в отсутствие H-RasV12ΔC или Rap1V12ΔC в клетках Cos-7 с помощью межмолекулярный FRET. ( C ) Клетки HeLa, коэкспрессирующие H-Ras, CFP-c-Raf и MEK-YFP, стимулировали 25 нг/мл эпидермального фактора роста и визуализировали с помощью покадровой съемки (дополнительное видео 4 онлайн). Показаны репрезентативные изображения CFP и скорректированного FRET (нижняя панель). Масштабная линейка, 10 мкм. ( D ) Конформация прикрепленного к мембране Prin-c-Raf-pm в присутствии или отсутствии H-RasV12 или H-Ras-V12ΔC в клетках Cos-1 ( n = 20).( E ) Количественно определяли связывание CFP-pm, CFP-c-Raf-pm, CFP-c-RafR89L-pm, c-Raf-CFP-pm и CFP-c-RafS259A-pm с YFP или MEK-YFP. в присутствии или в отсутствие H-RasV12ΔC и Akt-активных в клетках HeLa методом межмолекулярного FRET. Звездочками отмечена значимость t -тестовый анализ: * P <0,01; ** Р <0,001.

Связывание MEK с c-Raf в открытой конформации

Вопрос, к которому мы подошли, используя зонд Prin-c-Raf, заключается в том, достаточно ли для активации рекрутирования на плазматическую мембрану (Leevers et al , 1994; Stokoe et al , 1994; Jaitner et al , 1997), или необходимы ли для активации c-Raf как рекрутирование плазматической мембраны, так и Ras-индуцированные конформационные изменения (Drugan et al , 1996; Mineo et al , 1997). ; Li и др. , 1998).Во-первых, чтобы различить эффекты Ras-индуцированного конформационного изменения c-Raf и Ras-зависимого рекрутирования c-Raf на плазматическую мембрану, мы подготовили мутант Ras, RasV12ΔC, у которого отсутствовал C-конец и, таким образом, локализовали преимущественно в цитоплазме. Было обнаружено, что RasV12ΔC индуцирует конформационные изменения в Prin-c-Raf так же эффективно, как и аутентичный RasV12 (12). Ни рекрутирование мембраны, ни фосфорилирование Ser 338 c-Raf не индуцировались экспрессией RasV12ΔC, что указывает на то, что связывания Ras было достаточно для индуцирования открытой конформации.

Во-вторых, мы предположили, что такое конформационное изменение в c-Raf может индуцировать его связывание с киназой MAPK (MEK). Мы проверили эту возможность, используя метод межмолекулярного FRET с CFP-c-Raf (c-Raf, слитый с С-концом CFP), c-Raf-CFP (c-Raf, слитый с N-концом CFP) и MEK- YFP (MEK, слитый с N-концом YFP) в качестве зондов (4). Чтобы уменьшить любые вторичные эффекты экспрессии MEK, в этом анализе использовали мутант MEK, не содержащий киназы. В клетках Cos-7 RasV12ΔC, но не Rap1V12ΔC, значительно увеличивает степень связывания CFP-c-Raf с MEK, что подтверждает нашу гипотезу.Мутация Arg89Leu в Ras-связывающем домене CFP-c-Raf отменяет это RasV12ΔC-зависимое увеличение при связывании с MEK. Эти наблюдения согласуются с предыдущими сообщениями, показывающими присутствие комплекса Ras-c-Raf-MEK в зависимости от Ras-GTP (Moodie et al. , 1993; Jelinek et al. , 1994; Catling et al. , 1995; Сян и др. , 2002). Примечательно, что FRET не был обнаружен между c-Raf-CFP и MEK-YFP, независимо от присутствия RasV12ΔC.Это наблюдение предполагает, что С-конец c-Raf не был достаточно близок к N-концу MEK для обнаружения FRET в комплексе c-Raf-MEK.

В-третьих, мы исследовали, можно ли визуализировать зависимое от эпидермального фактора роста (EGF) рекрутирование MEK в c-Raf in vivo . При стимуляции EGF c-Raf быстро перемещался к плазматической мембране, где скорректированное значение FRET, FRET C , было заметно увеличено (дополнительное видео 4 онлайн). Через 40 мин c-Raf возвращался в цитозоль с сопутствующим снижением FRET C .Это наблюдение убедительно свидетельствует о том, что в клетках, стимулированных EGF, c-Raf связывается с MEK только в ассоциации с Ras. Чтобы исключить возможность того, что транслокация как c-Raf, так и MEK на плазматическую мембрану была достаточной для возникновения FRET, CFP-c-Raf был заменен на c-Raf-CFP в аналогичных экспериментальных условиях. При стимуляции EGF как c-Raf-CFP, так и MEK-YFP перемещались на плазматическую мембрану; однако увеличение FRET C было заметно ниже, чем при использовании CFP-c-Raf (дополнительное видео 5 онлайн), что отрицает вышеупомянутую возможность.

В-четвертых, мы исследовали, может ли транслокация c-Raf на плазматическую мембрану повлиять на его конформацию, используя мутант Prin-c-Raf, который был слит с С-концевой областью K-Ras4B (10). Эффективность FRET этого зонда, Prin-c-Raf-pm, была аналогична эффективности аутентичного зонда Prin-c-Raf, демонстрируя, что мембранная транслокация сама по себе не индуцирует открытую конформацию. Как RasV12, так и RasV12ΔC индуцировали открытую конформацию Prin-c-Raf-pm так же эффективно, как Prin-c-Raf.

