«Нива» 40 лет спустя – все только начинается!
Наверное, самой яркой новинкой ММАС-2018 стала концептуальная модель LADA 4×4 VISION. Это была настоящая суперпремьера!
На стенде «АвтоВАЗа», который на Московских международных автосалонах едва ли не самый большой, случаются сюрпризы, да такие, что глаз не оторвать. ММАС-2018 — не исключение.
Признаться, я надеялся, что под одним их покрывал, скрывающих новинки, будет Lada 4×4. Неважно, в каком виде — концептуальном или предсерийном… Главное, чтобы она была.
И она вырвалась из этой оболочки и показала себя во всей красе! …Ах, такого никто не ожидал! Пауза, это надо пережить. Аплодисменты! За смелость, за понимание задачи, за любовь к «Ниве». Она во всем: в трехмерной Икс-образной решетке радиатора, в рельефном капоте, в оригинальных светодиодных фарах и дневных ходовых огнях…
Длинные передние двери. Задние короче. Ручек открывания не видно — где-то спрятаны. Центральной стойки тоже нет. Такое бывает у концептов, жаль, на серийные образцы почти никогда не переносится.
Матовые накладки в нижней части внедорожника. Накладки на пороги. Молдинги. Все это работает на контрасте с кузовом, подчеркивая брутальность машины. И специальный цвет окраски тоже добавляет огня в восприятие.
А 21-дюймовые колеса, а какие-то фантастические диски… И сиденья, и цифровой мир в салоне. Все это как будто с другой планеты. Но всего один лишь штрих — и мы видим в этом харизматичном аппарате старую добрую «Ниву». Вот они — эти жалюзи на задних стойках… Как у нее!
…Алюминиевая накладка между аркой переднего колеса и дверью несет российский триколор. Это как сигнал: «Нива» жила, «Нива» живет», «Нива» будет жить!
Credit: @Drivenn.ru
Предложения от бренда LADA сегодня:
Фото автора и «АвтоВАЗа»
Lada 4×4 Vision: такой будет новая «Нива»!
5 колесо
Через 40 лет после выпуска LADA 4х4 дизайнеры АВТОВАЗа взяли на себя смелость «реинкарнировать философию» легендарного внедорожника в «теле» концепта Lada 4×4 Vision. Конечно же, решенного в стиле «Икс-дизайна». В концепции Икс-графики выполнены и решетка радиатора, и боковые части кузова, и фонари задней части автомобиля… Икс-дизайн дополняют тонкие светодиодные фары, а светодиодные указатели поворота, интегрированные в рельефный капот, напоминают об общей родословной с Lada 4х4. Большинство решений в области экстерьера основано на игре света на деталях кузова, не имеющего центральной стойки и несущего элементы купе. Специально разработанный цвет окраски усиливает эффект «трехмерности» кузова.
Пропорции автомобиля подчеркивают 21-дюймовые колеса, дополняющие спортивный стиль Lada 4×4 Vision и обеспечивающие значительный дорожный просвет. Lada 4×4 Vision создан на особой платформе длиной 4,2 метра, а большой дорожный просвет и экстремальные углы въезда подчеркивают характер настоящего внедорожника. Что касается интерьера, то в распоряжении водителя и пассажиров полный набор цифровых систем, позволяющих безопасно передвигаться по бездорожью, а вся необходимая информация выводится на два больших цифровых экрана.
Хочу получать самые интересные статьи
Лада Визион 2019 новая модель 4х4, фото, цены, комплектации, видео тест-драйв
Автоновинка, представленная российскими производителями, произвела фурор. Совершенно новая Лада Визион 2019 выглядит, как настоящий европейский внедорожник. Эта модель всегда идеально подходила для суровых реалий наших дорог, единственное, чего ей не доставало – европейского шика. Эта проблема превосходно решена в новой модели 4×4.
Новинка от АвтоВАЗаЭкстерьер
Московский международный автомобильный салон 2018 года стал значимым для АвтоВАЗа. На выставке был представлен концепт новой Лада Визион 2019 года. Новинка перевернула представление о привычном российском автопроме. Стиву Маттину удалось сломить стереотипы. Он вывел в свет новую концепцию внедорожника. Дизайн автоновинки поражает воображение — тольяттинскому заводу удалось совместить черты Нивы и европейский икс-дизайн. В целом, внедорожник выглядит продуманным и стильным.
Главные черты Лады:
- Передняя часть. Новая модель имеет массивную переднюю часть. Благодаря этому внедорожник кажется проходимым и дерзким. На ней приютилась стильная решетка радиатора, выполненная в Х-форме. Подобные концепции имели место быть в производстве Лексуса, Мицубиси. Радует, что российский автопром включается в гонку производителей. Крупный узор на решетке прекрасно сочетается с логотипом АвтоВАЗа.
- Оптика получила скромный дизайн. Несмотря на это, светодиодная «начинка» позволяет эффективно освещать дорожное полотно. Оригинальные фары прекрасно сочетаются с хромированными элементами кузова. Порадовал автолюбителей рельеф капота и бампера. Строгие линии придают внедорожнику сильный характер. Контрастная защита визуально добавляет мощности.
- Боковая часть Lada 4×4 Vision 2019 в новом кузове повторяет Х-образный стиль переда. Рельефные вырезки обрамляют дверь, слегка залезая на нее. Штамповка спереди и сзади делают корпус мускулистым. Традиционно Нива представляет собой двухдверый внедорожник. Здесь эта идея сохраняется.
- Концепция внедорожника сохраняется в больших колесных 21-дюймовых дисках. На задней части корпуса есть небольшие сюрпризы. Конструкторы придумали два небольших отверстия, одно из которых предназначено для заправки авто, а другое ни что иное как 220-вольтная розетка, для работы или зарядки приборов.
- Задняя часть напоминает нам уже знакомый силуэт. Спасают ситуацию измененные фонари. Теперь они выполнены в X-образной форме, что определенно исходит из общей концепции. Однако острые на язык «диванные критики» уже успели назвать обновленную оптику «бантиками» и «косточками». На самом деле, эта форма ни сколько не портит внешнего вида. Порадовало наличие противотуманных фар и усиленной защиты корпуса. На бампере красуется прямоугольник с названием компании производителя.
Стоит признать, что концепт удивил. Его появление долго скрывалось и хранилось за закрытыми дверями. Именно поэтому появление Визиона стало такой неожиданностью и шокировало продуманным дизайном и оснащением.
Интерьер
Традиционно внутреннее убранство автомобиля до последнего держится в секрете. Но на мероприятии журналистам удалось увидеть салон сразу. Красочные фото уже доступны для зрителей. Как и ожидалось, новый Lada 4×4 Vision 2019 вмещает трех пассажиров и водителя. В целом, салон соответствует внешнему облику машины. Серьезный автомобиль имеет брутальное наполнение. Просторный, комфортабельный – первое, что приходит в голову.
Основные характеристики салона:
- Используется многофункциональный руль интересной формы. Ожидается, что руль максимально удобен для хвата. Это уникальная разработка наших специалистов. Интересная форма органично сочетается с функциональным наполнением. На двух спицах расположены чувствительные кнопки.
- За рулевой стойкой размещена потрясающая воображение приборная панель. Дизайнеры отказались от традиционных «кругляшей» в пользу инновационных технологий. Тахометр и спидометр повторяют Х-образный дизайн, повторяющий концепцию кузова. Дефлекторы расположены в привычных местах, на них красуются контрастные буквы «X».
- Центральное место отведено сенсорному широкоформатному монитору, позволяющему регулировать некоторые функции салона и мультимедиа. Чуть ниже расположилась консоль с регуляторами кондиционера или климат-контроля. Селектор не перегружен дополнительными функциями.
- Спортивные сиденья оснащены подголовниками и подлокотниками. На фото видно проработанную боковую поддержку и качество материалов. В отличие от традиционных моделей Лады, заднее сиденье представлено не в виде дивана, а в качестве двух отдельных сидений.
- Отделка салона выполнена в черно-оранжевом цвете. Стильное сочетание повторяется на консоли, селекторе, руле и дверях. Пока не известно доступна ли расцветка для серийной версии. Однако глядя на этот автомобиль хочется верить, что российский автопром выйдет из тени и составит достойную конкуренцию иномаркам.
