Дрифт по-русски · Играть онлайн бесплатно

В игре «Лада: Дрифт по-русски» есть ровно то, что вы можете от нее ожидать, взглянув на название: культовый автомобиль ВАЗ-2106 марки «Лада» (с возможностью тюнинга!), реалистичный дрифт и — колорита ради — поддержка русского языка.

На весь экран Управление 🕹️ Видео Похожие игры Добавить в «Мои игры» ❤️ Убрать из «Моих игр» 💔 Сохранить на компьютер 💾

По умолчанию браузер сохранит файл с игрой в папку «Загрузки». Оттуда вы можете самостоятельно переместить его, например, на рабочий стол.

Esc

F1

F2

F3

F4

F5

F6

F7

F8

F9

F10

F11

F12

~

1

2

3

4

5

6

7

8

9

0

Bspace

Tab

Q

W

E

R

T

Y

U

I

O

P

[

]

Caps

A

S

D

F

G

H

J

K

L

:

Enter

Shft

Z

X

C

V

B

N

M

<

>

?

Shift

Ctrl

Win

Alt

Alt

Ctr

↑

←

↓

→

Начать игру

GAMASEXUAL. RU

Нажмите на изображение, чтобы запустить игру

Lada Russian Car Drift //

8.12.2018

Дрифт в любую погоду // Лада 2105 «Жигулятор»

Скоро лето, а это значит новый гоночный сезон в самых разнообразных дисциплинах уже не за горами. И только у любителей дрифтинга сезон длиться целый год!

Свой первый опыт герой нашего рассказа и его «классика» получали именно на снегу.

Знакомитесь, Андрей Бак и его Лада 2105 «Жигулятор». Я думаю многие из Вас уже неоднократно видели эту Хаки Пятерку на просторах социальных сетей. Стоит отметить что автомобиль создавался для участия в зимнем дрифте и просто покатушек на ВВЦ, в общем для веселой жизни.

Это уже пятая Пятерка владельцем который был Андрей. Первое время о дрифт-проекте не было и речи, автомобиль томился у подъезда и выступал в роли склада для всякого хлама с балкона. И спустя время появилась идея переделать старое ведерко по гоночный болид.

И процесс корчевания начался, что же сделать в первую очередь? Может двигатель или подвеску? Нет, первым делом нужно поставить модные диски и нанести аэрографию рекламы колбасы. Ну на самом деле это не палка копченой колбасы, а всего лишь сигара cigarworld!

Закончим с шутками и перейдем к подвеске, спереди установили рычаги Турботема, 14 тормоза, волга пружины, амортизаторы митсубиси паджеро, стабилизатор родной.

Сзади установлены пружины 2104, амортизаторы плаза спорт, тяги полиуретан. Поскольку машина станет значительно ниже пришлось переделывать арки, что бы колеса за них не задевали. Срезаем и крепим чуть выше на саморезы, получилось довольно не плохо.

Как известно для зимнего дрифта не нужен табун лошадей под капотом, поэтому здесь их всего 105. Собственно говоря двигатель не подвергся серьезным изменениям. Мотор 8 клапанный инжекторный 1,6, заменен впуск и выпуск 4-2-1, вал окб 720.

Коробка передач 4 ступенчатая, редуктор постоянно разный. Как показала практика самый лучший 4.1, установленный сейчас. Несмотря на то что в машине довольно слабенький двигатель она все равно способна ехать боком по сухому асфальту.

Перейдем к внутренностям, каркас безопасности СССР Вихур — подробнее можно прочитать здесь! Приборная панель осталась родная, гидроручник кастом и два ковша bride с ремнями Takata.

Совсем недавно, каких то пару месяцев назад, автомобиль получил свой запоминающийся образ в расцветке хаки с губой и хвостом так удачно дополняющих образ такого взбитого уличного бойца. Кстати губа и хвост все от того же Вихура из СССР.

Подведем маленькие итоги, автомобиль успешно справляется со своими обязаностями — ехать боком по снегу и приносить удовольствие владельцу. Так сказать идеальный автомобиль для зимы и мокрого асфальта.

Всем дрифт пацаны!

Ну вот и все, напоследок небольшое видео с зимнего кольца с участием наших героев.

И забавное видео с ВВЦ:

Не забывайте нажимать сердечки и делиться с друзьями!

как светят новые фары? — Столица С

Привыкайте. Та «Нива», что изначально была «Нивой», теперь зовется так: LadaNivaLegend. А та, что была ВАЗ-2123, потом ChevroletNiva, потом LadaNiva, так: LadaNivaTravel. И быть бы в этой статье только рассуждениям о том, почему в России (где русский — официальный язык) производитель именует свою продукцию латиницей… Но та самая «Нива-Тревел», помимо рихтовки имени, получила новые фары и фонари. Потому Денис Тюркин отправился на ночной тест-драйв.

Фото: Денис Тюркин / Столица С

Была у нас в редакции «Шевроле-Нива», покупалась новой. Зелененькая. Еще добертоновского периода. Как правило, использовалась для поездок по районам, когда предполагались внедорожные экзерсисы. Я любил на ней ездить в качестве пассажира.

И не только потому, что зимой это был очень теплый автомобиль. Водителя Олега я считал самым адекватным из работающих в редакции рулевых за почти безукоризненное следование ПДД. С ним было спокойно, как и с «Нивой». Не ломалась она так, чтоб мы где-то остались куковать. Но момент настал: растянувшаяся цепь ГРМ однажды перескочила и… Олег просто забыл, что ничего вечного нет и даже цепь нужно менять хотя бы тысяч через 200 километров. После восстановления мотора «Шеви-Нива» не без труда добралась, кажется, до 400 тысяч и была продана куда-то в сельскую местность.

2021 год, я вновь сижу в «Ниве», но уже без Олега, он давно в редакции не работает, так как оказалось, что в нынешнее время для поездок по Мордовии журналисты уже могут обойтись без внедорожника. А не журналисты? Россия вообще может обойтись без «Нивы» или еще нуждается в ней? Городские жители дают очевидный ответ: можем и обойтись. Бездорожья тут нет, расход у старого 80-сильного моторчика такой, что стрелка топливомера больше похожа на часовую, да и держаться в быстром городском потоке — то еще удовольствие. Помнится, в ходе предыдущего тест-драйва меня невзлюбила четвертая передача. В этой машине я матерился, втыкая вторую. Пробовал даже двойной выжим, без успеха. Помогало только банальное силовое продавливание рычага.

Фото: Денис Тюркин / Столица С

Да и салон, несмотря на новый мультимедийный экран (кстати, даже после ночной стоянки в 30-градусный мороз работающий без запинок), как бы еще помнит того самого Олега… Но кабина прогревается быстро, и в ней становится жарко даже на первой скорости вентилятора, ни одна деталь не дребезнет и не хрустнет на плохой дороге, а работа подвески автоматически переводит мимику водителя в режим «Довольная улыбка включена». В каждом материале про «Шеви-Ниву» пишу про это и вновь повторюсь здесь: данная подвеска, возможно, лучшая из тех, что мы можем видеть на продаваемых сейчас автомобилях.

Капот стал более рельефным. Его линия поднята выше, чем было ранее. Возможно, это скажется на обзорности вперед в сложных условиях бездорожья. Фото: Денис Тюркин / Столица С

Так, а что же обновления? Сзади появились новые фонари. Теперь они светодиодные. И здесь АвтоВАЗ как бы скопировал работу небольших российских компаний, которые давно предлагают тюнинговую светотехнику для отечественных автомобилей. Например, вы наверняка видели трехдверные «Нивы» со светодиодными фарами и фонарями. Красивыми, отлично работающими. У «Тревел» теперь тоже такие есть. Отличить новые машины легко по габаритным огням в виде скоб. Любопытно еще, что здесь не один задний противотуманный фонарь, как это обычно бывает, а два.

А вот с передней светотехникой ^­АвтоВАЗ провел уже серьезную работу. Потому что у «Тревел» новые передние крылья, капот, бампер и замковая панель (деталь, в которой расположен замок капота). Но фары рефлекторного типа не светодиодные, как и передние противотуманки, как и дневные ходовые огни (лампы типа W21/5W).

Ближний и дальний разнесены в блоках. В первой секции стоят лампы типа H7, во второй — h2. После тест-драйва я напросился в ремзону дилера «Саранскмоторс+», чтобы в тепле оценить, насколько удобно стало менять лампы. Спасибо мастеру-приемщику Дамиру, помог в этом деле. Оказалось, что процесс занимает буквально несколько десятков секунд и ему ничего не мешает, доступ ко всем лампам (как в левой фаре, так и правой) наиудобнейший. Сейчас езжу на служебной «Гранте» и даже позавидовал владельцам новых внедорожников. Каждая замена, например, ламп ДХО у меня заканчивается ободранными руками…

Итак, момент икс. Как светят новые фары? Шикарно! Честно говоря, даже светодиодные фары некоторых новых иномарок уступают галогенкам «Тревел», которые в режиме ближнего не только прекрасно освещают и левую, и правую обочины, но и дают далекий пучок. Вы скажете, что ближний просто «задран», но за несколько часов ночной езды мне никто из встречных водителей не моргнул и не выразил недовольства «моим» ближним. Вот только к дальнему у «Тревел» претензии есть. Пучок уж очень недальнобойный. Хотя для автомобиля, который если и разгонится более 100 км/ч, то только будучи привязанным к самолету, это не проблема. От противотуманок в принципе тоже пользы чуть. Они просто делают ярче пятно прямо под носом машины. Поэтому переплачивать за них смысла не вижу. Работу за них прекрасно выполняет и ближний.

Ну а как оценить работу, выполненную автовазовцами по обновлению? В сети сразу новый передок сравнили с «РАВ-4» от «Тойоты». На мой взгляд, в реальности «Лада» не похожа на «японку», а имеет свой собственный образ. Вы можете не верить мне до тех пор, пока не увидите внедорожник вживую. Будет ли он иметь рыночный успех? Косвенный ответ на этот вопрос может дать интерес автомобилистов, которые попадались мне по ходу тест-драйва. Многие сворачивали головы, провожая «Ладу». Любопытно, что водители «Шеви-Нив» вообще не обращали внимания на новинку, возможно, ревнуя. Зато владелец «Тигуана» даже остановил меня, чтобы расспросить о цене.