Наконец, мы подтвердили, что экспрессия RasV12ΔC индуцирует связывание c-Raf-pm с MEK с помощью межмолекулярного метода FRET, описанного выше ().Опять же, RasV12ΔC индуцировал связывание CFP-c-Raf-pm с MEK-YFP. CFP-c-RafR89L-pm не показал этого RasV12ΔC-зависимого увеличения связывания с MEK. Также было показано, что Akt-active подавляет связывание c-Raf-pm с MEK и что мутации сайтов связывания 14-3-3, Ser259Ala и Ser621Ala, увеличивают связывание c-Raf-pm с MEK. Эти результаты согласуются с результатами, полученными с использованием нашей модели; а именно, было обнаружено, что связывание Ras открывает c-Raf, открывая сайт стыковки для MEK.

Существенная роль Ras-индуцированного конформационного изменения

Затем мы оценили роль Ras-индуцированного связывания c-Raf с MEK в активации MEK.Во-первых, Prin-c-Raf и Prin-c-Raf-pm были иммунопреципитированы из клеточных лизатов и исследованы на их in vitro киназную активность с использованием GST-MEK в качестве субстрата (). Коэкспрессия RasV12, но не RasV12ΔC, заметно повышала активность киназы MEK Prin-c-Raf. Prin-c-Raf-pm фосфорилировал MEK так же эффективно, как и Prin-c-Raf, очищенный от RasV12-экспрессирующих клеток. Коэкспрессия либо RasV12, либо RasV12ΔC повышала активность киназы in vitro , хотя и незначительно.Это наблюдение, по-видимому, подтверждает предыдущее предположение, что рекрутирования плазматической мембраны достаточно для активации c-Raf. Однако было обнаружено, что стехиометрия связывания Prin-c-Raf с RasV12 in vitro в этих условиях очень низкая (K.T., неопубликованные данные), что наблюдалось в предыдущих исследованиях (Leevers et al , 1994). ; Marais и др. , 1998). Следовательно, мы предположили, что анализ киназы in vitro , принятый в предыдущих исследованиях, в первую очередь отслеживал активацию c-Raf с помощью механизма, зависящего исключительно от мембранной транслокации, но что этот анализ не оценивал влияние Ras-индуцированных конформационных изменений на MEK . in vivo киназная активность c-Raf.Чтобы преодолеть эту методологическую проблему, мы оценили активность Prin-c-Raf-pm, измерив фосфорилирование Ser 217/Ser 221 эндогенного MEK (4). Часть клеточных лизатов подвергали иммунопреципитации и использовали для анализа киназы in vitro , а в параллельном анализе часть клеточных лизатов анализировали на фосфорилирование МЕК. В отличие от эксперимента с киназой in vitro , RasV12ΔC заметно активировал Prin-c-Raf-pm в клетках, подтверждая нашу гипотезу о том, что связывание Ras способно повышать киназную активность c-Raf в контексте живых клеток.

Активация MEK c-Raf в открытой конформации. ( A ) In vitro MEK киназная активность Prin-c-Raf и Prin-c-Raf-pm, которые были иммунопреципитированы из клеток HeLa в присутствии или в отсутствие RasV12 или H-RasV12ΔC ( n =3) . ( B ) Лизаты клеток HeLa подвергали иммунопреципитации для анализа in vitro киназы MEK (IP) или непосредственно использовали (TCL) для иммуноблоттинга с анти-GFP (c-Raf), анти-фосфо-MEK (pMEK) и анти-Flag-антитела (Ras).

В целом эти наблюдения выявили два основных этапа активации c-Raf. Во-первых, связывание Ras разворачивает c-Raf, открывая сайт стыковки для MEK. Во-вторых, для фосфорилирования МЕК дополнительно необходима транслокация c-Raf на плазматическую мембрану. Фосфорилирование c-Raf по Ser 338 и/или Tyr 341 или связывание липидов с регуляторной областью, по-видимому, играет существенную роль в последнем процессе (Mason et al. , 1999; Andresen et al. , 2002).

Спекуляция

Мы предлагаем модифицировать модели сигнального механизма Ras-Raf-MEK следующим образом (). Полузакрытое неактивное состояние (): в покоящихся клетках большая часть c-Raf не фосфорилирована по Ser 259, а остается в полузакрытом неактивном состоянии, вероятно, за счет взаимодействия CRD с каталитическим доменом (Cutler et al , 1998). ). Следует отметить, что полузакрытое состояние, по-видимому, представляет собой динамическое равновесие между небольшой долей открытой конформации и большой долей закрытой конформации.Эта идея, по-видимому, согласуется с нашим выводом о том, что значительный уровень ассоциации между MEK и c-Raf был обнаружен в отсутствие Ras (1), и более ранним наблюдением, что экспрессии мембранного нацеливания c-Raf достаточно для активации ERK (Leevers et al. al , 1994; Stokoe et al , 1994). Открытое неактивное состояние (): при стимуляции Ras-GTP связывается с c-Raf и обнажает свой сайт стыковки MEK. Важно, однако, что последующего связывания c-Raf с МЕК недостаточно для фосфорилирования МЕК.Открытое активное состояние (): предыдущие исследования показали, что фосфорилирование нескольких аминокислотных остатков, включая Ser 338, Tyr 341, Thr 491 и Ser 494, и/или связывание липидов с c-Raf должно происходить на плазматической мембране, чтобы обеспечить фосфорилирование MEK, вероятно, потому, что эти модификации необходимы для активации каталитического домена (Mason et al. , 1999; Chong et al. , 2001; Wan et al. , 2004) или для связывания с MEK (Xiang et al. , 2002).В нашей системе анализа мембранная транслокация c-Raf кажется достаточной для индукции такой модификации. Однако такая модификация c-Raf и, следовательно, последующая активация MEK могут регулироваться в зависимости от клеточного контекста или субклеточных компартментов. Закрытое неактивное состояние (): фосфорилирование Ser 259 с помощью Akt делает c-Raf способным принимать закрытую конформацию, хотя необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять, в какой степени это фосфорилирование Ser 259 способствует прекращению активации Raf.Наконец, переход из закрытого неактивного состояния в полузакрытое неактивное состояние путем дефосфорилирования Ser 259 также должен регулироваться, и уровень фосфорилирования Ser 259, вероятно, варьирует среди разных типов клеток. Возможно, уровень фосфорилирования Ser 259 может быть ниже в трансформированных клетках, таких как использованные в нашем исследовании клетки HeLa и Cos-1, чем в нетрансформированных клетках.