Технические характеристики
К сожалению, производитель решил не раскрывать все тайны новой модели. Поэтому достоверно известна только длина внедорожника — 420 сантиметров. Lada Vision 4х4 2019 используется платформа Рено Дастер. Эта информация просочилась, но пока не подкреплена официальным производителем. На данный момент АвтоВАЗ хранит молчание о приводах, силовых агрегатах, коробках передач, поэтому остается только фантазировать, чего можно ожидать от российского внедорожника.
Также пока рано говорить и о том, какие Лада Визион 2019 получит комплектации и какие цены на них будут установлены.
Конкуренты
Пока новинка не вышла в серийное производство, конкуренцию на рынке отследить достаточно сложно, однако, эксперты уже подготовили короткий список основных соперников внедорожника:
Дата выхода и цена
Ожидается, что серийный выход новой Lada Vision начнется в 2021 году. Возможно, автомобиль появится на рынке с названием Лада Нива. Судя по тем изменениям, что произошли с интерьером и экстерьером, не сложно предположить, что цена существенно подрастет, хотя, окажется несколько ниже, чем у сродного по платформе Renault Duster.
Фото
Видео тест-драйва
Опубликовано: 05.09.2018 | Автор: Чистяков Владислав
Предвестник Lada 4×4 нового поколения: брутальный дизайн с семейным икс-фейсом
На Московском международном автосалоне состоялся первый показ предвестника вазовского внедорожника следующей генерации.
Концепт Lada 4×4 Vision получился довольно брутальным, но при этом внешний облик прототипа выполнен в новом фирменном марки: прототип получил икс-фейс и икс-образные же выштамповки по бокам, как у Vesta и Xray. Хотя есть и своя особенность – многоярусная светодиодная головная оптика, к тому же у кузова прототипа нет центральной стойки. Еще Lada 4×4 Vision получил 21-дюймовые колесные диски.
Данными о «начинке» Lada 4×4 Vision вазовцы делятся неохотно. Как заявили в компании, прототип построен на «особой платформе длиной 4,2 метра». У концепта – «выдающиеся показатели дорожного просвета, короткие свесы и экстремальные углы въезда», но точные цифры не названы. О силовой установке – вообще ни слова.
Салон у Lada 4×4 Vision четырехместный, кстати, икс-тема продолжается и в интерьере: модель получила виртуальную «приборку» и дефлекторы обдува, оформленные в виде «иксов». Также концепт оснастили мультимедийной системой с большим тачскрином и климат-контроль. На центральном тоннеле имеется шайба – вероятно, она отвечает за выбор режимов движения внедорожника.
Во время презентации Lada 4×4 Vision было заявлено, что это лишь видение того, каким мог бы быть серийный внедорожник нового поколения. Сроки появления товарной Lada 4×4 следующей генерации вазовцы не назвали. Между тем в мае 2018-го Николя Мор (тогда еще президент АВТОВАЗа) в одном из своих интервью рассказал о том, что новая Lada 4×4 может встать на конвейер через три-четыре года.
Также ранее сообщалось о том, что внедорожник нового поколения могут построить на платформе B0, которая лежит в основе Renault Duster (кстати, длина нынешнего Дастера – 4 315 мм). Не исключено, что это будет модернизированная версия «тележки» — на такой в частности создан купеобразный «паркетник» Renault Arkana, который тоже показали на ММАС.
Напомним, «Колёса.ру» ведут онлайн-репортаж с Московского автосалона.
Лада 4х4 Вижн Концепт. Прототип внедорожника второго поколения 2020-2021. Фото, видео, опиание
концепт Лада Нива 2020
На Московском автосалоне 2018 главной премьерой неожиданно оказался концепт АвтоВАЗ — будущаяй модель Лада 4×4 нового поколения. Пока это всего лишь шоу-кар, демонстрирующий лишь экстерьер, а серийную версию можно ждать не ранее 2021 года.
Экстерьер
Дизайнерская задумка шефа Стива Маттина реализована понятно и легко считывается: характерные черты 40-летней Нивы «нанизаны» на новый современный кузов в X-стиле. В глаза бросаются и «брови» поворотников над передней головной оптикой, и воздухозаборники на задней стойке, как у классической Нивы, а современная икс-графика везде, с какой стороны не посмотри: глубокие х-образные выштамповки по бокам внедорожника и на переднем бампере, икс-графика в оптике сзади и спереди, на колесных дисках и даже на крыше.
внешность новой лады 4х4 концепт
На концепте нет средней стойки, а ручки задних дверей спрятаны, чтобы походить на трёхдверку. По информации АвтоРевю ручки будут спрятаны и в серийной машине, более того, внеший дизайн серийного авто в завершающей стадии и не будет иметь принципиальных отличий от шоу-кара, разве что изменяться пропорции, и исчезнут 21-дюймовые колеса.
новая нива 4х4
Интерьер
Во внутрь концепта никого не пустили, но салон почти полностью повторяет рисунки, предоставленные Ладой. Хорошо видно, что интерьер активно продолжает икс стилистику на приборной панели и блоках кнопок на рулей, иксы на воздуховодах, рукоятке КПП и под подлокотником, а также в спинках сидений. На центральном тонеле появилась современная шайба выбора режима трансмиссии.
салон новой лады 4х4 2020
Платформа и трансмиссия
Машина разрабатывается на платформе Nissan B0 Рено Дастера второго поколения, который пока доступен только на европейском рынке. Это значит, что Ладе достанутся и доработанная подвеска, и новый рулевой механизм с регулировкой колонки по вылету, и расширенный набор электроники.
С трансмиссией инженеры в Толльятти еще не определились. Чтобы сохранить проходимость оригинальной Нивы с постоянным полным приводом и раздаткой, нужно разрабатывать отдельно для дастеровской платформы, что влетит в копеечку. Поэтому высока вероятность того, что новая Лада 4×4 унаследует полный привод Дастера — с муфтой подключения задней оси и очень короткой первой передачей вместо отдельной понижайки.
Видео обзор новой Lada 4х4 Vision от Cliconcar
Двигатели и цены
Ни о двигателе, ни о ценах вазовцы пока ничего не говорят, но если они реализуют все свои задумки (в первую очередь по части трансмиссии), то Лада 4×4 окажется дороже даже нового Дастера. А если разделить всю технику с Renault, на серьезную разницу с Duster не стоит рассчитывать.
В целом понятно, что новая Лада 4х4 попрощается с имиджем дешевого вездехода. Но имя «Нива» слишком известное, чтобы предавать его забвению, и, возможно, его зарезервировали для реинкарнации маленького неприхотливого проходимца, где при такой смене поколений будет единоличествовать Suzuki Jimni. Но зная неспешность АвтоВаза, не удивлюсь, если старая Нива отпразднует свой золотой юбилей на конвеере.
АВТОВАЗ представил концепт-кар LADA 4х4 VISION на Московском автосалоне
Сегодня начал работу Московский международный автосалон MIAS-2018. Ведущий российский производитель легковых машин АВТОВАЗ, входящий в состав Госкорпорации Ростех, презентовал представителям ведущих российских и мировых СМИ рекордное количество новых серийных автомобилей LADA, а также продемонстрировал концептуальное видение нового внедорожника, который воплотит в себе фирменную дизайн-концепцию. MIAS-2018 продолжит работу до 9 сентября.
Среди моделей, представленных АВТОВАЗом, – новое семейство Granta, сохранившее доступность и надежность в новой X-стилистике; Vesta Cross, XRAY Cross, флагман семейства Vesta – Vesta Sport, а также концепт-кар LADA 4х4 VISION.
Исполнительный вице-президент по продажам и маркетингу LADA Ян Птачек подчеркнул, что новинки московского автосалона органично дополняют линейку автомобилей LADA нового поколения, несущих в себе яркий дизайн и новые ценности бренда. «Сегодня LADA – это смелый и яркий дизайн, уверенность во всех ситуациях, лучшее качество и оснащение по доступной цене. Наши покупатели оценили изменения, которые произошли за последние три года – сегодня LADA занимает рекордную за последние семь лет долю рынка в 20%», – отметил Ян Птачек.
Наибольшего внимания публики удостоился концептуальный внедорожник LADA 4х4 VISION. Директор по дизайну LADA Стив Маттин заявил, что развитие бренда и продуктового портфеля не останавливается. «Мы готовим будущее LADA. С 4×4 VISION мы демонстрируем потенциал уникального, выразительного, смелого и энергичного дизайна в новом внедорожнике, черпая вдохновение в легендарном LADA 4×4», – заявил он.