Ниже «Фольксвагена», ребята, ниже.

Карл Великий — Соседи Британии опасаются, что он может уйти прочь | Европа

28 марта 2019 года

I MAGINE BRITAIN через несколько месяцев, оставив EU без сделки. Рынки и фунт резко падают. Страна оставила внешнеполитические структуры EU без каких-либо рамок для будущих отношений. Его правительство падает. Новый премьер-министр сканирует мир в поисках друзей и берет трубку в Белый дом, в Чжуннаньхай в Пекине или даже в Кремль Владимира Путина.

Послушайте эту историю

Ваш браузер не поддерживает элемент

Больше аудио и подкастов на iOS или Android.

Такой исход маловероятен: для начала, Тереза ​​Мэй уже сейчас могла просто протиснуть свою сделку. Тем не менее, европейские лидеры и официальные лица напуганы, поскольку они думают о Брексите без сделки или даже о жестком, как намеревается г-жа Мэй. Это формирует их осанку и кое-что раскрывает их душевное состояние. Они считают, что жестокий развод может заставить Британию отчаянно нуждаться в торговых сделках с такими гигантскими партнерами, как Америка, Китай и другие.И они опасаются, — говорит Марк Леонард из Европейского совета по международным отношениям, — что со временем эти акторы смогут использовать его слабые стороны, создав условия, которые отделят Великобританию от внешнеполитического караван-сарая Европы и оставят ее в положении, аналогичном положению Турции: полуевропейский игрок с непредсказуемыми заграждениями из-за рубежа.

Белый дом Дональда Трампа может потребовать пересмотра британской политики на Ближнем Востоке, предполагает один из чиновников EU ; возможно, его выход из иранской ядерной сделки.Рем Кортевег из института Clingendael сообщает, что голландцы обеспокоены тем, что американское давление на торговых переговорах может также оттолкнуть Великобританию от европейских санкций и политики экспорта оружия. Планы Китая в отношении Британии вызывают еще большие опасения. Китай имеет опыт использования своего веса в двусторонних переговорах с европейскими странами (особенно со странами, находящимися в экономических или дипломатических конфликтах, такими как Италия и Венгрия) во внешнеполитических целях. «Китайцы будут готовы. У них есть четкое представление о соотношении сил », — отмечает высокопоставленный дипломат EU .Он предполагает, что ценой торговой сделки может стать согласие Великобритании с амбициями Пекина в Южно-Китайском море. Другие предполагают, что Лондон мог бы присоединиться к программе развития инфраструктуры «пояс и дороги» или открыть свою критически важную инфраструктуру за счет китайских денег.

Никто не ожидает мгновенного преобразования. Беспокойство больше в том, что потребность Великобритании в новых торговых партнерах и внутренних инвестициях, а также ее отсутствие на общих форумах EU со временем уведут ее из европейского лоно. Среди наиболее зловещих предсказаний — предсказания Марка Роша, корреспондента газеты « Le Monde » в Лондоне, который воображает, что Великобритания окажется «налоговой гаванью у ворот Европы» и «троянским конем Китая в Европе».

Британия мало что сделала для того, чтобы развеять подобные опасения. Его бессмысленные переговоры о Брексите вызывают у EU panjandrum кошмары о британских министрах без опыта, но с обильными неоимперскими фантазиями, которые выходят в комнаты переговоров с китайцами и теряют свои рубашки.Болтовня о «глобальной Британии» и ранее намеки Терезы Мэй на то, что она могла бы использовать обязательства страны по защите Европы в качестве разменной монеты, хотя и давно от них отказались, усилили сомнения. Некоторые наблюдатели видят признаки того, что Лондон смягчает определенные внешнеполитические позиции в преддверии переговоров после Брексита: например, поддерживая выход Дональда Трампа из договора о ракетах средней и меньшей дальности.

Континенталы не должны так волноваться. Британия всегда была меркантильной, полуобособленной европейской внешнеполитической державой.Brexit может усилить относительную открытость страны для иностранной наличности, но не является его причиной. Пекин впервые объявил о наступлении нового англо-китайского «золотого века» в 2015 году и, похоже, с тех пор потерял интерес к этой стране как к лазейке в Европу. И даже если такой шарлатан, как Борис Джонсон, или антизападный левый, как Джереми Корбин, окажется на Даунинг-стрит, премьер-министр Великобритании будет ограничен парламентом, общественным мнением и институциональным истеблишментом в целом. Все они по-прежнему привержены трансатлантическому порядку до Трампа и тесному внешнеполитическому сотрудничеству с континентальной Европой, как показали недавние дебаты в Палате общин о смягчении Брексита или обуздании его пагубных последствий.Сила британских институтов, размер ее экономики и ее решающая роль в НАТО — все это делает сравнение с Италией и Венгрией бесполезным. Британия может быть оппортунистической и даже циничной после жесткого Брексита. Но он останется неотъемлемой частью западного альянса. И немного богато беспокоиться о британцах, когда Германия остается привязанной к российским энергетическим интересам, а Италия, а не Великобритания, только что подписала план Китая по пояс и дорогу.

Есть повод для беспокойства

Тем не менее, европейские опасения по поводу обратного, как бы они ни были преувеличены, значительны на двух уровнях.Во-первых, они помогают сформировать отношение остальных 27 членов EU к Брекситу без сделки. Все устали от разговоров. Никто не убежден, что для поддержания хороших торговых отношений с Великобританией стоит вести переговоры бесконечно или позволять ей выбирать преимущества членства. Но больше, чем думают в Лондоне, тревога по поводу отказа от сделки или иного чреватого Brexit, расколовшего Запад и изолирующего Великобританию, продолжает сдерживать даже самых уставших от переговоров европейских лидеров. Это послужило мотивом для успешной настойчивой Ангелы Меркель на саммите ЕС 21 марта о том, чтобы Британии было предоставлено больше времени для принятия согласованного соглашения о Брексите или подачи запроса на продление. Это самая слабая карта Великобритании.

Во-вторых, тревоги Европы симптоматичны для времени. После многих лет самоуспокоенности он постепенно более серьезно относится к своей геополитической ситуации. О стремлении к «стратегической автономии» от Америки говорят, хотя и мало что делают. EU наращивает усилия по пресечению поддерживаемого Россией политического вмешательства и ввел механизм проверки китайских инвестиций.На саммите 26 марта Макрон и Меркель упрекнули Си Цзиньпина в попытке использовать раскол в Европе. «Они видят кольцо стран на периферии EU , которые уязвимы для внешних сил», — объясняет Ян Вайденфельд из MERICS , аналитического центра в Берлине. Страх, что Великобритания может присоединиться к этому кольцу, говорит о EU не меньше, чем о самой Великобритании.

Эта статья появилась в европейском разделе печатного издания под заголовком «Призрак первой взлетно-посадочной полосы»

Установка GoPro внутри кастомного радиоуправляемого дрифт-кара дает вам POV фигурки

Дрифтинг — один из самых популярных и модных массовых автоспортов на сегодняшний день.Но хотя кататься по трассе, безусловно, весело, шины и ошибки делают это хобби не таким уж и дешевым. Чтобы компенсировать затраты на скольжение настоящей машины, почему бы вместо этого не сесть на место водителя радиоуправляемой дрифт-машины?

Хотя это не совсем то же самое, что пилотировать грохочущую машину для измельчения шин в натуральную величину, дрифт-кары с дистанционным управлением также становятся все более популярными за последние несколько лет. Магазины для хобби начали продавать популярные детали, используемые в масштабных дрейфующих сборках, что привело к довольно большому послепродажному обслуживанию, которое позволяет людям строить любые автомобили мечты, которые их сердце желает. .. чуть меньше.

Для тех из нас, кто все еще жаждет немного реализма, не волнуйтесь! Один человек нашел способ максимально эффективно использовать свою RC-конструкцию, поместив камеру GoPro в масштабный Nissan Laurel. А если и этого было недостаточно, он добавил несколько сервомоторов и поддельные руки, чтобы он стал еще больше похож на настоящий. Результат? Невероятно забавная точка зрения, которая делает просмотр повторов почти таким же хорошим, как и настоящий.

Автомобиль, о котором идет речь, был построен Майклом Дэйтоном, который вместе со своим отцом в Вирджинии управляет несколькими франчайзинговыми розничными магазинами HobbyTown, в одном из которых есть крытый дрифт-трек с дистанционным управлением.

Dayton сообщает нам, что автомобиль начал свою жизнь как Yokomo YD-2, одна из самых популярных основ, используемых сегодня на рынке в дрифт-конструкциях RC. Он знал, что для реализации этой точки зрения ему нужно будет встроить в автомобиль много дополнительной электроники, поэтому он работал над созданием более широкого нестандартного шасси из углеродного волокна, в котором размещались бы все дополнительные детали. Затем он выбрал кузов с большим пространством для головы, чтобы убедиться, что его камера поместится: Nissan Laurel C33 от Yokomo.

Установить камеру было проще простого.Дейтон прикрепил GoPro Hero Session к сервоприводу, который мог панорамировать, когда он управлял, имитируя те же движения, которые голова водителя будет следовать на дороге. Но панорамирования было недостаточно — нужно было больше реализма. Он построил несколько рук с помощью RC-талрепов и добавил шаровые опоры вместо плеч и локтей, чтобы обеспечить полную мобильность в машине.

Поскольку теперь у него есть руки, которые будут двигаться, когда он захочет, почему бы не использовать их? Компания Dayton разработала нестандартное вращающееся рулевое колесо, в котором используется зубчатая передача для увеличения диапазона поворота колеса после 120-градусного поворота, обеспечиваемого штатным сервоприводом рулевого управления.Кроме того, вы заметите, что присутствует еще одна важная часть конструкции для дрифта: гидравлический электронный тормоз. Другой сервопривод присутствует, чтобы создать впечатление оттягивания гидросистемы всякий раз, когда Дэйтон нажимает на тормоза по автомобильному радио, создавая впечатление, будто водитель нажимает на тормоз, чтобы начать скольжение.