Четыре состояния c-Raf в процессе передачи сигналов. ( A ) Полузакрытое неактивное состояние: в покоящихся клетках большая часть c-Raf принимает полузакрытую конформацию.( B ) Открытое неактивное состояние: при стимуляции Ras-GTP связывается с c-Raf и индуцирует связывание MEK с c-Raf. ( C ) Открытое активное состояние: модификации плазматической мембраны, такие как фосфорилирование и связывание липидов, позволяют c-Raf фосфорилировать MEK. ( D ) Закрытое неактивное состояние: c-Raf, фосфорилированный по Ser 259, принимает закрытую конформацию посредством связывания 14-3-3 и возвращается в цитозоль. Закрашенные кружки представляют собой остатки фосфотирозина, фосфосерина и фосфотреонина.

Было показано, что все большее количество каркасных белков регулирует передачу сигналов Ras-Raf-MEK (Morrison & Davis, 2003). В большинстве наших экспериментальных условий количество зондов Prin-c-Raf составляло около 10 6 на клетку (данные не показаны). По-видимому, 14-3-3 превышает это число, но вклад других каркасных белков в нашу систему анализа следует изучить и интегрировать в модель в будущих исследованиях.

Ладовый узел RAF Loveseat | Караколь

Ладовый узел RAF Loveseat
УПХ-019-RL1-Б

КОЛЛЕКЦИЯ: ОБИВКА КАРАКОЛЕ

Размеры в дюймах: 63.25Ш x 36,5Г x 30,5В

Размеры в сантиметрах: 160,66 Ш x 92,71 Г x 77,47 В

Создайте зону отдыха своей мечты с помощью настраиваемых сегментов элегантных сидений с изысканной резьбой. Исключительные снаружи, эти вдохновленные изделия имеют вставки с резными панелями ладов, вставленными в их внешние спинки.Этот единственный в своем роде рисунок ладов был вдохновлен узким окном замка и решеткой, предназначенной для пропуска воздуха и света. Тонко обитый изысканной тканью, он предлагает бесконечный стиль и удобное сиденье, регулируемое вручную в восьми направлениях. Мягкая серебряная краска придает мерцание деталям с панелями и рифленым ножкам.

ФУНКЦИИ:
  • Резная лепнина на внешней стороне руки.
  • Конические ножки с рифлеными канавками.
  • Рассыпная подушка с плотной спинкой.
  • Свободные подушки сидений.
СТРОИТЕЛЬСТВО:
  • Пружинная подушка.
  • Сиденье с регулировкой по 8 направлениям.
  • Перьевые подушки.

ОТДЕЛКА:

Мягкая серебряная краска

ТКАНЬ:

Ткань корпуса: 2778 71CC Ткань подушки: 2 подушки размером 20 x 20 дюймов 8379 71CC 2 подушки размером 19 x 19 дюймов 3231 741CC

Из-за различий, присущих мониторам и браузерам, образцы цветов могут отображаться по-разному на разных мониторах.Для наиболее точного представления, пожалуйста, обратитесь к физическим образцам, доступным у наших розничных продавцов.

ЛЮБЛЮ ЭТО, ПОДЕЛИТЕСЬ ЭТИМ: печать Посмотреть отрывок

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, если вы не решите ввести его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступ к остальной части вашего компьютера, и только сайт, создавший файл cookie, может его прочитать.

(PDF) Сравнение эффективности двух методов TR-FRET для обнаружения in vitro естественных и синтезированных ингибиторов сигнального пути Raf/MEK/ERK

International Journal of High Throughput Screening 2010:1

International Journal of High Скрининг

Опубликуйте свою работу в этом журнале

Отправьте рукопись сюда: http://www.dovepress.com/international-journal-of-high-throughput-screening-journal

International Journal of High Throughput Screening — это международный,

рецензируемый журнал с открытым доступом, в котором публикуются оригинальные исследования, отчеты,

комментарии, посвященные всем аспектам высокопроизводительного скрининга, особенно связанным с открытием новых лекарств и смежными

областями биологии и химии. Система управления рукописями

полностью онлайн и включает в себя очень быструю и справедливую систему рецензирования

.Посетите http://www.dovepress.com/testimonials.php, чтобы прочитать

реальных цитат опубликованных авторов.