Президент АВТОВАЗа Ив Каракатзанис в своем выступлении на открытии стенда LADA особо отметил, что яркие новинки, изменения бренда и лидерство LADA на российском рынке обеспечивают стабильность на заводах АВТОВАЗа в Тольятти и Ижевске. «Мы будем и дальше развивать наши производственные площадки, адаптировать и интегрировать лучшие международные технологии и процессы, развивать социальную политику. Мы сделаем все, чтобы поставить предприятия АВТОВАЗа в один ряд с лучшими заводами Альянса по всему миру», – подчеркнул Ив Каракатзанис.
LADA 4х4 VISION
LADA 4х4 VISION создан на особой платформе длиной 4,2 м. Выдающиеся показатели дорожного просвета, короткие свесы, экстремальные углы въезда и большие колеса усиливают геометрию настоящего внедорожника.
Расположенная за рулевым колесом основная комбинация приборов имеет X-образную форму, информация передается при помощи легко считываемой графики. Центральный экран с набором онлайн- и офлайн-сервисов помогает преодолевать любые препятствия.
21-дюймовые колеса придают концепт-кару спортивные пропорции и обеспечивают значительный дорожный просвет. Оригинальные 5-спицевые двухцветные диски поддерживают брутальный облик LADA 4х4 VISION.
LADA 4х4 VISION является ярким примером высокотехнологичного автомобиля, обеспечивающего своих пассажиров полным набором цифровых систем для передвижения по бездорожью.
LADA Granta
Семейство LADA Granta выделяется абсолютно новой передней частью кузова, отражающей принадлежность к автомобилям LADA нового поколения, где передние фары на темной глянцевой подложке органично вписаны в верхнюю часть радиаторной решетки, а X-графика визуально выделена хромированными вставками в форме бумерангов.
На новых LADA Granta модернизирована форма передних сидений, они получили более удобные подголовники и выраженную боковую поддержку. Само сиденье стало возможным настроить по высоте в диапазоне 40 мм.
Новая LADA Granta отличается также более комфортной управляемостью благодаря применению безредукторного электроусилителя с модернизированными калибровками. Для страховки при маневрировании задним ходом на автомобиле установлен парктроник, а для экстренного оповещения – система ЭРА-ГЛОНАСС.
Гамма двигателей мощностью 87, 98 и 106 л.с. позволяет подобрать LADA Granta в соответствии с привычным стилем вождения.
LADA XRAY Cross
Для LADA XRAY Cross разработан яркий и контрастный стиль в оформлении интерьера. В салоне применены оранжевые или черные вставки (в зависимости от комплектации) из пластика и экокожи. Оранжевый цвет использован и в оформлении комбинации приборов. Тема контраста цветов и материалов реализована также в обивке сидений.
Новые настройки шасси LADA XRAY Cross предоставляют уникальные возможности реализовать индивидуальный стиль вождения и снять ограничения вне зависимости от условий движения. Селектор LADA Ride Select, расположенный на консоли панели приборов, предусматривает пять режимов движения: основной ESC ON; режимы Sport; снег, грязь; песок и ESC Off.
Новый автомобиль оснащается двигателем 1.8 л мощностью 122 л.с. и механической коробкой переключения передач. Большие 17-дюймовые колеса и увеличенный до 215 мм дорожный просвет добавляют внушительности внешнему облику новой модели.
LADA Vesta Sport
Спортивный вид автомобиля усилен, в первую очередь, за счет передних крыльев с расширенными колесными арками. Модель получила оригинальные 17-дюймовые колесные диски с низкопрофильной резиной, а также аэродинамические накладки на пороги. Для обеспечения более спортивного поведения машины на дороге ее клиренс был уменьшен на 16 мм и теперь составляет 162 мм.
В LADA Vesta Sport особое внимание уделено комфорту и безопасности. В частности, кресло водителя обладает не только поясничной поддержкой, но и регулируется по высоте, а рулевая колонка может быть настроена по высоте и по вылету. За удовольствие от нахождения за рулем независимо от времени года и погодных условий отвечают электрорегулировка и обогрев боковых зеркал, обогрев ветрового стекла, трехступенчатый подогрев передних сидений, а также датчики дождя и освещенности.
На LADA Vesta Sport установлен форсированный двигатель LADA объемом 1,8 л с перенастроенной системой регулировки фаз газораспределения. Его максимальная мощность увеличена до 145 л.с. Двигатель выполняет нормы токсичности «Евро-5». Кроме того, на автомобиле установлена 5-ступенчатая МКПП Альянса Renault – Nissan с тросовым механизмом переключения.
LADA Vesta Cross
На LADA Vesta Cross применены конструктивные решения, хорошо зарекомендовавшие себя на LADA Vesta SW Cross: энергоемкая подвеска, высокая проходимость и острая управляемость. Увеличенный клиренс, который составляет 203 мм, повышает практичность и проходимость седана.
В пробеге представлена LADA Vesta Cross седан с мотором 1,8 л (122 л.с.) и механической коробкой передач. Особенность силового агрегата в том, что на нем применена наиболее современная прошивка контроллера двигателя, что позволило улучшить характеристики мотора и повысить динамику автомобиля. Кроме того, для LADA Vesta Cross предусмотрено еще два варианта комбинации силовых агрегатов и коробок: 1,6 л (106 л.с.) с МКПП и 1,8 л (122 л.с.) + АМТ.
Высокая степень безопасности – важная особенность семейства LADA Vesta. На каждом седане LADA Vesta Cross есть система контроля устойчивости ECS, фронтальные подушки безопасности водителя и пассажира, три задних подголовника, боковые подушки безопасности, ремни безопасности водителя и переднего пассажира с преднатяжителямии ограничителями нагрузки, система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС.
Lada Niva 4×4 урбан 2021 обзор, комплектации и цены, характеристики
Обзор LADA 4×4 Urban 3 дв.
LADA 4×4 Urban. Создана для приключений
Трудные дорожные условия. Теснота городских кварталов. Бескрайние поля и лесные тропинки… Это среда обитания LADA 4х4, она была, есть и будет. Именно поэтому LADA 4х4 входит в число самых легендарных автомобилей мира, вызывающих восхищение миллионов людей.
Отличное сочетание компактности, проходимости и комфортной цены – это делает LADA 4х4 необыкновенно популярной. Сохраняя выдающие внедорожные свойства и узнаваемый стиль, мы сделали автомобиль более комфортным, более функциональным и безопасным.
Добро пожаловать в мир LADA 4х4! Мир, в котором для вас открываются совершенно новые возможности!
Новая эргономичная панель приборов. Увеличенный вещевой ящик, а главное – более удобная система управления отоплением и вентиляцией с тремя вращающимися рукоятками и электроприводом заслонок отопителя.
Система экстренного оповещения обязательна для современных автомобилей.
Более комфортные передние кресла получили развитую боковую поддержку и новый механизм складывания.
Новый интерьер
Цельноформованная обивка потолка, новые сиденья и панель приборов – современные стилевые решения идеально вписались в классический облик LADA 4х4.
Улучшенная шумоизоляция
Модернизированные опоры силового агрегата снизили уровень вибраций, а кроме того, на панели кузова и защиту моторного отсека наклеены дополнительные шумо-виброгасящие элементы.