Коррекция дрейфа фокуса в микроскопии живых клеток

До конца 1980-х годов большинство исследователей биологических наук изучали сложные детали биологической структуры, делая отдельные снимки различных цитологических характеристик с использованием фиксированных и окрашенных (фактически неживых) образцов.Однако за последние пару десятилетий исследования в области биологических и медицинских наук в значительной степени сместили акцент на изучение динамических процессов, которые происходят на молекулярном, клеточном уровне и уровне всего организма в живых системах в широком диапазоне временных масштабов от миллисекунд до часов. . Движущей силой этого перехода к визуализации живых клеток стали передовые разработки в области оборудования для микроскопии и более чувствительных цифровых камер, а также новые синтетические и генетически закодированные флуорофоры, которые способны воздействовать на определенные органеллы с высокой точностью. Таким образом, эра однократных микрофотографий и цифровых изображений фиксированных мертвых клеток в значительной степени уступила место визуализации живых клеток с использованием широкого спектра синтетических зондов, квантовых точек и флуоресцентных белков, при которых клетки оставались в фокусе на предметном столике микроскопа в течение длительного времени. длительные периоды времени — критически важный фактор.

Рисунок 1 — Методы увеличения контраста при покадровой съемке живых клеток

Растущее применение методов покадровой визуализации живых клеток в проходящей световой и флуоресцентной микроскопии, возможно, лучше всего подтверждается огромным количеством исследовательских отчетов, появляющихся почти ежедневно в научной литературе.В большинстве случаев клеточная активность отслеживается в камерах для визуализации культур тканей, специально разработанных для столика микроскопа, с использованием технологии флуоресцентного зонда в сочетании с последовательным захватом изображений. Усовершенствованные методы усиления контраста, такие как дифференциальный интерференционный контраст ( DIC ), фазовый контраст, темное поле, флуоресценция и модулированный контраст Хоффмана ( HMC ), могут использоваться для записи динамики в широком спектре образцов в виде непрерывных последовательностей длительные периоды времени.Аналогичным образом, для мониторинга внутриклеточных процессов во времени все чаще используются более совершенные методы флуоресценции, включая конфокальную микроскопию лазерного сканирования, вращающийся диск, многофотонную микроскопию и микроскопию полного внутреннего отражения ( TIRF ).

Помимо важности для клеточной биологии, покадровая визуализация может также использоваться для изучения широкого спектра жидких образцов и твердых материалов в химических, промышленных и геологических системах, а также жидкокристаллических фазовых переходов и структурного анализа новых и передовые материалы в металлографии. В фундаментальных науках о жизни покадровая визуализация (также называемая киномикрография ) оказалась эффективным инструментом для исследования движения частиц, межмолекулярных взаимодействий, миграции клеток, деления клеток, динамики органелл, апоптоза, дифференциации и роста нервных процессов. среди множества новых и многообещающих приложений. Совсем недавно революция в разработке флуоресцентных белков, охватывающих весь видимый спектр, привела к открытию бесчисленных динамических внутриклеточных событий, которые можно исследовать только путем наблюдения во времени.

На рисунке 1 представлены примеры нескольких наиболее полезных и популярных методов повышения контрастности, используемых для покадровой визуализации в микроскопии живых клеток. Прикрепившиеся клетки фибробластов кожи индийского оленя мунтжак, показанные на рисунке 1 (а), были визуализированы в режиме DIC для визуализации разрастания стрессовых волокон цитоскелета. Фазово-контрастное изображение эпителиальных клеток почек кенгуру крысы (линия PtK1 ) на рисунке 1 (b) выявляет двухъядерные клетки, возникающие в результате прерванного деления клеток, в то время как успешное деление отдельной клетки остеосаркомы человека (линия U2OS ) происходит захвачено с помощью HMC на рисунке 1 (c). Эти мощные методы проходящего света широко используются для покадровой визуализации живых клеток. Аналогичным образом флуоресцентные методы лазерного сканирования и конфокальной микроскопии с вращающимся диском (рис. 1 (d), флуоресцентный белок dEos в клетках яичников китайского хомячка; и рис. 1 (e), эндоплазматический ретикулум, меченный EGFP, в клетках HeLa) можно использовать для ряда случаев. наблюдений, включая фотоактивацию, резонансный перенос энергии ( FRET ), методы фотообесцвечивания, подвижность и динамику распределения флуоресцентных белков.Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения ( TIRFM ; рис. 2 (f), иллюстрирующая флуоресцентный белок mCherry, слитый с винкулином в клетках фибробластов легких лисы) используется для наблюдения событий, которые происходят в клеточной мембране около покровного стекла.

Историческая перспектива покадровой съемки

О первом применении покадровой визуализации живых клеток сообщил более 100 лет назад (примерно за пять лет до того, как Чарли Чаплин снял свой первый фильм) молодой французский аспирант, изучавший подвижность спирохет, продуцирующих сифилис. Студент, Жан Командон, запечатлел последовательности изображений с помощью огромной кинопленочной камеры, соединенной с гораздо меньшим темнопольным микроскопом, сложной конфигурации для того времени, но считающейся очень грубой по современным стандартам. Во второй половине двадцатого века последовательности покадровых изображений обычно записывались с помощью компактных 16-миллиметровых камер на микроскопах, оснащенных фазово-контрастной подсветкой. Временные интервалы между последовательными захватами изображений контролировались громоздкими вспомогательными интервалометрами, устройствами, которые включают и выключают лампу между изображениями, чтобы избежать чрезмерного освещения и нагрева образцов.Затворы с электронными источниками света для микроскопов не были коммерчески доступны до 1980-х годов.

Ранние методы покадровой съемки, основанные на пленочных камерах, были подвержены ряду подводных камней. Прежде всего, фильм должен был быть отправлен (в большинстве случаев) для коммерческой обработки, а это означало, что оценка экспериментальных результатов могла быть отложена на дни или даже недели. Кроме того, использование пленки было дорогостоящим и допускало множество вариаций обработки, которые обычно приводили к противоречивым результатам.Например, ошибки экспозиции могут быть обнаружены только через несколько недель после завершения эксперимента, а общая проблема смещения фокуса часто не обнаруживается, пока обработанная пленка не просматривается. Хотя многие артефакты, связанные с покадровой съемкой, такие как дрейф фокуса, неравномерный нагрев образца и вибрация, по-прежнему мешают конечным результатам при использовании современных цифровых камер, за последнее десятилетие методика значительно усовершенствовалась.

Первый крупный прорыв в покадровой микрографии произошел, когда видеокамеры и компьютерные карты для захвата кадров были наконец интегрированы в микроскоп, начиная с 1970-х годов.Хотя изображения, создаваемые видеокамерой, имеют меньшее разрешение, чем традиционная пленка на основе эмульсии, неопределенность в отношении настроек экспозиции, связанная с пленочными камерами, значительно снижается. В качестве дополнительного преимущества последовательность изображений можно просматривать во время захвата, а результаты расширенного покадрового эксперимента немедленно доступны для просмотра и редактирования с помощью видеопленки. Для сравнения, стоимость видеокамеры, соединенной с магнитофоном, была значительно меньше, чем стоимость кинокамеры, если учесть затраты на обработку пленки.Затраты на копирование видеокассет по сравнению с пленками также намного меньше, а ленты, содержащие плохие эпизоды, можно стирать или перезаписывать и возвращать в производство.

Рисунок 2 — Покадровая визуализация митохондриальной динамики

Пример динамики живых клеток представлен на рисунке 2 с использованием фотопреобразователя флуоресцентного белка с оптическим маркером для маркировки митохондрий. Образец представляет собой прикрепленную культуру эпителиальных клеток почки кролика (линия RK-13), экспрессирующую слияние красновато-зеленого фотопреобразованного флуоресцентного белка dEos с последовательностью митохондриального целевого пептида. При освещении 488-нанометровым лазером по всей цитоплазме наблюдаются обильные зеленые флуоресцентные митохондрии (рис. 2 (а)). Одиночная митохондрия, расположенная в длинном филоподии, подвергается фотопреобразованию с использованием короткого импульса 405-нанометрового лазера в первом кадре. Новая красная флуоресцентная органелла захватывается через 20-минутный интервал по мере приближения непревращенной митохондрии (рис. 2 (b)). После фрагментирования непревращенная митохондрия приближается к фотоконвертированному соседу (рис. 2 (c)), и две митохондрии впоследствии сливаются (рис. 2 (d)), при этом метка фотоконвертированного флуоресцентного белка распределяется между органеллами.После второго события фрагментации (рис. 2 (е)) небольшая часть фотоконвертированной митохондрии приближается ко второй непревращенной митохондрии, но вместо слияния образует тороид (рис. 2 (е)). Кадры, показанные на рисунке 2, были выбраны из покадровой последовательности, содержащей более 1000 изображений, собранных в течение двухчасового периода.

Несмотря на то, что все большее число исследователей вовлекается в получение покадровой последовательности живых клеток с использованием флуоресцентных белков, цифровые неподвижные изображения продолжают широко использоваться для документирования динамических событий в клеточных культурах в течение продолжительных периодов времени.Во многих случаях прерывистые одиночные изображения могут быть сняты с более высоким разрешением с улучшенным отношением сигнал / шум, используя уровни освещенности выше, чем это возможно при последовательной покадровой съемке. Тем не менее, быстрое развитие технологий в компьютерной архитектуре и емкости хранения данных подняло покадровую микрографию на новый уровень сложности. Прежние ограничения в отношении первичной памяти, быстрых кешей, скорости процессора и емкости жесткого диска были преодолены, так что сложные последовательности изображений, содержащие тысячи кадров и составляющие несколько гигабайт, могут храниться локально на главном компьютере. Аппаратный прогресс сопровождался появлением новых сложных программных пакетов, способных управлять практически всеми аспектами высокоскоростного получения изображения, включая движение сцены, интенсивность освещения, время экспозиции (и другие параметры камеры), вспомогательную оптику (например, размещение призм ДИК в объективе). световой путь) и длину волны. Самое современное программное обеспечение также может выполнять обработку изображений после получения для улучшения характеристик видео. В более простых системах компьютеры средней производительности могут использоваться для управления цифровой камерой научного уровня через ряд интерфейсов.

Современные достижения в области специализированных методов флуоресцентной микроскопии, включая конфокальное лазерное сканирование, вращающийся диск, TIRF и многофотонное сканирование, в сочетании с новейшими детекторными технологиями, позволили ученым наблюдать широкий спектр динамических событий с использованием недавно разработанных флуоресцентных зондов, нацеленных на определенные клеточные компартменты. , биомолекулы и рецепторные белки. Используя эту передовую методологию, можно одновременно регистрировать несколько событий в четырех или более измерениях (латеральном, осевом, временном и спектральном), чтобы обеспечить неинвазивное окно для внутриклеточной активности в течение выбранного периода времени.Кроме того, методы визуализации живых клеток помогли возглавить нынешнюю революцию в клеточной биологии, которая предоставляет ученым пространственную и временную информацию, которая ранее была недоступна.