98

Saab et al Dovepress

отправить рукопись | www.dovepress.com

Dovepress

Dovepress

15. Menon SS, Whitfield LR, Sadis S, et al. Фармакокинетика (ФК) и

фармакодинамика (ФД) PD 0325901, ингибитора MEK

второго поколения после многократных пероральных доз PD 0325901 у пациентов с запущенным раком

.J Clin Oncol [аннотация]. 2005;23(№168):3066.

16. фон Ахсен О., Бёмер У. Высокопроизводительный скрининг ингибиторов киназы.

Химия Био Хим. 2005; 6: 481–490.

17. Исида А., Камешита И., Суеёси Н., Танигути Т., Сигери Ю. Последние

достижения в технологиях анализа протеинкиназ. J Pharmacol

Sci. 2007; 103:5–11.

18. Alessi DR, Cohen P, Ashworth A, et al. Анализ и экспрессия митоген-активируемой протеинкиназы

, киназы MAP-киназы и Raf.Методы

Фермент. 1995; 255: 279–290.

19. Указания по применению: разработка и оптимизация анализов киназ

с использованием новых реагентов LANCE Ultra TR-FRET: http://las.perkinelmer.

com/content/applicationnotes/app_developmentoptimizationkinasela

ceultratrfretreagents.pdf

20. Риддл С.М., Ведвик К.Л., Хэнсон Г.Т., Фогель К.В. Анализ

резонансной переноса энергии флуоресценции с временным разрешением с использованием физиологических белковых субстратов

: применение пар тербий-флуоресцеин и тербий-

зеленый флуоресцентный белок резонансной передачи энергии флуоресценции.

Анальная биохимия. 2006; 356: 108–116.

21. Купчо К.Р., Бруинсма Р., Халлис Т.М., и соавт. Флуоресцентный каскад и прямые анализы

для характеристики ингибиторов сигнального пути Raf.

Curr Chem Genom. 2008; 1:43–53.

22. Yeung K, Seitz T, Li S, et al. Подавление активности киназы Raf-1 и передачи сигналов киназы

MAP с помощью RKIP. Природа. 1999; 401:173–177.

23. Yeung K, Janosch P, Mcferran B, et al. Механизм подавления

Raf/MEK/пути киназы, регулируемой внеклеточным сигналом, белком-ингибитором киназы Raf

.Мол Селл Биол. 2000;20:3079–3085.

24. Парк С., Рат О., Бич С. и др. Регуляция связывания RKIP с N-областью

киназы Raf-1. ФЭБС лат. 2006; 580:6405–6412.

25. Atmanene C, Laux A, Glattard E, et al. Характеристика взаимодействий человеческого

и бычьего фосфатидилэтаноламин-связывающего белка (PEBP/RKIP)

с морфином и морфин-глюкуронидами, определенная с помощью нековалентной масс-спектрометрии

. Медицинский научный монитор.2009; 15: 178–187.

26. Zhang JH, Chung TD, Oldenburg KR. Простой статистический параметр для использования

при оценке и валидации высокопроизводительных скрининговых анализов.

J Экран Biomol. 1999; 4: 67–73.

27. Wilhelm SM, Carter C, Tang L, et al. BAY 43-9006 проявляет пероральную противоопухолевую активность широкого спектра

и нацеливается на путь RAF/MEK/ERK

и рецепторные тирозинкиназы, участвующие в опухолевой прогрессии

и ангиогенезе.Рак Рез. 2004;64:7099–7109.

28. Лэки К., Кори М., Дэвис Р. и соавт. Открытие мощных ингибиторов киназы cRaf1

. Bioorg Med Chem Lett. 2000; 10: 223–226.

29. Hall-Jackson CA, Eyers PA, Cohen P, et al. Парадоксальная активация

Raf новым ингибитором Raf. хим. биол. 1999; 6: 559–568.

30. Бакаре О., Ашендель К.Л., Пэн Х., Залков Л.Х., Берджесс Э.М. Синтез и ингибирующая активность MEK1 имидозамещенных 2-хлор-1,

4-нафтохинонов.Биоорг Мед Хим. 2003; 11:3165–3170.

31. Favata MF, Horiuchi KY, Manos EJ, et al. Идентификация нового

ингибитора митоген-активируемой протеинкиназы киназы. Дж. Биол. Хим.

1998; 273:18623–18632.

32. Алесси Д.Р., Куэнда А., Коэн П., Дадли Д.Т., Салтиэль А.Р. PD098059 представляет собой

специфический ингибитор активации митоген-активируемой протеинкиназы

in vitro и in vivo. Дж. Биол. Хим. 1995; 270:27489–27494.

33.Davies SP, Reddy H, Caivano M, Cohen P. Специфичность и механизм

действия некоторых широко используемых ингибиторов протеинкиназы. Biochem J.

2000; 351:95–105.

34. Охори М., Киношита Т., Окубо М. и др. Идентификация селективного ингибитора ERK

и структурное определение комплекса ингибитор-ERK2.

Biochem Biophys Res Commun. 2005; 336: 357–363.

35. McDonald OB, Chen WJ, Ellis B, et al. Сцинтилляционный анализ близости

киназного каскада Raf/MEK/ERK: высокопроизводительный скрининг и идентификация селективных ингибиторов ферментов.Анальная биохимия.

1999; 268:318–329.

36. Келлер Э.Т. Гены-супрессоры метастазирования: роль ингибитора киназы Raf

Protein (RKIP) противораковых препаратов. 2004; 15: 663–669.

37. Chatterjee D, Bai Y, Wang Z, et al. RKIP сенсибилизирует простату и

клеток рака молочной железы к апоптозу, индуцированному лекарствами. Дж. Биол. Хим. 2004; 279:

17515–17523.