Комплектации и цены
| Индикация незастегнутого ремня безопасности водителя | ||
| Крепления для детских сидений ISOFIX | ||
| Корректор света фар гидравлический | ||
| Дневные ходовые огни | ||
| Переносная пепельница | ||
| Обивка сидений тканевая | ||
| Инструмент водителя: домкрат, ключ комбинированный колесный, буксирная проушина | ||
| Дополнительная виброизоляция | ||
| Гидроусилитель рулевого управления | ||
| Легкая тонировка стекол | ||
| Электростеклоподъемники передних дверей | ||
| Подогрев передних сидений | ||
| Электропривод и обогрев наружных зеркал | ||
| Кондиционер | ||
| Точки крепления прицепного устройства | ||
| Колеса литые 16» | ||
| Запасное колесо штампованное полноразмерное 16» | ||
Характеристики
| Колесная формула / ведущие колеса | ||
| Расположение двигателя | ||
| Тип кузова / количество дверей | ||
| Длина / ширина / высота, мм | ||
| База, мм | ||
| Колея передних / задних колес, мм | ||
| Дорожный просвет, мм | ||
| Объем багажного отделения в пассажирском / грузовом… | ||
| Тип двигателя | ||
| Система питания | ||
| Количество, расположение цилиндров | ||
| Рабочий объем, куб. см | ||
| Максимальная мощность, л.с. / кВт / об. мин. | ||
| Максимальный крутящий момент, Нм / об. мин. | ||
| Топливо | ||
| Максимальная скорость, км/ч | ||
| Время разгона 0-100 км/ч, с | ||
| Городской цикл, л/100 км | ||
| Загородный цикл, л/100 км | ||
| Смешанный цикл, л/100 км | ||
| Снаряженная масса, кг | ||
| Полная масса, кг | ||
| Объем топливного бака, л | ||
| Допустимая полная масса буксируемого прицепа с… | ||
| Допустимая полная масса буксируемого прицепа без… | ||
| Тип трансмиссии | ||
| Передаточное число главной пары | ||
| Передняя | ||
| Задняя | ||
Фотографии
Экстерьер
Интерьер
Руководства по эксплуатации
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 26.10.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 07.07.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 03.06.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 24.03.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 02.03.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 20.01.20
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 05.12.19
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 04.09.19
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 04.06.19
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 07.09.18
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 08.06.18
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 30.05.18
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 28.12.17
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 08.06.17
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 13.03.17
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 31.01.17
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 18.01.17
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 23.12.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 26.09.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 26.05.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 18.04.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 07.04.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 03.02.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 25.01.16
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 02.02.15
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 12.12.14
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 05.08.14
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 12.09.11
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 16.08.10
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 25.06.08
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 16.10.07
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 10.10.07
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 15.05.07
Руководство по эксплуатации LADA 4х4 от 22.02.07
(PDF) Метод компьютерного зрения для поиска аппликатуры гитариста
8. ВЫВОДЫ
Существуют разные стратегии для получения информации о пальцах, но на самом деле ни одна из них не может предоставить решение, которое
уважало бы намерения и естественность музыканта с Достаточно
Достаточная точность и прецизионность. В этой статье
рассматриваются новые стратегии захвата пальцев гитаристов в режиме реального времени
с использованием недорогих видеокамер.Прототип
был разработан для идентификации аккордов и серий нот на основе
слежения за пальцами и распознавания ладов и струн. Он распознает
пальцев, сопоставляя положение кончиков пальцев со струной и сеткой координат
ладов, таким образом не полагаясь на какие-либо знания базы
. Результаты прототипа обнадеживают и открывают
возможностей для изучения многих аспектов инструментального жеста гитариста, а именно сегментации жеста, античных
паторных движений и бимануальной синхронизации.Приложения
этого исследования включают автоматический перевод аккордов
, музыкальное образование, автоматическое создание музыки
и физическое моделирование.
9. БЛАГОДАРНОСТИ
Исследование по отслеживанию пальцев было проведено в лаборатории InfoMus-
oratory, DIST, Universit´
a degli studi di Genova и было
при частичной финансовой поддержке из фонда Qu´
ebec Gov-
ernment (PBCSE), Министерство иностранных дел Италии,
и EU 6 FP IST ENACTIVE Network of Excel-
lence.Первый автор хотел бы поблагодарить всех студентов
и сотрудников лаборатории InfoMus, которые «протянули руку» для проведения тестов
. Особая благодарность Барбаре Маз-
зарино, Джиневре Кастеллано за ее помощь в составлении результатов
, Гуальтьеро Вольпе за его вклад в разработку
блоков EyesWeb. Анн-Мари Бернс
также хотела бы поблагодарить Антонио Камурри за то, что он принял ее как
, студента-исследователя, проходящего стажировку.
Авторы выражают благодарность гитаристам, которые участвовали в тестах par-
: Жан-Марку Джуно, Риккардо Касацца,
и Бертрану Шереру. благодарим также г-на Дональда Павласека,
Электротехника и компьютерная инженерия, Университет Макгилла,
за концепцию и внедрение крепления камеры gui-
tar.
10. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
[1] А. П. Баадер, О. Казенников, М. Визендангер.
Согласование смычков и пальцев в игре на скрипке —
ing.Когнитивные исследования мозга, 23: 436–443, 2005.
[2] A.-M. Бернс и Б. Маццарино. Отслеживание пальца
методов с использованием eyesweb. В S. Gibet, N. Courty и
J.-F. Kamp (Eds)., Gesture Workshop 2005 Proceed-
ings, LNAI 3881, страницы 156–167, 2006.
[3] Дж. А. Кэнни. Вычислительный подход к распознаванию кромок.
tection. , IEEE Transaction on Pattern Analysis and
Machine Intelligence, 8 (6): 679–698, 1986.
[4] Р. О. Дуда и П.Э. Харт. Использование преобразования hough
для обнаружения линий и кривых на изображениях.
Сообщения ACM, 15 (1): 11–15, январь
1972 г.
[5] К. К. Энгель, М. Фландерс и Дж. Ф. Сочтинг. Anit-
последовательное и последовательное управление двигателем при игре на фортепиано
ing. экспериментальное исследование мозга, 113: 189–199,
1997.
[6] А. Джилардино. Il проблема della diteggiatura nelle
musiche per chitarra. Ил ”Фронимо”, 10: 5–12, 1975.
[7] А. Джилардино. Il проблема della diteggiatura nelle
musiche per chitarra. Il ”Fronimo”, 13: 11–14, 1975.
[8] К. Хемми. О методе детектирования кончиков пальцев с помощью кругового преобразования Хафа. В Pro-
ceeding 5-й Азиатско-Тихоокеанской конференции по Con-
тролли и измерения, 2002.
[9] П. В. К. Хаф. Метод и средства распознавания
сложных образов. Патент США, 3069654, 1962.
[10] H.Койке, Ю. Сато, Ю. Кобаяши. Интеграция бумажной и цифровой информации
в расширенный рабочий стол: метод
для отслеживания пальца в реальном времени в расширенной настольной системе
. Транзакция ACM на компьютере —
Взаимодействие с человеком, 8 (4): 307–322, 2001.
[11] Дж. Летесье и Ф. Брэрд. Визуальное слежение за голым пальцем —
штук для интерактивных поверхностей. Семнадцатый год
Симпозиум ACM по программному обеспечению пользовательского интерфейса и технологии
, 6 (2): 119–122, 2004.
[12] С. Пашалакис и П. Ли. Распознавание образов в серых изображениях уровня
с использованием инвариантных моментов.
Обработка изображенийи ее приложения. Конференция IEE —
ence Publication, 465: 245–249, 1999.
[13] В. И. Павлович, Р. Шарма и Т. С. Хуанг. Visual
интерпретация жестов рук для взаимодействия человека и компьютера
: обзор. IEEE Transactions on Pattern
Analysis and Machine Intelligence, 19 (7): 677–695,
1997.
[14] Д. Радичони, Л. Ансельма и В. Ломбардо. Прототип
на основе сегментации для вычисления строкового ввода
инструментов. В материалах конференции по междисциплинарному музыковедению,
, Грац, 2004.
[15] К. Траубе. Междисциплинарное исследование тембра
классической гитары. Кандидатская диссертация, Университет Макгилла,
,, 2004.
,[16] К. Траубе и Дж. О. Смит III. Оценка щипка —
точки на гитарной струне.В Proceedings of
the COST G-6 Conference on Digital Audio Effects,
Verona, Italy, 2000.
[17] Дж. А. Вернер. Синтез миди-гитары вчера, сегодня
,и завтра. обзор всей фишки
. Recording Magazine, 8 (9): 52–57, 1995.
Статистика фотонов в сенсибилизированной эмиссии FRET и FLIM: сравнительный теоретический анализ
% PDF-1.7 % 1 0 объект > / Метаданные 4 0 R / Страницы 2 0 R / StructTreeRoot 3 0 R / Тип / Каталог / Средство просмотра Предпочтения 5 0 R >> эндобдж 4 0 obj > поток Microsoft® Word для приложения Office 365 / pdf
? l ګ C vr8M މ} x ݴ ~] R.bΫ’І! ++ sK ݕ {-] G ~ T8ȿ6hI? [r TQBG4} O!? WUaT1˟lf V> UU (> на ꎘ # 8- ε ڮ_ v: t% | f «OEm-xVJsM $ h% U%
Molecules | Free Full-Text | Advanced Fluorescence Microscopy Techniques — FRAP, FLIP, FLAP, FRET and FLIM
1.2 .1. Общие концепции
Первые флуоресцентные микроскопы были разработаны в начале 20 века. В 1904 году Август Кёлер сконструировал микроскоп с ультрафиолетовым (УФ) освещением на Zeiss Optical Works в Йене, Германия, в котором он использовал кадмиевую дуговую лампу. как источник света.Однако именно Оскар Хеймштадт в 1911 году разработал первый рабочий флуоресцентный микроскоп, с помощью которого он изучал автофлуоресценцию в органических и неорганических соединениях [17]. Тем не менее, эти ранние флуоресцентные микроскопы имели несколько недостатков, включая тот факт, что источники света в то время не обладали достаточной мощностью, чтобы возбуждать флуорохромы с достаточно высокой скоростью, и что было трудно добиться эффективного разделения сигнала флуоресценции от возбуждающего света. Чтобы получить достаточный сигнал, Хаймштадту пришлось полагаться на темнопольное освещение, которое гарантировало, что только ограниченное количество возбуждающего света попадет в линзу объектива, но это был технически сложный метод и, конечно, не подходил для развития флуоресцентной микроскопии как основного инструмента. .Изобретение в 1929 году Филиппом Эллингером и Августом Хиртом эпифлуоресцентного микроскопа стало важным шагом на пути к достижению этой цели.Рисунок 5. Анатомия флуоресцентного микроскопа с эпи-освещением.