Истоки смещения фокуса

Несмотря на широкий спектр технологических достижений, которые произошли в оптической микроскопии за последние несколько лет, осевые флуктуации, проявляющиеся в медленных изменениях фокуса образца в процессе покадровой визуализации, остаются серьезной проблемой.Термин дрейф фокуса часто используется для описания неспособности микроскопа поддерживать выбранную фокальную плоскость в течение длительного периода времени. Этот артефакт возникает независимо от естественного движения у живых особей и в первую очередь зависит от ряда факторов, перечисленных ниже. В общем, дрейф фокуса является более серьезной проблемой при использовании масляных иммерсионных объективов с большим увеличением и числовой апертурой (имеющих очень малую глубину фокуса), чем для объективов с меньшим увеличением (10x и 20x) с большей глубиной фокусировки.

• Температурный дрейф — Изменения температуры, возможно, являются наиболее частым источником дрейфа фокуса. Колебания температуры, вызванные кондиционерами и центральным отоплением в лаборатории, источниками интенсивного освещения на микроскопе, а также неравномерно нагретыми объективами и предметными столиками, как правило, являются основными виновниками дрейфа фокуса. Кроме того, разная скорость расширения и сжатия материалов, используемых для создания культуральной камеры и / или оптической системы микроскопа, может привести к изменению расстояния между передней линзой объектива и покровным стеклом, что приведет к потере фокуса.Для объективов с самым большим увеличением часто бывает достаточно изменения всего на один градус Цельсия, чтобы произвести сдвиг от 0,5 до 1,0 микрометра в фокальной плоскости.
• Coverslip Flex — Температурные градиенты и другие вариации температуры культуральной камеры, а также артефакты, связанные с проталкиванием жидкости через камеру визуализации во время перфузии, могут вызывать эффект диафрагмы , когда образец отскакивает из фокуса при сгибании покровного стекла . Этот артефакт часто проявляется в камерах, где система перфузии плохо контролируется.Изгиб покровного стекла может не представлять серьезных проблем в тех случаях, когда последовательность захвата изображения может чередоваться между сеансами перфузии, но это может серьезно повлиять на те исследования, которые требуют относительно высокого временного разрешения (2 секунды или меньше). Изгиб покровного стекла можно минимизировать за счет уменьшения диаметра входного отверстия перфузии в проточных камерах и оснащения микроскопа нагревателем объектива для компенсации колебаний температуры камеры. Небольшое, но воспроизводимое движение покровного стекла также может происходить в камерах для культивирования, которые имеют проводящее прозрачное покрытие для поддержания температуры. В этом случае приложение текущих нагрузок к покровному стеклу с покрытием может вызвать его сжатия или расширения, которые временно нарушат фокусировку. Правильная фокальная плоскость обычно восстанавливается после снятия текущей нагрузки.
• Неоднородности нагрева камеры для визуализации — Камеры для визуализации живых клеток производятся в самых разных конфигурациях, в которых часто используются совершенно разные технологии для поддержания постоянной температуры образца. Например, камеры с покровными стеклами, которые нагреваются с помощью проводящего покрытия (рис. 3 (а)), часто обеспечивают превосходную термическую консистенцию по всей поверхности стекла, чем камеры, которые нагревают только металл, окружающий периферию покровного стекла.В последнем случае температурные градиенты могут быть значительными (рис. 3 (б)). Кроме того, масляные или водяные иммерсионные объективы с высокой числовой апертурой могут действовать как сток, отводящий тепло от камеры для образца к металлическому объективу, создавая, таким образом, температурный градиент в области иммерсионной среды. Другие артефакты, такие как колебания тока от источника питания и значительные колебания комнатной температуры, также могут быть причиной нарушений в нагреве камеры для образцов.

Рисунок 3 — Тепловизионные изображения камеры образцов

• Вибрация — Обычный артефакт с множеством источников, вибрации часто производятся различными элементами, связанными с конфигурацией инструмента, в дополнение к источникам, возникающим в окружающей среде.В микроскопе и принадлежностях, колеса фильтров, заслонки, автоматические столики, турели фильтров и другие электромеханические движения компонентов являются обычным источником вибрации, которая мешает стабильной фокусировке. Обычными внешними (немикроскопическими) источниками вибрации являются системы кондиционирования воздуха, пешеходы, компрессоры холодильников, лифты и движение тяжелого оборудования рядом с установкой формирования изображения. Изолирующие столы, демпфирующие прокладки и настольные платформы, доступные у самых разных дистрибьюторов, полезны для минимизации вибрации.
• Механическая нестабильность — Ружье, полностью загруженное объективами, может весить от 3 до 5 фунтов, что часто представляет собой значительную гравитационную нагрузку на механические компоненты, участвующие в механизме фокусировки микроскопа. В результате дрейф фокуса может происходить просто из-за силы тяжести на револьвере. Этот артефакт можно в некоторой степени уменьшить, если использовать только одну цель для записи покадрового видео. Кроме того, разумно обеспечить (если возможно), что микроскоп оснащен прецизионной системой фокусировки, имеющей небольшую механическую длину, и поддерживать правильную настройку регулятора натяжения фокуса.Другие источники механической нестабильности включают незакрепленные зубчатые передачи в стойке фокусировки или стойке конденсатора, а также вспомогательные компоненты.
• Колебания иммерсионной среды — При исследованиях живых клеток с высоким разрешением для объективов микроскопов, используемых для покадровых экспериментов, может потребоваться иммерсионная среда, состоящая из масла, воды или глицерина. В течение продолжительных периодов времени, необходимых для сбора достаточных данных, колебания вязкости и химическое разрушение среды визуализации могут повлиять на свойства и распространение иммерсионной среды.Вязкость и показатель преломления иммерсионных масел часто зависят от температуры, а вода склонна к испарению — факторы, которые необходимо учитывать и контролировать, чтобы избежать смещения фокуса. Недавно разработанные высокоэффективные органические масла доступны с широким диапазоном показателей преломления (включая значения, идентичные воде и глицерину) и представляют собой отличное решение для использования традиционных иммерсионных сред. В некоторых случаях (в зависимости от конфигурации камеры формирования изображения) прокладка или трубка могут использоваться для образования уплотнения между объективом и покровным стеклом, чтобы снизить уровень испарения воды.
• Добавление реагентов — Многие исследования требуют замены питательной среды или добавления химических реагентов во время покадровой визуализации. Физический акт введения реагентов в культуральную камеру может вызвать механический удар, который приведет к дрейфу фокуса, и добавление реагентов, температура которых отличается от температуры среды визуализации, может иметь аналогичный эффект. В системах перфузии с подогревом введение новых сред или химикатов обычно вызывает незначительные изменения в плоскости аксиального фокуса, но добавление жидкости в открытую камеру с помощью пипетки или шприца может нарушить фокусировку.
• Боковое смещение предметного столика — В некоторых случаях колебания или колебания температуры в помещении вызывают небольшое поперечное ( x — y ) перемещение механического предметного столика, что (в некоторых случаях) приводит к смещению осевого фокуса. Как правило, это незначительная проблема, но может стать серьезной, если из открытого воздуховода поступает холодный или теплый воздух прямо на микроскоп. Если стол оборудован зажимом, его следует включить до начала покадровой съемки, но в остальном есть несколько средств. Усовершенствованные столики микроскопа с шаговыми двигателями обычно не подвержены артефактам бокового движения.
• Небезопасная камера для образца — Перемещение камеры для визуализации образца во время покадровой последовательности может привести к смещению фокуса из-за нового положения покровного стекла. В адаптерах предметного столика, которые фиксируют чашку Петри со стеклянным дном в апертуре предметного столика, изменения положения чашки могут происходить в результате изгиба зажима или механических артефактов, таких как нарушение электрических проводов и трубок для газа / жидкости, соединяющих камеру с контроллерами и другими. вспомогательные компоненты.Кроме того, многолуночные камеры визуализации часто страдают от незначительных отклонений в размещении, когда к каждой лунке прикрепляются отдельные покровные стекла, что приводит к ошибке фокусировки при сканировании планшета. Перемещение камеры и несоответствие высоты покровного стекла — распространенный артефакт, который необходимо устранять на регулярной основе.
• Движение образца — Неизбежным артефактом при визуализации живых клеток является перемещение образца от фокальной плоскости микроскопа. Это часто происходит при сборе покадровых последовательностей с использованием прикрепленных клеток, которые претерпевают митоз, когда клетки резко меняют форму в метафазе.В других случаях образец может полностью уйти из поля зрения либо путем отделения от покровного стекла, либо за счет подвижности. Кроме использования гелей и реагентов, таких как фибронектин, для прикрепления клеток и тканей к покровному стеклу, не существует никаких механических, химических или электрических средств защиты от перемещения образца.

Решения для устранения смещения фокуса

В течение многих лет лучшим решением для исправления дрейфа фокуса было размещение студента или техника рядом с микроскопом, чтобы при необходимости выполнить ручную перефокусировку.К сожалению, это относительно недорогое и в значительной степени неэффективное решение, которое определенно не подходит для длительных экспериментов по визуализации. Проблема дрейфа фокуса решается различными способами, включая программные алгоритмы, специальное оборудование микроскопа, антивибрационные прокладки и столы, а также помещение микроскопа в защитную среду (как показано на рисунке 4). Эти методы обеспечивали разный уровень успеха, но ни один из них не предоставил универсального решения для устранения дрейфа фокуса, которое можно было бы распространить практически на любой сценарий визуализации живых клеток.

Рисунок 4 — Изолирующие кожухи для микроскопов

Температурную нестабильность, которая, возможно, является наиболее значительным источником дрейфа фокуса, можно в значительной степени устранить с помощью больших корпусов из оргстекла (называемых камерами окружающей среды ; рис. 4 (c)), которые изолируют микроскоп от внешней среды, а также обеспечивают отличные условия для способствовать росту клеток в лог-фазе. Корпус в виде инкубатора окружает столик микроскопа, объективы, флуоресцентные фильтры и конденсатор проходящего света, фактически охватывая весь микроскоп, а также образец. Эти камеры могут использоваться с различными сосудами для культивирования, включая стандартные культуральные бутыли, чашки Петри, предметные стекла с установленными покровными стеклами и различные открытые и закрытые камеры для визуализации. Температура поддерживается с помощью внешнего нагревательного устройства (обычно нагнетаемого воздуха), а концентрация углекислого газа регулируется с помощью датчика, соединенного с регулятором, который питается от баллона с чистым газом.