38. Jazirehi AR, Bonavida B. Клеточные и молекулярные пути передачи сигналов, модулируемые ритуксимабом (ритуксан, анти-CD20 mAb) при

неходжкинской лимфоме: последствия химиосенсибилизации и

терапевтического вмешательства.Онкоген. 2005; 24:2121–2143.

39. Зенг Л., Имамото А., Рознер М.Р. Ингибирующий белок Raf kinase (RKIP):

физиологический регулятор и будущая терапевтическая мишень. Экспертное заключение Тер

Мишени. 2008; 12:1275–1287.

40. Цзя И., Куинн С.М., Таланян Р.В.

Разработка тестов in vitro для открытия лекарств: исследование с киназой MAP3 человека COT. Экспертное заключение ЛС

Дисков. 2007; 2: 909–915.

41. Jia Y, Quinn CM, Clabbers A, et al.Сравнительный анализ различных форматов анализа киназы СОТ

in vitro и их применения для идентификации и характеристики ингибиторов. Анальная биохимия. 2006; 350: 268–276.

Закрепленные датчики FRET обнаруживают локальную активацию каспазы до дегенерации нейронов | Молекулярная нейродегенерация

  • Raff MC, Whitmore AV, Finn JT: саморазрушение аксонов и нейродегенерация. Наука. 2002, 296: 868-871. 10.1126/научн.1068613.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Williams DW, Kondo S, Krzyzanowska A, Hiromi Y, Truman JW: Локальная активность каспазы направляет поглощение дендритов во время обрезки.Нат Нейроски. 2006, 9: 1234-1236. 10.1038/nn1774.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Николаев А., Маклафлин Т., О’Лири Д.Д., Тессье-Лавин М.: АРР связывает DR6, вызывая обрезку аксонов и гибель нейронов через отдельные каспазы. Природа. 2009, 457: 981-989. 10.1038/природа07767.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Albrecht S, Bogdanovic N, Ghetti B, Winblad B, LeBlanc AC: Активация каспазы-6 в головном мозге с семейной болезнью Альцгеймера, несущем мутации белка-предшественника амилоида или пресенилина I или пресенилина II.J Neuropathol Exp Neurol. 2009, 68: 1282-1293. 10.1097/NEN.0b013e3181c1da10.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Guo H, Albrecht S, Bourdeau M, Petzke T, Bergeron C, LeBlanc AC: Активная каспаза-6 и тау-белок, расщепленный каспазой-6, в нитях нейропиля, нейритных бляшках и нейрофибриллярных клубках при болезни Альцгеймера. Ам Джей Патол. 2004, 165: 523-531. 10.1016/S0002-9440(10)63317-2.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Лазебник Ю.А., Такахаши А., Мойр Р.Д., Гольдман Р.Д., Пуарье Г.Г., Кауфманн С.Х., Эрншоу В.К.: Исследования ламиновой протеиназы выявили множественные параллельные биохимические пути во время выполнения апоптоза.Proc Natl Acad Sci USA. 1995, 92: 9042-9046. 10.1073/пнас.92.20.9042.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Mattson MP: Пути к болезни Альцгеймера и от нее. Природа. 2004, 430: 631-639. 10.1038/природа02621.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Takahashi A, Alnemri ES, Lazebnik YA, Fernandes-Alnemri T, Litwack G, Moir RD, Goldman RD, Poirier GG, Kaufmann SH, Earnshaw WC: расщепление ламина A Mch3 альфа, но не CPP32: множественный интерлейкин 1 протеазы, родственные бета-превращающим ферментам, с отличными свойствами распознавания субстрата активны при апоптозе.Proc Natl Acad Sci USA. 1996, 93: 8395-8400. 10.1073/пнас.93.16.8395.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Такемото К., Нагаи Т., Мияваки А., Миура М.: Пространственно-временная активация каспазы, выявленная индикатором, нечувствительным к воздействию окружающей среды. Джей Селл Биол. 2003, 160: 235-243. 10.1083/jcb.200207111.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Yuan A, Kumar A, Peterhoff C, Duff K, Nixon RA: Скорость аксонального транспорта in vivo не зависит от делеции или гиперэкспрессии тау у мышей.Дж. Нейроски. 2008, 28: 1682-1687. 10.1523/JNEUROSCI.5242-07.2008.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Buee L, Bussiere T, Buee-Scherrer V, Delacourte A, Hof PR: изоформы тау-белка, фосфорилирование и роль в нейродегенеративных расстройствах. Res Brain Res Rev. 2000, 33: 95-130.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Булина М.Е., Чудаков Д.М., Британова О.В., Янушевич Ю.Г., Староверов Д.Б., Чепурных Т.В., Мерзляк Е.М., Шкроб М.А., Лукьянов С., Лукьянов К.А. Генетически кодируемый фотосенсибилизатор.Нац биотехнолог. 2006, 24: 95-99. 10.1038/nbt1175.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Керр Дж. Ф., Уилли А. Х., Карри А. Р.: Апоптоз: основное биологическое явление с широким спектром последствий для кинетики тканей. Бр Дж Рак. 1972, 26: 239-257. 10.1038/bjc.1972.33.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Taylor RC, Cullen SP, Martin SJ: Апоптоз: контролируемое разрушение на клеточном уровне.Nat Rev Mol Cell Biol. 2008, 9: 231-241.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Lu DC, Rabizadeh S, Chandra S, Shayya RF, Ellerby LM, Ye X, Salvesen GS, Koo EH, Bredesen DE: Второй цитотоксический протеолитический пептид, полученный из предшественника амилоидного бета-протеина. Нат Мед. 2000, 6: 397-404. 10.1038/74656.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Dickson TC, King CE, McCormack GH, Vickers JC: Нейрохимическое разнообразие дистрофических нейритов на ранних и поздних стадиях болезни Альцгеймера.Опыт Нейрол. 1999, 156: 100-110. 10.1006/доб.1998.7010.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Tsai J, Grutzendler J, Duff K, Gan WB: Отложение фибриллярного амилоида приводит к локальным синаптическим аномалиям и поломке ветвей нейронов. Нат Нейроски. 2004, 7: 1181-1183. 10.1038/nn1335.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Li P, Nijhawan D, Budihardjo I, Srinivasula SM, Ahmad M, Alnemri ES, Wang X: Цитохром c и dATP-зависимое образование комплекса Apaf-1/каспаза-9 инициирует каскад апоптотических протеаз.Клетка. 1997, 91: 479-489. 10.1016/S0092-8674(00)80434-1.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Хакем Р., Хакем А., Дункан Г.С., Хендерсон Дж.Т., Ву М., Соенгас М.С., Элиа А., де ла Помпа Дж.Л., Каги Д., Кху В. и др.: Дифференциальная потребность в каспазе 9 в путях апоптоза in vivo. Клетка. 1998, 94: 339-352. 