Рисунок 5. Анатомия флуоресцентного микроскопа с эпи-освещением.
В этой конфигурации освещение и обнаружение происходит с одной стороны образца (рис. 5), тем самым гарантируя, что только отраженный возбуждающий и излучаемый свет достигает объектива, что приводит к значительному улучшению отношения сигнал / шум.В 1930-х годах австриец Макс Хайтинген и другие разработали технику «вторичной флуоресценции», при которой образцы систематически окрашивались флуоресцентными красителями, первоначально просто для того, чтобы сделать слабые аутофлуоресцентные биологические образцы лучше видимыми. Хайтинген также был первым, кто ввел слово «флуорохром» для обозначения этих флуоресцентных красителей. В начале 1940-х годов Альберт Кунс разработал метод мечения антител флуоресцентными красителями [18]. Это был прорыв, поскольку он позволил специфически маркировать белки и субклеточные структуры и, как результат, сделал эти молекулярные структуры видимыми с невиданным ранее контрастом и разрешением.После этих первых экспериментов окрашивание антител флуоресцентными вторичными маркерами стало стандартным методом в биологических и биомедицинских исследованиях, а также в клинической диагностике фиксированных образцов, включая ткани и отдельные клетки. Кроме того, с помощью этих флуорохромов можно добиться значительного увеличения сигнала флуоресценции по сравнению со слабыми автофлуоресцентными эндогенными биологическими видами. Недостаток мощности возбуждения был решен с разработкой лазеров в 1960-х годах, основанных на теоретических основах Эйнштейна в отношении стимулированного излучения [19] Гулдом, Таунсом, Шавлоу и Майманом [20,21].Лазеры предлагали то, чего не могли другие источники света: высокую степень пространственной и временной когерентности, что означает, что ограниченный дифракцией монохроматический и когерентный луч можно сфокусировать в крошечном пятне, достигая очень высокой локальной освещенности. Кроме того, теперь стало возможным эффективно разделять сигналы с помощью подходящих фильтров и дихроичных зеркал (также называемых дихроматическими светоделителями). Последние представляют собой специализированные интерференционные фильтры, которые выборочно пропускают свет в определенном диапазоне длин волн, в то же время отражая волны других длин, если их поместить на световой путь под углом 45 ° (рис. 5).Следующим крупным прорывом, который привел к бурному развитию как инструментов, так и технологий, а также одновременных биологических исследований, было открытие в 1960-х годах, секвенирование и последующая разработка зеленого флуоресцентного белка (GFP) в качестве флуоресцентной метки в 1990-х годах Циеном, Чалфи и Шимомура [22,23,24,25,26,27]. GFP — это белок из 238 аминокислот, который показывает ярко-зеленую флуоресценцию и был впервые выделен из медузы Aequorea victoria. GFP дикого типа 26,9 кДа состоит из β-цилиндрической структуры (рис. 6А), в центре которой находится основная хромофорная составляющая, триплет аминокислот Ser65, Tyr66 и Gly67.Следует отметить, что вся структура полипептида необходима для флуоресценции GFP — хромофор формируется автокаталитически — и что молекулярная структура, окружающая трипептид, влияет на его флуоресцентные свойства. Кроме того, защитный β-цилиндр, окружающий трипептид, обеспечивает стабильность, делает GFP относительно нечувствительным к воздействиям окружающей среды и вызывает физическое отделение от таких видов, как молекулярный кислород. В результате скорость фотообесцвечивания GFP ниже, чем у обычных флуорохромов.Флуоресценция GFP дикого типа (из A. victoria) характеризуется основным пиком возбуждения при 395 нм и второстепенным при 475 нм (рис. 6C), что приводит к ярко-зеленой эмиссии при 509 нм и квантовому выходу 0,77. В тот момент, когда кристаллическая структура была выяснена группами Ремингтона [28] и Филлипса [29], исследователи модифицировали GFP посредством направленного и случайного мутагенеза, среди прочего, чтобы расширить цветовой спектр, сузить пик излучения и улучшить фотостабильность, или для увеличения квантового выхода для конкретной длины волны излучения.Кроме того, были идентифицированы и изолированы многие флуоресцентные белки (FP) других видов, такие как антозойный пуговичный полип Zoanthus (ZsYellow), морской анемон Discosoma (DsRed) или Anemonia majano (AmCyan1), что теперь дает широкий цвет палитра с различной фотостабильностью, чувствительными свойствами, фото-переключением и полезными парами FRET (см. Таблицу 1 и Таблицу 2). Рисунок 6. ( A ) Молекулярная структура и локализация хромофорного трипептида в GFP дикого типа A. victoria.Обратите внимание, что трипептид расположен в центре β-ствола. За прошедшие десятилетия было создано огромное количество генетически усовершенствованных (обозначаемых «E», например, EGFP) и сконструированных FP [27]. ( B ) Анатомия полупроводниковой квантовой точки (КТ), флуоресцентные свойства которой обусловлены шириной запрещенной зоны между материалом внутреннего ядра и оболочкой капсулы. КТ отображают флуоресцентные свойства, зависящие от размера. ( C ) Спектры возбуждения и излучения A. victoria GFP (зеленые линии) и примеры того, как размер влияет на флуоресцентные свойства КТ. Рисунок 6. ( A ) Молекулярная структура и локализация хромофорного трипептида в GFP дикого типа A. victoria. Обратите внимание, что трипептид расположен в центре β-ствола. За прошедшие десятилетия было создано огромное количество генетически усовершенствованных (обозначаемых «E», например, EGFP) и сконструированных FP [27]. ( B ) Анатомия полупроводниковой квантовой точки (КТ), флуоресцентные свойства которой обусловлены шириной запрещенной зоны между материалом внутреннего ядра и оболочкой капсулы.КТ отображают флуоресцентные свойства, зависящие от размера. ( C ) Спектры возбуждения и излучения A. victoria GFP (зеленые линии) и примеры того, как размер влияет на флуоресцентные свойства КТ. В последние годы было внесено множество генетических модификаций в FP из различных источников, которые были обозначены в соответствии с соответствующими цветами фруктов, такими как mCherry или mBanana, диапазон которых представлен в качестве примера на рисунке 6A, а выбор этих FP и их свойств представлен перечислены в таблице 1.Развитие технологии FP было настолько значительным, что открыло двери для совершенно новых способов выполнения флуоресцентной визуализации живых клеток [23], особенно потому, что теперь стало возможным адаптировать свойства флуоресцентной метки с помощью генной инженерии и маркировать белки путем экспрессии флуоресцентного слияния. строит непосредственно в живых клетках. Наконец, следует отметить, что в литературе FP часто называют «аутофлуоресцентными белками». Хотя это строго правильно, такую классификацию не следует путать с аутофлуоресценцией эндогенных клеточных биомолекул, обсуждавшейся ранее (см. Выше).Дополнительные инновации в области маркировки пришли из совершенно другой научной дисциплины, которая сочетает в себе нано- и биотехнологии. Быстрое развитие бионанотехнологии за последние десятилетия привело к разработке люминесцентных наночастиц с исключительными физическими и химическими свойствами, недоступными для других флуорохромов. Квантовые точки (КТ), например, представляют собой неорганические полупроводниковые наночастицы, состоящие из конфигурации ядро-оболочка, создающей спектральную запрещенную зону, например, КТ CdSe / ZnS, как схематично изображено на рисунке 6B.Размер этой запрещенной зоны определяет флуоресцентные свойства КТ, и, таким образом, излучение КТ может быть напрямую настроено по их размеру (рис. 6В) или, лучше сказать, физическому размеру запрещенной зоны (энергия запрещенной зоны обратно пропорциональна квадрату размера квантовой точки) [30,31,32]. На практике это означает, что чем меньше КТ, тем синее свет. В общем, КТ имеют относительно долгое время жизни, что дает возможность корректировать фоновые сигналы от короткоживущих флуоресцентных частиц с помощью методов временного стробирования [33,34].Кроме того, недавно было показано, что размер КТ также определяет время жизни, которое увеличивается с размером [35]. Поскольку квантовые точки имеют широкий спектр поглощения, один источник света можно использовать для одновременного возбуждения нескольких квантовых точек с разными длинами волн излучения (рис. 6C). Это позволяет использовать как простые дуговые гальванические лампы, так и обычные коммерчески доступные лазеры, такие как аргон-ионные, гелий-кадмиевые и криптон-аргоновые, с лазерными линиями 405 и 488 нм, которые позволяют легко возбуждать квантовые точки, хотя и с разной степенью эффективности.