Экологические камеры также могут быть оборудованы контролем влажности, а некоторые конструкции обеспечивают доступ через резиновые перчатки, чтобы не нарушать равновесие окружающей среды при манипуляциях с клетками во время визуализации.Чтобы поддерживать высокую степень контроля температуры и избежать дрейфа фокуса, некоторые из более сложных камер инкубатора охватывают практически весь микроскоп, за исключением окуляров, камеры и фонарей. С другой стороны, климатические камеры могут препятствовать быстрому доступу к образцу и являются громоздкими, когда необходимы повторные манипуляции. Кроме того, высокий уровень влажности внутри камеры может увеличить расходы на обслуживание прибора из-за преждевременного разрушения смазочных материалов для зубчатых передач и окисления металлических поверхностей и покрытий линз.В качестве альтернативы можно использовать нагреватели для объективов, соединенные с инкубаторами на столике, но эти устройства не всегда совместимы с иммерсионными объективами, имеющими защитные цилиндры, которые трудно удалить.

За последние пару десятилетий был разработан ряд программных алгоритмов для устранения дрейфа фокуса на основе обнаружения контраста или краев. Многие из них в конечном итоге были включены в пакеты программного обеспечения для научной обработки изображений, предназначенные также для обработки изображений и управления микроскопами.Программное управление смещением фокуса требует, чтобы микроскоп был оснащен цифровой камерой и моторизованной револьверной головкой под управлением компьютера. Обычно программному микроскопу для определения фокуса требуются два дополнительных алгоритма для управления фокусом. Первый устанавливает соответствие между осевым ( z ) положением объектива и истинным фокусом. Второй — это алгоритм поиска (рисунок 5), который производит выборку фокальной плоскости путем захвата изображения для определения местоположения максимальной «оценки» фокуса (оптимального положения).Однако большинство алгоритмов, разработанных для программного управления фокусом, были созданы с использованием статических образцов со стабильной геометрией и гораздо менее эффективны при применении к динамическим живым клеткам в покадровых исследованиях. Кроме того, алгоритмы обычно оптимизированы для конкретного сценария освещения (светлое поле, фазовый контраст и т. Д.) И могут давать сбой при применении к методам повышения контрастности (например, флуоресценции), для которых они не были разработаны.

Рисунок 5 — Программные оценки фокуса в алгоритмах коррекции смещения фокуса Программные алгоритмы фокусировки

обычно основываются на том факте, что хорошо сфокусированное изображение содержит больше контраста или более мелких деталей (фактически, гораздо более высокие частоты), чем изображения, которые не в фокусе. Например, при использовании оператора Лапласа для оценки фокуса алгоритм вычисляет вторую пространственную производную образца изображения, перемещает объектив вверх или вниз на заранее определенную величину, а затем повторяет процесс, пока не будет определено наилучшее соответствие. Во время анализа обычно в обоих направлениях делаются все более мелкие шаги. Высокие выходные значения фильтра указывают на области сильного изменения интенсивности, которые обычно обозначают края изображения. На любом изображении наиболее высокочастотные составляющие возникают по краям и должны быть наиболее заметной особенностью, когда образец оптимально сфокусирован.По мере смещения фокуса края размываются, создавая более низкие вторые производные по изображению. Отбор проб повторяется до тех пор, пока не будет определено наилучшее соответствие. Часто это может занять несколько минут, из-за чего программные процедуры фокусировки сводятся только к тем покадровым экспериментам, которые требуют использования длительных интервалов между съемками изображений.

В конфокальной покадровой микроскопии, где каждое изображение остается в резком фокусе независимо от того, испытывает ли инструмент осевой дрейф, коррекция фокуса может быть выполнена путем периодического сбора серии z -стеков (оптических срезов) от образца независимо от толщины.Затем отдельные стопки анализируются с помощью программного обеспечения для определения коэффициента корреляции Пирсона между каждым изображением в стопке z и эталонным изображением, записанным в начале последовательности. После анализа стека, изображение, имеющее максимальный коэффициент корреляции интенсивностей пикселей используются для определения правильной фокальной плоскости (соответствующей плоскости опорного изображения). Затем информацию о совместной локализации можно использовать для сброса фокальной плоскости объектива.Хотя этот метод должен работать достаточно хорошо при условии, что программное и аппаратное обеспечение должным образом сопряжено, в настоящее время нет коммерческих приложений.

Теоретически использование программных алгоритмов на флуоресцентных образцах должно давать отличные результаты из-за чрезвычайно высокого контраста между ярко флуоресцирующими структурами и темным фоном. На практике, однако, программные методы компенсации требуют вычислений, основанных на захвате нескольких изображений флуоресцентных частиц, что может привести к фотообесцвечиванию и эффектам фототоксичности, которые усугубляются при каждом воздействии света на образец.Кроме того, алгоритмы практически бесполезны для определения фокуса с помощью инструментов, которые создают четкие оптические секции в фокусе независимо от осевого фокального положения (например, конфокальный, многофотонный и ДИК). Другая ловушка при использовании программного обеспечения для поддержания фокуса заключается в том, что алгоритмы часто могут определять оптимальную фокальную плоскость, которая отличается от исходной плоскости, выбранной в начале покадровой последовательности. При использовании флуоресценции в сочетании с программными алгоритмами определения фокуса альтернативой является выполнение шагов анализа фокуса с использованием изображения образца в проходящем свете. Однако это требует применения механических заслонок как для пути флуоресценции, так и для проходящего света, что может вызвать дополнительную вибрацию.

Рисунок 6 — Дрейф фокуса и коррекция при покадровой съемке

На Рисунке 6 показаны две покадровые последовательности, выполненные либо без какой-либо коррекции смещения фокуса (Рисунки 6 (a), 6 (b) и 6 (c)), либо с аппаратной системой поддержания фокуса, как описано ниже ( Рисунок 6 (d), 6 (e) и 6 (f)).Образец представляет собой культуру фибробластных клеток легких лисицы (линия FoLu ), экспрессирующих слияние флуоресцентного белка mPlum и митохондриальной нацеливающей последовательности с образованием ярко флуоресцирующих органелл. Изображения были получены с помощью конфокального микроскопа, работающего в комбинированном режиме флуоресценции и ДИК с 30-секундными интервалами в течение 7 часов. Без системы автофокусировки микроскоп быстро теряет фокус, о чем свидетельствует последовательная потеря интенсивности флуоресценции на рисунках 6 (b) и 6 (c), которая произошла менее чем за 45 минут. Напротив, аппаратная автофокусировка позволяет создавать четкие, хорошо сфокусированные изображения (рис. 6 (d) — рис. 6 (f)) на протяжении всего исследования.

Системы компенсации смещения фокуса

За прошедшие годы был разработан ряд аппаратных решений, предназначенных для компенсации дрейфа фокуса. В большинстве случаев эти устройства пытаются измерить расстояние между объективом и держателем образца или предметным столиком, чтобы удерживать образец в фокусе в течение длительных периодов времени. Например, датчик вихревых токов, прикрепленный к револьверной головке микроскопа, был разработан одним изобретателем для контроля расстояния до предметного столика и корректировки колебаний с помощью двигателя постоянного тока, соединенного с механизмом фокусировки.Другой метод использует зависящую от расстояния емкость между держателем образца и хомутом, прикрепленным к объективу, чтобы обеспечить сигнал ошибки для пьезоэлектрических элементов, поддерживающих держатель образца. Третий, более сложный метод основан на размещении голографической решетки в объективном зрачке, чтобы образец оставался в фокусе. Специализированная решетка создает два расфокусированных изображения первого порядка, которые обнаруживаются отдельными датчиками для генерации сигналов коррекции фокуса.Наконец, предшественник современных аппаратных решений включал в себя зависящие от фокуса изменения в обратном отражении внеосевого гелий-неонового лазерного луча, который направлялся на небольшую призму, помещенную в оптическую цепочку, и контролировался с помощью двух фотодиодной матрицы. Самопроизвольные смещения фокуса обнаруживаются как ненулевой разностный сигнал, который затем используется для приведения в действие простого двигателя, подключенного к механизму точной фокусировки. Хотя эти аппаратные решения с компенсацией фокуса в той или иной степени были успешными, ни одно из них не использовалось в коммерческих микроскопических системах.

В качестве общего подхода к повышению стабильности фокуса микроскопа производители приложили значительные усилия для разработки технических усовершенствований, которые снизили дрейф фокуса до минимума. Например, были улучшены некоторые встроенные механические системы (узлы фокусировки, заслонки, моторизованные ступени, вращение башни) и решены проблемы с тяжелыми объективами. Рамы инструментов теперь изготавливаются из специальных сплавов, устойчивых к тепловому расширению, а вспомогательные компоненты, такие как револьверная головка, теперь изготавливаются из термостойких полимеров.Такие улучшения были дополнены усовершенствованными линейными энкодерами, которые представляют собой моторизованные узлы, которые могут перемещать столик или револьверную головку в точное место с точностью выше 50 нанометров. Несмотря на то, что эти улучшения привели к появлению усовершенствованных микроскопов, которые могут поддерживать фокусировку в пределах одного-двух микрометров в течение длительных периодов времени, они все еще не смогли преодолеть тот факт, что нагретые камеры для образцов (и связанные с ними покровные стекла) подвержены тепловому расширению и сжатию. что приводит к исходным проблемам смещения фокуса.