10.1016/S0092-8674(00)81477-4.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Kuida K, Haydar TF, Kuan CY, Gu Y, Taya C, Karasuyama H, Su MS, Rakic ​​P, Flavell RA: Снижение апоптоза и опосредованная цитохромом c активация каспазы у мышей, лишенных каспазы 9.Клетка. 1998, 94: 325-337. 10.1016/S0092-8674(00)81476-2.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Morishima N, Nakanishi K, Takenouchi H, Shibata T, Yasuhiko Y: Каскад стресс-специфических каспаз эндоплазматического ретикулума при апоптозе. Цитохром с-независимая активация каспазы-9 каспазой-12. Дж. Биол. Хим. 2002, 277: 34287-34294. 10.1074/jbc.M204973200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Рао Р.В., Кастро-Обрегон С., Франковски Х., Шулер М., Стока В., дель Рио Г., Бредесен Д.Е., Эллерби Х.М.: Связь стресса эндоплазматического ретикулума с программой гибели клеток.Apaf-1-независимый внутренний путь. Дж. Биол. Хим. 2002, 277: 21836-21842. 10.1074/jbc.M202726200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Nakagawa T, Zhu H, Morishima N, Li E, Xu J, Yankner BA, Yuan J: Каспаза-12 опосредует эндоплазматический ретикулум-специфический апоптоз и цитотоксичность бета-амилоида. Природа. 2000, 403: 98-103. 10.1038/47513.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Рон Т.Т., Риссман Р.А., Дэвис М.С., Ким Ю.Е., Котман К.В., Хед Э. Активация каспазы-9 и расщепление тау-каспазы в головном мозге при болезни Альцгеймера.Нейробиол Дис. 2002, 11: 341-354. 10.1006/nbdi.2002.0549.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Д’Амелио М., Каваллуччи В., Миддей С., Маркетти С., Пачони С., Ферри А., Диамантини А., Де Зио Д., Каррара П., Баттистини Л., Морено С., Баччи А., Аммассари-Теуле М., Мари Х. , Cecconi F: Каспаза-3 вызывает раннюю синаптическую дисфункцию в мышиной модели болезни Альцгеймера. Нат Нейроски. 2011, 14: 69-76. 10.1038/пп.2709.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Клайман Г., Петцке Т.Л., Хаммонд Дж., Леблан А.С.: Цели активности каспазы-6 в нейронах человека и болезнь Альцгеймера.Мол клеточная протеомика. 2008, 7: 1541-1555. 10.1074/MCP.M800007-MCP200.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Boix J, Llecha N, Yuste VJ, Comella JX: Характеристика процесса гибели клеток, индуцированного стауроспорином в клеточных линиях нейробластомы человека. Нейрофармакология. 1997, 36: 811-821. 10.1016/S0028-3908(97)00030-0.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Дешмукх М., Джонсон Э.М.: Стауроспорин-индуцированная гибель нейронов: множественные механизмы и методологические последствия.Смерть клеток 2000, 7: 250-261. 10.1038/sj.cdd.4400641.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Li K, Li Y, Shelton JM, Richardson JA, Spencer E, Chen ZJ, Wang X, Williams RS: Дефицит цитохрома c вызывает гибель эмбрионов и ослабляет вызванный стрессом апоптоз. Клетка. 2000, 101: 389-399. 10.1016/S0092-8674(00)80849-1.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Wei MC, Zong WX, Cheng EH, Lindsten T, Panoutsakopoulou V, Ross AJ, Roth KA, MacGregor GR, Thompson CB, Korsmeyer SJ: Проапоптотические BAX и BAK: необходимые ворота к митохондриальной дисфункции и смерти.Наука. 2001, 292: 727-730. 10.1126/науч.1059108.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Yuste VJ, Sanchez-Lopez I, Sole C, Encinas M, Bayascas JR, Boix J, Comella JX: Предотвращение стауроспорин-индуцированного апоптоза с помощью Bcl-X(L), но не Bcl-2 или ингибиторы каспазы позволяют широко дифференцировать клетки нейробластомы человека. Дж. Нейрохим. 2002, 80: 126-139. 10.1046/j.0022-3042.2001.00695.х.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Cotman CW, Anderson AJ: Потенциальная роль апоптоза в нейродегенерации и болезни Альцгеймера. Мол Нейробиол. 1995, 10: 19-45. 10.1007/BF02740836.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Biswas SC, Shi Y, Vonsattel JP, Leung CL, Troy CM, Greene LA: Bim повышен в нейронах, страдающих болезнью Альцгеймера, и необходим для индуцированного бета-амилоидом апоптоза нейронов.Дж. Нейроски. 2007, 27: 893-900. 10.1523/JNEUROSCI.3524-06.2007.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Gong Y, Chang L, Viola KL, Lacor PN, Lambert MP, Finch CE, Krafft GA, Klein WL: Мозг, пораженный болезнью Альцгеймера: присутствие олигомерных бета-лигандов (ADDL) предполагает молекулярную основу обратимой памяти потеря. Proc Natl Acad Sci USA. 2003, 100: 10417-10422. 10.1073/пнас.1834302100.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Haass C, Selkoe DJ: Растворимые белковые олигомеры при нейродегенерации: уроки бета-пептида амилоида болезни Альцгеймера.Nat Rev Mol Cell Biol. 2007, 8: 101-112. 10.1038/nrm2101.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Lacor PN, Buniel MC, Chang L, Fernandez SJ, Gong Y, Viola KL, Lambert MP, Velasco PT, Bigio EH, Finch CE и др.: Синаптическое нацеливание бета-амилоидных олигомеров, связанных с болезнью Альцгеймера. Дж. Нейроски. 2004, 24: 10191-10200. 10.1523/JNEUROSCI.3432-04.2004.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Уолш Д.М., Селко Д.Дж.: Бета-олигомеры – десятилетие открытий.Дж. Нейрохим. 2007, 101: 1172-1184. 10.1111/j.1471-4159.2006.04426.х.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Ivins KJ, Bui ET, Cotman CW: Бета-амилоид вызывает локальную дегенерацию нейритов в культивируемых нейронах гиппокампа: свидетельство нейритного апоптоза. Нейробиол Дис. 1998, 5: 365-378. 10.1006/nbdi.1998.0228.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • de Calignon A, Fox LM, Pitstick R, Carlson GA, Bacskai BJ, Spires-Jones TL, Hyman BT: Активация каспазы предшествует и приводит к клубкам.Природа. 2010, 464: 1201-1204. 10.1038/природа08890.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Стайн В.Б., Дальгрен К.Н., Краффт Г.А., ЛаДу М.Дж.: In vitro характеристика условий для олигомеризации бета-амилоидных пептидов и фибриллогенеза. Дж. Биол. Хим. 2003, 278: 11612-11622. 10.1074/jbc.M210207200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • CARACOLE — ГРАДОВОЙ УЗЕЛ RAF LOVESEAT