Особенно привлекательно использовать возбуждение в ультрафиолетовой и фиолетовой областях (рис. 6C) с помощью голубых диодных и твердотельных лазеров с диодной накачкой, которые имеют спектральные линии на 375, 405, 442 и 473 нм. Квантовые точки, кроме того, характеризуются рядом дополнительных уникальных свойств [30,31]: (i) КТ примерно в 10–100 раз ярче органических флуорогенных красителей; (ii) в 100–1000 раз более устойчивы к фотообесцвечиванию, поскольку оболочка и различные покрытия образуют физические барьеры, отделяющие возбужденное состояние от окружающих биомолекул и молекулярного кислорода; и (iii) демонстрируют более узкие и более симметричные спектры излучения по сравнению с другими флуорохромами (типичная полная ширина на полувысоте (FWHM) ~ 25-40 нм [36]).Исчерпывающее описание спектральных свойств квантовых точек предоставлено Аливисатосом и Биджу [30,31,37], а отличный обзор того, почему малый размер делает наночастицы такими отличными от объемных материалов, дан Родунером [38].В настоящее время флуоресцентная микроскопия является методом выбора для визуализации живых клеток, и это стандартная процедура для изучения нормальных и патологических клеточных биологических процессов в отдельных клетках, субклеточных компартментах или в популяции клеток путем введения флуорохромов, специально нацеленных на (био) представляющие интерес молекулы.Основные преимущества заключаются в том, что методы флуоресцентной микроскопии предоставляют информацию с пространственно-временным разрешением и, как правило, менее разрушительны по сравнению с другими методами визуализации, например электронной микроскопией (ЭМ).
Таблица 1. Обзор флуоресцентных свойств популярных органических красителей и флуоресцентных белков. Воспроизведено с разрешения. © 2011 Carl Zeiss Micro-Imaging GmbH.
Итак, что же делает флуоресцентную микроскопию таким замечательным и специфическим инструментом для визуализации и анализа клеток и молекул? По сути, это его селективность и повышение контрастности. В то время как селективность достигается преимущественно с помощью упомянутых выше методов маркировки, увеличение контраста реализуется в самом микроскопе. Современные флуоресцентные микроскопы могут максимально улавливать излучаемый флуоресцентный свет, сводя к минимуму улавливание падающего возбуждающего света.Таким образом, одним из основных преимуществ флуоресцентной микроскопии является резкое усиление сигнала от меченых структур и молекул на темном фоне — аналогично звездам на черном ночном небе, которые не видны днем. Контрастность изображения критически зависит от способности микроскопа пропускать флуоресцентный свет на детектор (например, камеру CCD [устройство с зарядовой связью] или фотоэлектронный умножитель [PMT]) при блокировании возбуждающего света. Благодаря его селективности и контрастности, не только тонкие клеточные и субклеточные структуры, но даже отдельные молекулы могут быть видны в флуоресцентном микроскопе.Если они пространственно хорошо разделены и, следовательно, не слишком близко друг к другу или не загораются одновременно, локализация отдельных молекул возможна, но дифракция ограничена, как установлено Эрнстом Аббе (см. §1.2.2).
В каждом световом микроскопе, независимо от типа, присутствуют три основных компонента: (i) источник освещения; (ii) увеличительную линзу; и (iii) устройство получения изображения. Классический широкоугольный световой микроскоп в проходящем свете обычно состоит из лампы белого света или светодиода (LED), который освещает образец целиком, системы выпуклых линз и человеческого глаза в качестве детектора.И наоборот, в широкоугольном флуоресцентном микроскопе источник белого света заменяется лампой высокой мощности (источником ртути или ксенона), которая возбуждает флуорохромы в флуоресцентно меченом образце и индуцирует излучение флуоресценции, как схематично показано на рисунке 5. Изображения являются обычно получают визуально или электронным способом с помощью камеры CCD. Как описано выше, флуорохромы имеют характерные спектры возбуждения. Таким образом, соответствующий фильтр возбуждения, обычно полосовой фильтр (BP), помещается между лампой и образцом для сужения диапазона длин волн света, достигающего образца, до такой степени, что используемые флуорохромы возбуждаются эффективно, тогда как нежелательное возбуждение сводится к минимуму.Поскольку излучаемый свет имеет более длинную волну, чем свет возбуждения, фильтр излучения (либо длиннопроходный [LP], либо фильтр BP), помещенный между образцом и детектором, эффективно блокирует свет возбуждения и предотвращает искажение окончательного изображения. Для успешного возбуждения флуоресценции необходим интенсивный свет. Лазеры обычно излучают свет высокой интенсивности и зарекомендовали себя как превосходный источник возбуждения, альтернативный ртутным и ксеноновым лампам. Соответственно, в настоящее время в конфокальной и многофотонной лазерной сканирующей микроскопии широко используются лазеры для точечного освещения образца.Поскольку лазеры являются источником монохроматического света, обычно фильтр возбуждения не требуется. Тем не менее, эмиссионный фильтр или альтернативное устройство спектральной селекции все еще необходимы, чтобы не допустить попадания возбуждающего лазерного света на детектор и настроиться на эмиссионный сигнал флуорохрома, особенно в экспериментах по множественной маркировке. В случае конфокального лазерного сканирующего микроскопа ртутная лампа заменяется набором соответствующих лазеров, которые позволяют возбуждать различные флуорохромы, фильтры возбуждения удаляются, а камера обнаружения заменяется фотоэлектронным умножителем [39,40, 41].Лихтман и Кончелло недавно опубликовали хорошее и краткое введение в флуоресцентную микроскопию [42], в то время как более подробные обзоры можно найти в справочнике Pawley [39].1.2.2. Разрешение в флуоресцентной микроскопии
В флуоресцентной микроскопии оптическая разрешающая способность определяет количество деталей, наблюдаемых в образце, что, в свою очередь, определяется рядом физических факторов и ограничений прибора. Если свет попадает на небольшой наблюдаемый объект, направление падающего света изменяется (дифракция), и это отклонение увеличивается с уменьшением размера объекта.Для получения резких изображений объектив должен улавливать как можно больше отклоненного света, что достигается за счет широких угловых отверстий (апертуры). Эрнст Аббе первым определил числовую апертуру (NA) [43], которая определяет светозахватывающую способность объектива и может быть математически записана как: (5) где n — показатель преломления среды между объектом и объективом (n = 1 для воздуха и иммерсионного масла n = 1,51), а α — половина угла раскрытия объектива (рисунок 7A).Чтобы максимально уловить отраженный свет и увеличить разрешение, можно использовать несколько стратегий, включая использование конденсорной линзы для освещения, чтобы расширить угол лучевого конуса на стороне освещения и / или использовать иммерсионную жидкость между линзами объектива. и покровное стекло, которое устраняет отражения, которые обычно снижают разрешающую способность. В воздухе теоретически NA = 1 может быть достигнуто при α = 90 °, но на практике значения N.A. выше 0,95 не могут быть достигнуты. И наоборот, с иммерсионным маслом N.A. Значения больше 1 могут быть легко достигнуты, и поэтому использование масляных иммерсионных объективов — единственный способ увеличить увеличение при достаточном разрешении и контрасте. Так что же такое разрешение или оптическая разрешающая способность? Для определения концепции разрешения требуется введение нескольких параметров и концепций. Прежде всего, важно понимать, что во флуоресцентной микроскопии разрешение не зависит напрямую от увеличения. Во-вторых, разрешение и контраст — это два взаимно взаимосвязанных параметра, которые важны для флуоресцентной микроскопии и не должны рассматриваться как отдельные объекты.