Чтобы устранить артефакты теплового дрейфа, присущие практически всем камерам формирования изображений на основе покровного стекла, производители микроскопов и вторичного рынка недавно представили новые аппаратные решения для компенсации дрейфа фокуса, используя несколько несколько разных, но все же тесно связанных подходов. Важно отметить, что с иммерсионными объективами большинство этих устройств работают на основе предположения, что связь между наблюдаемым образцом и водной поверхностью покровного стекла является фиксированной (следовательно, клетки или тонкие ткани не плавают свободно. в питательной среде).Вместо этого клетки или ткани (такие как камеры яйца Drosophila melanogaster ) либо естественным образом прикрепляются к стеклу, либо прикрепляются к покровному стеклу через тонкие слои ламинина, фибронектина, полилизина или гликопротеинов. Все коммерчески доступные системы определяют местонахождение верхней внешней поверхности покровного стекла (границу раздела между стеклом и средой для культивирования тканей или буфером) путем измерения расположения фигурных линий отраженного света, излучаемого слабым лазером ближнего инфракрасного диапазона или светоизлучающим диодом ( LED). ; как показано на рисунке 7).Напротив, для сухих объективов отражение света от нижней поверхности покровного стекла (при контакте с воздухом) используется для определения того, находится ли образец в фокусе.

Рисунок 7 — Компенсация смещения фокуса с помощью лазеров на светоизлучающих диодах

Иллюстрация, представленная на рисунке 7, показывает, как системы компенсации смещения фокуса могут использовать отражение света от покровного стекла для измерения относительного положения фокуса.Интересующая область образца используется оператором для установки начального смещения от верхней поверхности покровного стекла, которое определяет фокальную плоскость и служит основой для компенсации (рис. 7 (а)). Когда происходит смещение фокуса (здесь, в результате осевого перемещения покровного стекла ближе к объективу; Рисунок 7 (b)), обнаруженная интенсивность лазерного или диодного отражения от покровного стекла предоставляет информацию, необходимую для изменения положения объектива и возобновления работы компенсация смещения. Таким образом, моторизованный блок аксиальной фокусировки получает обратную связь от системы компенсации для коррекции дрейфа, обнаруженного на покровном стекле, а затем восстанавливает смещение до предварительно определенного осевого значения, обеспечивая четкую фокусировку для образца (рисунки 7 (c) и 7 (d). ).Обратите внимание, что сам образец не участвует в коррекции фокуса, скорее, этими устройствами управляет интерференционная картина, создаваемая отражением на границе раздела стекло-вода.

Одна из популярных и недорогих коммерческих систем коррекции фокуса на вторичном рынке основана на измерении отражательной способности светодиодного источника ближнего инфракрасного диапазона с использованием полного внутреннего отражения от покровного стекла. Эта конструкция работает довольно эффективно при использовании объективов с высокой числовой апертурой (1,4 или выше) и может быть установлена ​​вместе с двигателем управления фокусировкой практически на любую раму микроскопа.Основным ограничением при использовании полного внутреннего отражения для измерения фокуса является абсолютное требование для масляных иммерсионных объективов с очень большой числовой апертурой для достижения критического угла падения светового луча, измеряющего фокус. Объективы с сухой и водной иммерсией, имеющие гораздо меньшую числовую апертуру, не подходят для этой модификации из-за того, что числовая апертура объектива должна быть значительно выше, чем показатель преломления образца и окружающей его среды (примерно 1.33-1,38 для живых клеток, погруженных в среду для выращивания или визуализации). Таким образом, хотя это устройство подходит для большинства исследований изображений живых клеток с высоким разрешением, оно не применимо в сценариях, где критически важно погружение в воду, или для высокопроизводительных исследований с использованием многолуночных планшетов и сухих объективов. Другой продукт вторичного рынка использует датчик высокого разрешения (с точностью до 5 нанометров) для измерения расстояния между передней линзой объектива и образцом для определения фокуса.В этом устройстве объектив установлен в пьезоэлектрическом нанопозиционере, установленном между резьбой объектива и револьверной головкой. Диапазон движения нанопозиционера составляет приблизительно 100 микрометров, что достаточно для обеспечения широкого диапазона фокусных расстояний.

За последние несколько лет основные производители микроскопов представили несколько коммерческих устройств компенсации смещения фокуса. Все эти системы предназначены для использования преимущества отражения света в ближней инфракрасной области от границы раздела покровное стекло-среда в камерах визуализации живых клеток для определения расстояния между объективом и покровным стеклом, но ни одна из них не подходит для фиксированных образцов, использующих среду с высоким показателем преломления. (приближается к 1.5, значение для большинства покровных стекол). Во время работы линейный свет, исходящий от лазера или светодиода, проходит через специальную оптическую систему, которая пересекается с оптической цепью первичного микроскопа и фокусируется объективом на границе раздела между покровным стеклом и средой, поддерживающей наблюдаемые клетки. Свет, отраженный от этого интерфейса, затем направляется обратно в оптическую систему коррекции фокуса и на поверхность специального интегрированного устройства с зарядовой связью ( CCD, ).Основываясь на интенсивности и положении отраженного света, захваченного ПЗС-матрицей, система обратной связи программного обеспечения устанавливает взаимосвязь между границей раздела стекло-вода и фокусной точкой объектива.

После активации аппаратного обеспечения коррекции фокуса оператор может ввести смещение , которое перемещает фокусную точку объектива в выбранную область внутри образца, сохраняя при этом ту же контрольную точку на границе раздела, что обеспечивает резкую фокусировку для образца на определенном расстоянии. из интерфейса (см. рисунок 7).Таким образом, величина смещения определяется как расстояние между фокальной плоскостью объектива и границей раздела жидкое стекло (или стекло-воздух). В зависимости от производителя, эти системы компенсации фокуса способны отслеживать и корректировать дрейф фокуса в различных временных масштабах, от нескольких миллисекунд до 10 или более секунд. Это дает явное преимущество по сравнению с программными процедурами компенсации фокуса. Кроме того, в большинстве случаев параметры компенсации смещения фокуса могут быть определены в управляющем программном обеспечении микроскопа для координации коррекции смещения с получением изображения, а также для интеграции работы с другими периферийными устройствами, такими как заслонки, колеса фильтров и моторизованные столики.

Рисунок 8 — Непрерывный и внезапный дрейф фокуса с коррекцией

Пример длительного дрейфа фокуса до и после аппаратной компенсации представлен на рисунке 8 (а). Образец представляет собой прикрепленную культуру клеток карциномы человека (линия HeLa), меченных слиянием EGFP с человеческим альфа -тубулином. Изображения получали с помощью иммерсионного объектива с 60-кратным увеличением с 4-минутными интервалами в течение четырех часов при флуоресцентном освещении конфокального микроскопа с вращающимся диском.Клетки помещались в камеру резистивного нагрева, в которой температура покровного стекла поддерживается элементом, встроенным в металл, окружающий покровное стекло. Температура в лаборатории микроскопа снижалась со скоростью один градус Цельсия в час. В течение 240 минут без аппаратной компенсации осевое смещение фокальной плоскости составляло приблизительно 2,8 микрометра. Напротив, с аппаратной коррекцией дрейфа фокуса фокальная плоскость поддерживалась с точностью приблизительно 200 нанометров в течение того же периода времени.Рисунок 8 (b) иллюстрирует эффекты открытия дверцы доступа в климатическую камеру, уравновешенную до 37 градусов Цельсия, в течение 1 минуты. Обратите внимание на резкое падение осевого смещения (примерно на 3,4 микрометра), которое возникает в результате температурного удара.

Примером аппаратного обеспечения компенсации смещения фокуса является система Nikon Perfect Focus System ( PFS ), которая интегрирована в аппаратное обеспечение осевого контроля серии инвертированных микроскопов Ti-E (показано на Рисунке 9).Для компенсации фокуса с приборами Ti-E-PFS можно использовать широкий спектр сухих и масляных иммерсионных объективов, от 4x до 100x с различной числовой апертурой. Диапазон рабочих расстояний объективов, доступных для PFS, составляет от 120 микрометров до более 15 миллиметров, что обеспечивает высокую универсальность. Светодиодный индикатор ближнего инфракрасного диапазона с длиной волны 870 нм и линейный датчик CCD, используемые PFS, размещены в специализированном блоке револьвера (рис. 9), который не требует бесконечного пространства и позволяет оптической системе основного микроскопа оставаться предназначенной для получения изображений.Среди наиболее продвинутых функций Nikon PFS — частота дискретизации 5 миллисекунд (200 Гц), которая не зависит от программного обеспечения для управления микроскопом и камерой и значительно быстрее, чем другие системы, которые должны многократно проверять как интерфейс покровного стекла, так и интересующую фокальную плоскость. . Использование длинноволнового светодиода позволяет использовать Ti-E-PFS с флуорофорами, излучающими в диапазоне длин волн от 340 до 750 нанометров. Кроме того, PFS может использоваться с большим разнообразием режимов визуализации с усилением контраста, включая светлое поле, фазовый контраст, контраст модуляции Хоффмана, DIC, широкопольную флуоресценцию, конфокальную, TIRFM, вращающийся диск и развернутое поле со строчной разверткой.Самая современная версия Nikon PFS — Perfect Focus System 4 для инвертированного микроскопа Ti2-E.

Описанные выше системы коррекции смещения фокуса предназначены в первую очередь для получения изображений живых клеток, размещенных в специализированных камерах для визуализации, оборудованных покровным стеклом толщиной от 150 до 180 микрометров (покровные стекла №1 или №1,5). За другими образцами может быть труднее наблюдать с коррекцией дрейфа фокуса из-за слабой инфракрасной отражательной способности или чрезмерного рассеянного света.К ним относятся фиксированные образцы, помещенные в среду с высоким показателем преломления (которая более точно соответствует покровному стеклу). В этом случае количество отраженного света от системы контроля фокуса может быть недостаточным для обнаружения поверхности раздела. Точно так же образцы толстых тканей, которые рассеивают значительное количество света, трудно использовать с коррекцией дрейфа фокуса. Толстые стеклянные покровные стекла (более 180 микрометров) или пластиковые чашки для культивирования тканей также не рекомендуются, поскольку граничная поверхность может быть не обнаружена из-за недостаточного смещения.Наконец, пыль и мусор на поверхности покровного стекла могут ухудшить точность определения границ, что приведет к чрезмерному колебанию или ошибкам в коррекции фокуса.