    الشحن والتوصيل

     

    رسوم الشحن

    . تختلف رسوم التوصيل بناءا على قيمة الطلب, وتكون موضضة أثناء عملية الدفع عبر الموقع الإلكتروني

     

    نوّفر خدمة التوصيل لجميع مناطق المملكة ودول الخليج. بالنسبة للمناطق الرئيسية في المملكة العربية السعودية فإ التوصيل يكون خلال 10 أيام عمل, وللمزيد من المعلومات حول مدة التوصيل للمناطق الأخرى يرجى التواصل معنا عبر: [email protected]

     

    أما بالنسبة لدول الخنسبة لدول الخليج: الكويت, الإمارات, عمان والبحرين فإن مدة التوصيل تكون خلال 15 يوم عمل

    .(مرحلة التوصيل تتم فقط للطلبات مسبقة الدفع)

    Доставка:

    Мы предлагаем бесплатную установку всей мебели, купленной в нашем магазине, кроме освещения (люстры, бра и настольная лампа).

    :تُحسب قيمة الشحن لجميع الطلبات كالآتي

     

    الشحن إلى

    قيمة الطلب

    قيمة الشحن

    الدفع عند الاستلام

    الماطق الرئيسية في المملكة العربية السعودية

    أقل من ٥٠٠ ريال سعودي

    ٤٠ ريال سعودي

    ١٧ ريال سعودي

    باقي مناطق المملكة العربية السعودية

    أقل من ٥٠٠ ريال سعودي

    ٤٠ ريال سعودي

    الطلبات مسبقة الدفع فقط

    الماطق الرئيسية في المملكة العربية السعودية

    ٥٠٠ ريال سعودي وأكثر

    شحن مجاني

    ١٧ ريال سعودي

    باقي مناطق المملكة العربية السعودية

    ٥٠٠ ريال سعودي وأكثر

    شحن مجاني

    الطلبات مسبقة الدفع فقط

     

    دُول الخليج: الشحن مجاني لأي طلب بقيمة أكثر من ٥٠٠ريال

    :التركيب

    نوفر خدمة التركيب لجميع الأثاث الذي يتم شرائه من معارضنا ماعدا الإنارات (الثريات, الشموع والإنارات الجدارية, والأبجورات)

     

    :في حال كانت ( القطع/ العناصر ) مفقودة أو تالفة

     

    .على الرغم من الحرص الشديد الذي يتم اتخاذه أثناء التغليف, إلا أن الضرر يحدث أأيانا أثناء التوصيل