Интуитивно становится ясно, что когда контраст приближается к нулю, было бы бесполезно обсуждать оптическое разрешение. Как указывалось ранее, отдельные объекты в образце вызывают дифракцию света, и в результате освещенный точечный источник внутри образца наблюдается как яркое центральное пятно (диск Эйри) с окружающими дифракционными кольцами (рисунок Эйри), как показано на рисунке 7. Это был Джордж Бидделл Эйри, который первым теоретически описал это явление [44] в 1835 году, хотя другие ранее наблюдали его экспериментально.Как правило, можно предположить, что оптические микроскопы являются линейными и инвариантными к сдвигу, что означает, что изображение образца по существу состоит из линейной суперпозиции всех отдельных элементов образца, что приводит к окончательному изображению, например, ячейке со всеми ее элементами. меченые компоненты и органеллы. Функция рассеяния точки интенсивности (PSF) характеризует такую систему, а диаграмма Эйри по существу представляет собой распределение интенсивности PSF интенсивности в фокальной плоскости (x – y). Комбинирование PSF в поперечном (x – y) и осевом (x – z) направлениях (см. Рисунок 7B) создает сложную трехмерную форму, трехмерную PSF, которая характеризует реакцию всей оптической системы, линз, зеркал, оптические апертуры, а также дефекты или несовпадения оптической системы с освещенным точечным источником и дифракция, вызываемая этими элементами и объектом. Рисунок 7. ( A ) Объектив и путь светового луча: точечный источник в фокальной плоскости отображается и проецируется как яркое центральное пятно (диск Эйри) и узор из концентрических колец (узор Эйри), возникающий в результате дифракции. ( B ) Расчетные распределения интенсивности x-y (вверху) и x-z (внизу) (логарифмическая шкала) для точечного источника, изображения которого получены с помощью различных микроскопических методов. Оптические условия: λ ex = 488 нм и 900 нм для 1PE и 2PE соответственно; λ em = 520 нм; Н.A. = 1,3 для масляного иммерсионного объектива со значением показателя преломления масла 1,515. Воспроизведено из [45]. © 2006 БиоМед Централ. ( C ) Принципиальная схема дифракционной картины на диске Эйри: дифракционный предел Аббе, контраст и оптическое разрешение. Рисунок 7. ( A ) Объектив и путь светового луча: точечный источник в фокальной плоскости отображается и проецируется как яркое центральное пятно (диск Эйри) и узор из концентрических колец (узор Эйри), возникающий в результате дифракции.( B ) Расчетные распределения интенсивности x-y (вверху) и x-z (внизу) (логарифмическая шкала) для точечного источника, изображения которого получены с помощью различных микроскопических методов. Оптические условия: λ ex = 488 нм и 900 нм для 1PE и 2PE соответственно; λ em = 520 нм; N.A. = 1,3 для масляного иммерсионного объектива со значением показателя преломления масла 1,515. Воспроизведено из [45]. © 2006 БиоМед Централ. ( C ) Принципиальная схема дифракционной картины на диске Эйри: дифракционный предел Аббе, контраст и оптическое разрешение.По сути, разрешение можно определить как наименьшее расстояние между двумя точками в образце, которое все еще можно различить как отдельные точки (рисунок 7C) при конкретном контрасте, который с помощью уравнения 5 можно записать как: (6) Контраст определяется как разница между максимальной интенсивностью и минимальной интенсивностью, возникающая в пространстве между двумя объектами равной интенсивности (диски Эйри; контраст = 1) [46,47]. Когда два точечных объекта хорошо разделены, минимум контраста между ними близок к нулю, и объекты можно различать (они разрешены), как показано на рисунке 7C (зеленый).Однако, когда точечные объекты приближаются и их PSF начинают перекрываться, минимум интенсивности между двумя максимумами объектов уменьшается до тех пор, пока объекты не перестанут разрешаться (рис. 7C, красный). Несмотря на то, что эта формулировка близко соответствует практической микроскопии, обычно используется критерий Рэлея для разрешения, который гласит, что две точки разрешаются, когда первый минимум одного диска Эйри совмещен с центральным максимумом второго диска Эйри. Из вышеупомянутых соображений становится очевидным, что чем меньше образец Эйри (рис. 7В), тем выше разрешение, тем больше деталей можно получить на изображении (сравните широкопольную и конфокальную микроскопию на рис. 8).Именно Эрнст Аббе в 1873 году теоретически заложил основу для описания дифракционного предела, который привел к формулировке уравнения 6. Он описал, что наименьшее разрешаемое расстояние между двумя точками при использовании обычного светового микроскопа не может быть меньше половины длины волны изображения. свет [48]. Следовательно, увеличение разрешения может быть достигнуто только в том случае, если длина волны используемого света будет как можно меньше. Таким образом, если используется длина волны 400 нм, которая все еще находится в диапазоне, пригодном для использования в биологической визуализации, приблизительное латеральное разрешение 200 нм становится возможным.Однако по сравнению с размером отдельной животной клетки (10–100 мкм), вирусов (20–200 нм) и органелл (500–10 мкм) это все еще не позволяет достичь достаточного разрешения. Дальнейшее уменьшение длины волны до ультрафиолета вызывает значительный ущерб биомолекулам, а визуализация живых клеток серьезно влияет и изменяет нормальную клеточную функцию и гомеостаз. Следовательно, измеренные результаты искажены, и оценка биологической функции не может быть выполнена с достаточной точностью, и, таким образом, результаты могут быть ошибочными с научной точки зрения.1.2.3. Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM)
Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM) — это метод, сочетающий оптическое отображение высокого разрешения с избирательностью по глубине [39]. Первоначальная методика использовала конфокальную оптическую систему со сканированием сцены и была изобретена Марвином Мински в 1957 году [49]. По сути, CLSM основан на обычном оптическом микроскопе, в котором вместо лампы на образец фокусируется лазерный луч, а изображение создается попиксельно путем сбора излучаемых фотонов, обычно с помощью ФЭУ.Таким образом, CLSM сочетает в себе точечное освещение с одновременным точечным обнаружением (рис. 9), а освещение и обнаружение ограничиваются одной точкой с ограничением дифракции. Ключевой особенностью CLSM является его способность получать хорошо сфокусированные изображения с различной глубины в пределах образца; процесс, называемый «оптическим сечением». Изображения среза кишечника мыши на рис. 8 заметно демонстрируют увеличение разрешения при визуализации CLSM по сравнению с обычными широкопольными изображениями. Это достигается за счет размещения небольшой апертуры с точечным отверстием перед детектором (рис. 9В), которая предотвращает излучение вне поля фокусировать свет от плоскостей выше и ниже фокальной плоскости, а также рассеянный свет от детектора.Рисунок 8. Конфокальная микроскопия в сравнении с широкопольной микроскопией. Широкоугольное ( A ) и конфокальное ( B ) изображение агрегата клеток с тройной меткой (срез кишечника мыши). На широкоугольном изображении плоскости образца за пределами фокальной плоскости ухудшают интересующую информацию из фокальной плоскости, и детали образца, окрашенные по-разному, отображаются в смешанном цвете. На конфокальном изображении ( B ) детали образца, размытые на широкоугольном изображении, становятся отчетливо видимыми, а контрастность всего изображения значительно улучшается.Обратите внимание, что расфокусированные сигналы на широкоугольном изображении вызывают появление дополнительных структур (белое поле). Воспроизведено с разрешения. © 2011 Carl Zeiss Micro-Imaging GmbH.
Рисунок 8. Конфокальная микроскопия в сравнении с широкопольной микроскопией. Широкоугольное ( A ) и конфокальное ( B ) изображение агрегата клеток с тройной меткой (срез кишечника мыши). На широкоугольном изображении плоскости образца за пределами фокальной плоскости ухудшают интересующую информацию из фокальной плоскости, и детали образца, окрашенные по-разному, отображаются в смешанном цвете.На конфокальном изображении ( B ) детали образца, размытые на широкоугольном изображении, становятся отчетливо видимыми, а контрастность всего изображения значительно улучшается. Обратите внимание, что расфокусированные сигналы на широкоугольном изображении вызывают появление дополнительных структур (белое поле). Воспроизведено с разрешения. © 2011 Carl Zeiss Micro-Imaging GmbH.