Хотя доступные в настоящее время системы коррекции смещения фокуса предназначены для измерения коэффициента отражения от поверхности раздела покровного стекла, ряд вариаций от одного дизайна к другому предоставляет множество вариантов и потенциальных ловушек для исследователей, проводящих длительную покадровую визуализацию. В первую очередь интерес представляет существенная разница в цене между коммерческими системами, что позволяет исследователям в некоторых случаях выбирать решение, которое больше соответствует их бюджету, чем их фактические потребности в визуализации живых клеток.Как обсуждалось выше, несколько производителей послепродажного обслуживания предоставляют дополнительные блоки коррекции фокуса, которые можно модернизировать для использования на существующих моторизованных (или немоторизованных) микроскопах. Напротив, более совершенные системы под ключ, предлагаемые производителями микроскопов, полностью интегрированы в их перевернутые рамы и, следовательно, не требуют модификации микроскопа или использования оптического порта для установки. Все системы коррекции фокуса способны отображать несколько объектов в разных боковых и осевых положениях (фактически, для каждого поля обзора, снятого в каждый момент времени).

Рисунок 9 — Система идеальной фокусировки Nikon Ti-E

Основным фактором при оценке коммерческих систем коррекции смещения фокуса является частота, с которой контур обратной связи отслеживает и регулирует фокус. Система Nikon PFS предлагает постоянно активный механизм, который работает независимо от микроскопа и программного обеспечения для управления камерой, в то время как другие берут на себя определение фокуса и процесс коррекции непосредственно перед захватом каждого изображения.У каждого подхода есть свои преимущества и недостатки. Например, если эксперимент включает захват изображения в реальном времени, то система Nikon PFS, использующая механизм непрерывной подачи, может быть более полезной, поскольку она будет корректировать дрейф независимо от вызова программного обеспечения. Однако для экспериментов, в которых ключевым моментом является захват изображений с перерывами в течение длительных периодов времени, может быть достаточно более медленных систем, которые оценивают фокусировку перед каждым захватом изображения. В общем, при выборе системы компенсации фокуса главное внимание уделяется скорости захвата изображений.Более быстрые системы хорошо справляются с захватом изображений с длительными интервалами времени, тогда как более медленные системы будут менее полезны для захвата изображений с интервалами короче 3-5 секунд.

В типичных сценариях покадровой съемки, когда между захватами изображений возникает значительная задержка, короткий интервал, необходимый для измерения отражательной способности, а затем смещения к определенной осевой позиции над покровным стеклом, не имеет значения. Однако при сборе потоков изображений быстрыми пакетами 30 кадров в секунду или более самые быстрые системы компенсации будут демонстрировать превосходную производительность.Однако следует отметить, что, в зависимости от конструкции, система непрерывной обратной связи может быть не в состоянии завершить этап компенсации между каждой экспозицией и, следовательно, может подвергаться риску захвата изображения, пока система все еще ищет опорную плоскость. В таких случаях результирующие видео часто страдают от артефактов джиттера (непредсказуемые сдвиги пикселей по одной из боковых осей, которые возникают периодически каждые несколько кадров) при воспроизведении. Еще одна переменная, которую следует учитывать при выборе между непрерывной и управляемой захватом системой компенсации фокуса, — это общее время эксперимента.Продолжительность покадровых экспериментов может составлять от нескольких секунд до часов или даже дней. Для экспериментов, которые длятся несколько часов или дней, системы непрерывной обратной связи, основанные на пьезоэлектрических приводах, могут быть подвержены механическому дрейфу или несогласованности позиционирования из-за гистерезиса или ползучести . В краткосрочных экспериментах влияние этих артефактов обычно незначительно, но в течение продолжительных периодов сбора их вклад может быть значительным.

В заключение, решение проблемы смещения фокуса, возможно, является наиболее значительным достижением в области визуализации живых клеток, которое произошло в новейшей истории.Этот артефакт всегда необходимо устранять во время настройки экспериментальной системы, предназначенной для создания покадровых изображений, и он гораздо более выражен при использовании объективов с высокой числовой апертурой, где узкая глубина фокуса может легко сместиться при малейшей вибрации или изменении температуры. Дрейф фокуса также является ключевым фактором (а также серьезной проблемой), который необходимо устранить при визуализации сложной последовательности боковых и осевых положений в пределах одного образца в каждом временном интервале. В большинстве случаев новые системы компенсации смещения фокуса, доступные от производителей микроскопов, способны обеспечить отличную коррекцию, хотя и с разной скоростью.Однако независимо от уровня сложности прибора при проведении покадровых экспериментов с живыми клетками необходимо уделять пристальное внимание факторам дрейфа, перечисленным выше, включая тепловую среду, камеры для визуализации образцов, вибрацию, иммерсионные среды и механическую стабильность. Как только все основные детали будут рассмотрены, осторожный исследователь должен быть вознагражден отличными результатами.

Chord Workshop: Drift Away — Доби Грей

Drift Away — Доби Грей

Паттерн бренчания: D, D, DU, DUDD, DU

Темп: NA

Используемая шкала: E Major (открытая) | Ре мажор (каподастр 2)

Тональность песни: Родственник

Песня, которую я вам предоставляю, включает каподастр на втором ладу, который меняет исходную тональность E на D.При использовании каподастра на втором ладу тон струн меняется на:

.

Стандартная настройка:	Каподастр 2
E (низкий)	F #
А	В
D	E
G	А
B	C #
e (высокий)	F #

В песне содержатся следующие аккорды: D, A, E и Bm, если вы использовали каподастр на втором ладу.
В песне содержатся следующие аккорды: E, B, F # и C # m, если вы играете песню без каподастра на втором ладу.

Когда песня исполняется в положении OPEN, тональность E
Когда песня исполняется с каподастром на втором ладу, тональность D

Что делать, если вы держите гитару в открытом положении (без каподастра)?

Означает ли это, что технически вы можете играть соло с гаммой ми мажор? Да.
Означает ли это, что технически вы можете играть соло с мажорной шкалой ми-пентатоники? Нет.

Проверь это

Вот образец соло-вступления, основанный на игре соло-гитары БЕЗ использования каподастра на втором ладу. Другими словами, этот рифф будет сыгран в тональности ми мажор.

Нам нужно изучить эти ноты, чтобы убедиться, что мы действительно можем сыграть с этой песней гамму ми мажор. Вот часть шкалы ми мажор для пояснения:

Работает! Все ноты риффа ЯВЛЯЮТСЯ частью гаммы ми мажор.А как насчет пентатоники ми мажор?

Поскольку пентатоническая гамма ми мажор (пента = 5) не содержит ноты, необходимой для ноты четвертого лада на струне си, которая является D #, мы не могли технически сыграть пентатонику ми мажор. Это означает, что для наших целей в центре внимания находится исключительно гамма ми мажор.

А как насчет применения каподастра к этому образцу свинца? Другими словами, что, если бы мы сыграли эту ведущую модель С каподастром на втором ладу и продолжили бы песню, как если бы песня была в тональности D? Это сработает?

Шаг 1: Какие ноты играются в этом паттерне с каподами на втором ладу.Поймите, что все ноты относятся к каподару. Это означает, что вы должны считать ОТ нот каподастра второго лада количество пробелов, необходимых для нот на вкладке.

Как я определил, что это были заметки? Первое, что вам нужно сделать, это сделать лад 2 (каподастра на месте) отправной точкой, как если бы это был нулевой лад. Затем вы просто считаете числа до нот.

Каподастр 2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
Высокий E (F #)	G	G #	А	A #	В	С	C #	D	D #	E
Струна B (C #)	D	D #	E	F	F #	G	G #	А	A #	В

На струне B: Четыре лада от 2-го лада (каподастр) — это нота F.Семь ладов из второго лада (каподастр) — это нота G #. Промыть, промыть и повторить!

Если бы вы не думали о каподастрах как о своем «новом нулевом ладу», то вы бы посмотрели на гриф в целом следующим образом:

Все, что я сделал, добавил ко всему «4»! По сути, если вы притворитесь, что каподастра вообще не существует (или если у вас его нет и вы хотите подыгрывать другому человеку, который играет с каподастилем), вы будете беспокоиться об этих нотах по мере их появления.

Это одна из причин, по которой вы видите все больше и больше табулатур вместо использования заметок, потому что табуляция не различает заметки.Как правило, вы видите то, во что играете.

Давай сыграем!

В видео, которое я вам предоставляю, используется каподастр на втором ладу. После того, как вы отрабатываете всю песню, играя вместе со мной, попробуйте добавить ведущий рифф, который звучит как с использованием каподастра, так и НЕ с использованием каподастра. Я предоставил вам легенду вкладки.

Видео игры: Capo Fret 2

Riff With Capo (после риффа вы играете D — A):

Объяснение ведущего (с каподастром на 2 ладу)

Riff With Capo (после риффа вы играете D — A):

Пояснения к отведениям (без капо)

Riff Without Capo (после риффа вы играете от E до B):

Справочный файл аккордов

рендера — Пикассо 0.2.7 документация

Коррекция дрейфа

Picasso предлагает две процедуры для коррекции смещения: алгоритм RCC (вариант A) и использование определенных структур на изображении в качестве маркеров смещения (вариант B). Хотя вариант A не требует дополнительной подготовки образца, вариант B зависит от присутствия на изображении либо реперных маркеров, либо структур, изначально сгруппированных в кластеры. С другой стороны, вариант B часто поддерживает более точную оценку дрейфа и, таким образом, обеспечивает более высокое разрешение изображения.Для достижения максимально возможного разрешения (сверхвысокого разрешения) мы рекомендуем последовательное применение варианта A и несколько раундов варианта B. Маркеры смещения для варианта B могут быть элементами самого изображения (например, белковые комплексы или ДНК-оригами) или намеренно. включены маркеры (например, ДНК оригами или наночастицы золота). При использовании ДНК-оригами в качестве маркеров дрейфа коррекция обычно применяется в два этапа: во-первых, с использованием целых структур ДНК-оригами в качестве маркеров, а во-вторых, с использованием отдельных участков связывания ДНК-КРАСКИ в качестве маркеров.В обоих случаях точность коррекции дрейфа сильно зависит от количества выбранных маркеров дрейфа.

Коррекция дрейфа избыточной корреляции

1. В Picasso: Render выберите Postprocess> Undrift by RCC .
2. Появится диалоговое окно с запросом параметра сегментации. Хотя значение по умолчанию, 1000 кадров, является разумным выбором для большинства фильмов, может потребоваться настроить параметр сегментации алгоритма в зависимости от общего количества кадров в фильме и количества локализаций на кадр.Меньший размер сегмента приводит к лучшему разрешению временного дрейфа, но требует фильма с большим количеством локализаций на кадр.
3. После того, как алгоритм завершится, расчетный дрейф будет отображаться во всплывающем окне, а на дисплее будет отображаться изображение с коррекцией дрейфа.