    : لمساعدتنا في الإسراع بالمطالبة بالتعويض عن الضرر نطلب منك الحرص نطلب منك الحرص على تنفيذ التالية

    .التحقق من محتويات الشحنة ووجود جميع القطع المطلوبة أمام عامل التوصيل —
    .توقيع إيصال الاستلام —
    .تضمين أي ملاحظات تخص تلف أو ضرر القطع على فاتورة الاستلام الموقعة —
    .لاترمي أي جزء يخص التغليف الخارجي أو الداخلي للقطعة —
    .طلب تبديل الططع التالفة أو المتضررة عن طريق التواصل معنا خلال 7 أيام من تاريخ التوصيل —

     .مفروشات الرقيب غير مسؤولة عن تبديل/إصلاح  أي تلف/ضرر يخص القطع بيدا 5 هذل القطع 0هذلا 9

     

     

     

     

    Отгрузка и доставка

    Стоимость доставки:

    Стоимость доставки зависит от стоимости заказа. Эти расходы будут отображаться в процессе оформления заказа.

    Мы предлагаем доставку во все регионы Саудовской Аравии и во все страны Персидского залива. В большинство крупных городов Саудовской Аравии мы доставляем в течение 10 рабочих дней, если вам нужна более подробная информация о сроках доставки в отдаленные районы, пожалуйста, свяжитесь с нами.

    В страны Персидского залива: Кувейт, ОАЭ, Оман и Бахрейн мы доставляем в течение 15 рабочих дней. (Обрабатываются и отправляются только предоплаченные заказы).

    Для всех продуктов, которые мы продаем, ваши расходы на доставку будут работать следующим образом:

    Доставка по адресу:

    Стоимость заказа

    Стоимость доставки

    Плата за наложенный платеж

    Основные города Саудовской Аравии

    Менее 500 саудовских риялов

    40 саудовских риалов

    17 саудовских риалов

    Остальные города КСА

    Менее 500 саудовских риялов

    40 саудовских риалов

    Только предоплаченные заказы.

    Основные города Саудовской Аравии

    500 саудовских риалов и выше

    Бесплатная доставка

    17 саудовских риалов

    Остальные города КСА

    500 саудовских риалов и выше

    Бесплатная доставка

    Только предоплаченные заказы.

    Страны GCC: доставка бесплатна для любого заказа на сумму более 500 SAR.

    Доставка и установка:

    Мы предлагаем бесплатную установку всей мебели, купленной в нашем магазине, кроме освещения (люстры, бра и настольная лампа).

    Если элементы отсутствуют или повреждены:

    Несмотря на то, что при упаковке соблюдается большая осторожность, во время транспортировки иногда случаются повреждения.Чтобы помочь нам возместить ущерб и ускорить процесс возмещения, мы требуем, чтобы вы выполнили следующие шаги:

    •       Пожалуйста, проверьте товар перед курьером, проверив содержимое пакета и распишитесь в квитанции о доставке с указанием доставки.
    •       Подпишите квитанцию ​​о доставке с указанием доставки.

    •       Если товар имеет какие-либо повреждения, укажите это же примечание в квитанции о доставке.
    •       Не выбрасывайте оригинальную внутреннюю или внешнюю упаковку.
    •       Запросите замену или сообщите о повреждении, связавшись с нами в течение 7 рабочих дней с даты доставки. Мебель Alrugaib не несет ответственности за поврежденные/отсутствующие предметы по истечении этого периода.

    Измерения FRET одной молекулы в клетке выявили три изменения конформационного состояния белка RAF.

    Измерения FRET одной молекулы в клетке выявили три изменения конформационного состояния белка RAF.
    Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Общие предметы  (IF3.77), Pub Date: 07.05.2019 , DOI: 10.1016/j.bbagen.2019.04.022
    Kenji Okamoto, Kayo Hibino, Yasushi Sako

    Background

    функции. Значительные усилия были направлены на исследование структуры белков, главным образом очищенных белков в средах in vitro . Белки функционируют в живых клетках, и поэтому белковые структуры должны регулироваться взаимодействием с различными молекулами, некоторые из которых участвуют в реакционных сетях, в зависимости от состояний, условий или действий клетки.Поэтому очень важно понимать структурное поведение белков в живых клетках.

    Методы

    Измерения одномолекулярного резонансного переноса энергии Фёрстера (smFRET) проводились с использованием метода альтернативного лазерного возбуждения (ALEX). Были получены распределения smFRET белков цитозольной быстроускоренной фибросаркомы (RAF) в живых клетках HeLa с исключением негативного влияния фотообесцвеченных флуорофоров и не полностью меченых белков на smFRET.

    Результаты

    smFRET гистограммы RAF дикого типа (wt) в живых клетках показали два основных пика, тогда как у мутанта S621A, который, как считается, имел расширенную структуру, был почти один пик. Сдвиг популяции, включающий пики RAF дикого типа, был обнаружен при стимуляции эпидермальным фактором роста. Спонтанные переходы между конформационными состояниями, соответствующими двум пикам, также были обнаружены с использованием двухканального метода оценки распределения плотности на основе ядра FRET по сравнению со статическими образцами двухцепочечной ДНК.

    Выводы

    Цитозольный CRAF имеет как минимум три конформационных состояния; кроме закрытой и открытой формы, четко определялась полностью открытая форма. На основании полученных результатов предлагается спекулятивная структурная модель CRAF.

    Общее значение

    Успешно идентифицированы структурное распределение и изменения белков в живых клетках в результате внутриклеточных взаимодействий.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.