Коррекция дрейфа на основе маркера

1. В Picasso: Render , выберите маркеры смещения, как описано в Выбор областей интереса . Используйте опцию Выбрать аналогичный , чтобы автоматически обнаруживать большое количество маркеров смещения, похожих на несколько выбранных вручную.
2. Если структуры, используемые в качестве маркеров дрейфа, имеют внутренний размер, превышающий точность отдельных локализаций (например, ДНК-оригами, большие белковые комплексы), очень важно выбрать большое количество структур. В противном случае статистика для расчета сноса в каждом кадре (среднее смещение локализации к центру масс конструкции) недействительна.
3. Выберите Postprocess> Undrift из выбранного , чтобы вычислить и применить коррекцию смещения.
4. (Необязательно) Сохраните локализации с исправленным дрейфом, выбрав Файл> Сохранить локализации .

FOREX — евро падает и иена растет, поскольку рынки обеспокоены траекторией глобального восстановления

* Суд запрашивает участие Германии в покупке облигаций ЕЦБ

* Евро упал до 3-летнего минимума по сравнению с иеной; иена достигла пика в 7 недель против

доллара * Другие крупные компании падают ниже

* График: Мировые курсы валют в 2020 году tmsnrt.rs/2RBWI5E

СИНГАПУР, 6 мая (Рейтер) — Иена достигла трехлетнего максимума по отношению к евро и семинедельный пик курса доллара в среду после решения суда, оспаривающего участие Германии в программе стимулирования экономики Европы и опасений по поводу неровного восстановления мировой экономики, напугал инвесторов.

Высший суд Германии во вторник дал Европейскому центральному банку три месяца для оправдания покупок в рамках его программы покупки облигаций или потери Бундесбанка в качестве участника схемы, направленной на смягчение экономического удара от коронавируса.

Эта новость привела к тому, что евро за ночь упал до недельного минимума в 1,0826 доллара, а в Азии он упал до трехлетнего минимума в 115,09 иены, поскольку трейдеры беспокоились как о схеме, так и о будущем евро.

«Медведи» также преобладали в других направлениях, поскольку подверженные риску основные валюты немного упали, а иена-убежище пробила сопротивление по отношению к доллару и достигла семинедельного максимума в 106.20.

Валютные и фондовые рынки в этом месяце были непостоянны, поскольку ужасающие экономические показатели и опасения по поводу напряженности между США и Китаем вселяли оптимизм в отношении снятия ограничений на COVID-19.

«Йена была основной валютой с самого начала кризиса, и это должно продолжаться», — сказал Кит Джукс, глава валютной стратегии Societe Generale.

«Уровень доходности является самым большим фактором роста иены, и им придется немного подняться во всем мире, чтобы иена ослабла.Доходность долгосрочных облигаций США выросла в одночасье, поскольку США планируют увеличение заимствований, но остается около исторического минимума.

Иена выросла по отношению к австралийскому доллару почти на полпроцента до 68,25 иены, что близко к трехнедельному максимуму. Австралийский доллар и киви немного подешевели по отношению к доллару, но держались выше 64 и 60 центов соответственно.

Последний раз австралиец торговался по 0,6422 доллара, а новозеландский доллар — 0,6044 доллара. Фунт оставался стабильным на уровне 1,2431 доллара.

Решение немецкого суда вряд ли полностью сорвет европейскую программу стимулирования, поскольку Европейский центральный банк, вероятно, сможет предоставить необходимое обоснование для своих покупок облигаций.

Но возникшая неопределенность — это лишь последняя проблема, которая мешает Европе противостоять коронавирусу.

Пандемия нанесла больший ущерб Италии и Испании, имеющим задолженность, по сравнению с Германией, что возродило напряженность между богатыми северными и более бедными южными европейскими государствами-членами, в результате чего политики разделены, а на ЕЦБ ложится тяжелая работа.

«Это будет второй раз, когда мы окажемся в серьезном кризисе, когда ЕЦБ оказался под сильным давлением», — заявил во вторник президент Федеральной резервной системы Сент-Луиса Джеймс Буллард.

«Это очень серьезный стресс-тест для евро и европейского проекта, позволяющий эффективно отреагировать на этот кризис», — сказал Буллард в комментариях к онлайн-трансляции. «Я просто надеюсь, что это станет катализатором».

В другом месте президент США Дональд Трамп снова настаивал на происхождении вспышки, которая унесла жизни более четверти миллиона человек с момента ее начала в китайском городе Ухань в конце прошлого года.

Рынки ждут ответа от Пекина на его последние комментарии, которые на прошлой неделе включали угрозу новых тарифов на китайские товары.(Отчет Тома Уэстбрука, редакция Шри Наваратнама)

Денежные убежища с невероятной отрицательной доходностью в 4,8 триллиона долларов

Гиганты отрасли, такие как Vanguard Group и Fidelity Investments, уже сделали так называемое «мягкое закрытие», то есть закрыли некоторые фонды для новых инвесторов. Ходят слухи, что со временем некоторые компании отрасли могут отказаться от платы за управление. И менеджеры творчески подходят к своим инвестициям. Все это делается для того, чтобы сохранить некоторую положительную доходность для клиентов — задача, которая может усложняться, когда трейдеры начинают делать ставки на отрицательную контрольную ставку Федеральной резервной системы.

«В частности, в денежном фонде Казначейства вас втискивают в довольно маленькую коробку с точки зрения того, каковы ваши возможности», — сказал Джо Линэг, глава отдела управления денежными средствами T. Rowe Price, которая управляет денежным рынком на сумму 55 миллиардов долларов. средств, около 25 миллиардов долларов из которых находятся в государственных фондах, ориентированных на клиентов.

Казначейство США выпустило векселей на сумму более 1,5 триллиона долларов, чтобы профинансировать свои программы стимулирования и закрыть дыру в налоговых поступлениях на фоне экономических последствий усилий по сдерживанию коронавируса.Хотя это обеспечило столь необходимый запас активов для покупки денежных средств, доходность очень мала, а базовая ставка Федеральной резервной системы в обозримом будущем привязана к отметке около 0%.

Падение притока в фонды денежного рынка произошло даже тогда, когда собственная доходность фондов приблизилась к нулю. В прошлом году доходность фондов была выше 2%. По данным State Street Global Advisors, в наши дни среднее значение для 11 крупнейших государственных фондов составляет около 20 базисных пунктов, а для 11 крупнейших фондов основных денег — 64 базисных пункта.

Когда ставки были близки к нулю во время восстановления после мирового финансового кризиса, некоторые фондовые компании отказались от платы за управление, чтобы сохранить прибыль для клиентов. По словам Уилла Голдтуэйта, глобального стратега по денежным средствам и фиксированным доходам в State Street Global Advisors, это может произойти снова.

«Очевидно, что существует проблема с доходами, поскольку урожайность падает до нуля», — сказал он. «Я надеюсь, что когда-нибудь в 2021 году мы увидим разумное восстановление, и разговор о повышении ставок ФРС возобновится.”

Некоторые менеджеры, такие как Lynagh, не рассматривают возможность мягкого закрытия, даже несмотря на то, что среда с низкими ставками создает проблемы в среднесрочной перспективе, поскольку экономисты прогнозируют более длительное восстановление после рецессии.

Сделок репо

Это не только риск того, что доходность казначейских векселей будет ниже к более длительной — также снизилась доходность от кредитования на рынках репо.

Линэг приспосабливается, как может. Он оценивает стоимость двухлетних казначейских облигаций с плавающей процентной ставкой. А чтобы расширить свои возможности в области кредитования под обеспечение, он использует спонсируемое репо, когда дилеры предоставляют доступ к Fixed Income Clearing Corp.Очищенная платформа репо вместо того, чтобы обременять их собственные балансы. Последнее средство, по его словам, — это вложение наличных в операции ФРС по обратному выкупу «овернайт» по ставке 0%.

По словам Голдтуэйта с State Street, одно из мест, где можно получить лучшую прибыль, — это ипотечные кредиты, поддерживаемые агентствами. Другой вариант для управляющих денежными фондами — это покупка краткосрочных казначейских купонов или нот и облигаций, срок погашения которых близок к сроку погашения и соответствует профилю погашения фондов. Однако следует проявлять осторожность, поскольку это не самые ликвидные активы, а денежные средства считаются высоколиквидными.

«Только творчество»

«После этого вы можете проявить лишь определенное количество творчества в этих портфелях при допустимых инвестициях», — сказал он.

Тем не менее, имея триллионы долларов торговли долговыми обязательствами на развитых рынках с доходностью ниже 0%, Голдтуэйт сказал, что он воодушевлен тем, что ФРС отодвинула отрицательные процентные ставки. Но до тех пор, пока он не увидит признаков выздоровления, по его словам, «будет некоторая боль, которую почувствуют как клиенты, так и менеджеры фондов».

«Один из немногих вопросов, которые я получил, — это:« Когда доходность упадет до нуля? »- сказал Голдтуэйт.«Это наличные. Это просто стоимость владения наличными, и вы должны быть там ».

Стратеги JPMorgan Chase во главе с Алексом Ровером заявили в записке для клиентов в прошлом месяце, что есть опасения по поводу того, останется ли предложение казначейских векселей таким же высоким, как в последние несколько месяцев, в результате чего фонды денежного рынка будут работать с более низкой доходностью. на некоторое время.

С другой стороны, есть основания полагать, что поток потоков в денежные фонды может утихнуть.

Одна из причин заключается в том, что крайний срок уплаты федерального налога был перенесен с 15 апреля на 15 июля, что могло привести к оттоку средств корпорациями, которым необходимо будет оплатить свои счета.

И хотя сезонные тенденции предполагают, что сальдо денежного рынка, как правило, достигают пика во второй половине года, в этом году они могут вырасти в ближайшем будущем, сказал Ровер. Но, по его словам, «необходимость тратить» у компаний, у которых есть наличные в фондах, вскоре их сократит.

«Если вы думаете о компании, у которой есть текущие расходы, и прямо сейчас они могут не приносить нормального дохода, ожидайте, что они будут использовать свои акции и депозиты MMF». — сказал Роувер. «Им нужно будет взять часть этих денег и потратить.”

.