В обычной широкоугольной микроскопии такие сигналы вызывают блики, искажения и размытость изображения, и эти артефакты все вместе называются «сверткой».Несмотря на то, что небольшое улучшение как в осевом, так и в поперечном разрешении (обратите внимание на центральные максимумы на рисунке 7B) достигается при использовании методов широкого поля, устранение интерференции расфокусированного и рассеянного света с сигналом в фокусе и значительное уменьшение на дифракционной картине (рис. 7В) вызывают значительное увеличение разрешающей способности. Фокусная точка в образце и точечное отверстие лежат в сопряженных плоскостях, как показано на рисунке 9В, и такое оптическое расположение фокальных точек называется «конфокальным».Обратите внимание на разницу в путях прохождения света через флуоресцентный микроскоп с широким полем на рис. 9. Чем меньше точечное отверстие, тем меньше света из расфокусированных областей в образце достигает детектора, тем ниже интенсивность изображения. Во время сканирования с определенной фокусировкой по оси z (осевое направление) и боковым перемещением (оси x и y) элемент конфокального объема перемещается через образец посредством последовательности плоскостей объекта. Таким образом, можно получить оптические сечения образца и восстановить его трехмерную структуру.В приложениях для получения биологических изображений, будь то отдельные клетки, ткани или интактные модельные организмы, CLSM доказала свою эффективность за последние тридцать лет и одновременно произвела впечатляющие новые научные открытия, в частности, благодаря своей способности оптического сечения и возможности трехмерной реконструкции из стек отдельных секций. Кроме того, преимущество этого метода заключается в его нелинейном поведении, поскольку метод чувствителен к квадрату интенсивности света, а не только к интенсивности света.Это в сочетании с увеличением контраста за счет отсечения нежелательных сигналов от плоскостей вне фокуса, что приводит к более резким изображениям с лучшим z-разрешением (рис. 8), явно дает преимущество перед широкоугольным микроскопом [50,51].Рисунок 9. В конфокальной микроскопии ( B ) концепция освещения образца возбуждающим светом (например, синим светом) и образец, излучающий свет с большей длиной волны (например, зеленый свет), идентичны общим принципам флуоресценции в широкопольной микроскопии. ( А ).Отличия от широкоугольной микроскопии заключаются в следующем: (i) возбуждающий лазерный свет сканируется по образцу, и излучаемый свет исходит из этой области; (ii) на пути детектирующего луча отверстие-торец перед детектором предотвращает попадание света, излучаемого сверху или снизу фокальной плоскости (пунктирные линии), на детектор; и (iii) поскольку только свет из фокальной плоскости (сплошная линия) достигает детектора, создается оптическая секция. ( C ) В двухфотонной микроскопии высокий поток возбуждающих фотонов от импульсного лазера вызвал одновременное поглощение 2 длинноволновых фотонов и испускание фотона с более короткой длиной волны (антистоксово).Поскольку возбуждение ограничено небольшим фемтолитровым фокальным объемом, эмиссия вне фокуса незначительна и, следовательно, не требуется точечное отверстие.
Рисунок 9. В конфокальной микроскопии ( B ) концепция освещения образца возбуждающим светом (например, синим светом) и образец, излучающий свет с большей длиной волны (например, зеленый свет), идентичны общим принципам флуоресценции в широкопольной микроскопии. ( А ). Отличия от широкоугольной микроскопии заключаются в следующем: (i) возбуждающий лазерный свет сканируется по образцу, и излучаемый свет исходит из этой области; (ii) на пути детектирующего луча отверстие-торец перед детектором предотвращает попадание света, излучаемого сверху или снизу фокальной плоскости (пунктирные линии), на детектор; и (iii) поскольку только свет из фокальной плоскости (сплошная линия) достигает детектора, создается оптическая секция.( C ) В двухфотонной микроскопии высокий поток возбуждающих фотонов от импульсного лазера вызвал одновременное поглощение 2 длинноволновых фотонов и испускание фотона с более короткой длиной волны (антистоксово). Поскольку возбуждение ограничено небольшим фемтолитровым фокальным объемом, эмиссия вне фокуса незначительна и, следовательно, не требуется точечное отверстие.
1.2.4. Многофотонная флуоресцентная микроскопия
Многофотонная флуоресцентная микроскопия похожа на CLSM в том, что в обеих используются сфокусированные лазерные лучи для сканирования образца в растровом шаблоне (точка за точкой) для создания изображений, и обе имеют возможность оптического сечения.В отличие от конфокальных микроскопов, в которых возможность оптического сечения создается на пути излучения света, в многофотонном микроскопе возможности сечения возникают на стороне возбуждения из-за необычного способа возбуждения флуорохромов. Концепция многофотонного возбуждения (MPE) была впервые теоретически описана Марией Гепперт-Майер в 1931 году в ее докторской диссертации [52] и впоследствии экспериментально наблюдалась в 1961 году Кайзером и Гарретом, когда они обнаружили синюю флуоресценцию в CaF 2 : Eu 2+ кристаллов в ответ на красный 0.Импульсный рубиновый лазер 5 мс [53]. Однако именно Винфрид Денк разработал двухфотонную визуализацию для использования в живых клетках и тканях в лаборатории Ватта Уэбба [54]. Много- / двухфотонное возбуждение (TPE) основано на одновременном поглощении двух (или нескольких) фотоны флуорохромами в субфемтолитровом объеме в фокусе (рис. 9C), в котором энергия для возбуждения электрона из основного состояния в возбужденное состояние обеспечивается двумя фотонами с примерно половиной энергии (рис. 10B). Поскольку энергия масштабируется обратно пропорционально длине волны в соответствии с законом Планка (уравнение 1), половина энергии означает удвоенную длину волны возбуждающего фотона при однофотонном возбуждении (сравните рис. 10A, B).Поскольку статистическая вероятность сопутствующего поглощения фотонов чрезвычайно мала, требуются высокие локальные потоки фотонов (от МВт / см 2 до ГВт / см 2 [55]), что стало возможным только с введением фемтосекундной моды. синхронизированные импульсные лазеры. Двухфотонное возбуждение — это нелинейный процесс, поскольку скорость поглощения увеличивается со второй степенью интенсивности возбуждающего света. Как следствие, даже при использовании мощных импульсных лазеров возбуждение ограничивается небольшим объемом в фокальной плоскости образца (см. Схематически на рисунке 9C и в растворе флуоресцеина на рисунке 10), где плотность фотонов достаточно высока. .Практическим результатом этого явления является оптическое сечение без необходимости прокалывания для блокировки флуоресценции в местах, не находящихся в фокусе (рис. 9C). Посредством последующего сканирования этого объема возбуждения через образец можно собрать z-стопки двумерных изображений и реконструировать трехмерные изображения. Дополнительное преимущество ограничения возбуждения флуорохромов таким маленьким объемом в плоскости фокуса значительно снижает общее фотообесцвечивание. Это проиллюстрировано на Фигуре 10, когда пленка формвара, окрашенная флуоресцеином, освещается либо в режиме CLSM, либо в режиме TPE.Картина обесцвечивания на пленке ясно показывает значительное обесцвечивание выше и ниже фокальной плоскости в CLSM, тогда как обесцвечивание ограничивается исключительно фокальной плоскостью в микроскопии TPE. В целом, это значительно снижает фотоповреждения и цитотоксичность, обычно связанные с экспериментами по визуализации флуоресцентных микроскопов, и обеспечивает поддержание почти нормального клеточного гомеостаза. Следовательно, клетки можно наблюдать в течение более длительных периодов времени с меньшим токсическим действием. Еще одно важное преимущество этой технологии состоит в том, что, поскольку большинство флуорохромов возбуждаются в диапазоне 350–550 нм, в TPE можно использовать темно-красный или инфракрасный возбуждающий свет, который проникает намного глубже в образец из-за меньшего рассеяния и поглощения. эндогенными хромофорами.Вариант, двухфотонная автофлуоресцентная микроскопия (2PAM), использует автофлуоресценцию эндогенных биомолекул для оценки болезненных состояний в тканях на основе изменений морфологических, спектральных параметров и параметров времени жизни. Так как, например, толщина клеточного слоя может использоваться в качестве индикатора дисплазии и карциномы, возможности TPE по глубине визуализации особенно важны в 2PAM. Durr et al. определили, что ex-vivo визуализация 2PAM при биопсии человеческого языка возможна на глубине 370 мкм [56].В обычных устройствах лазерного сканирования может быть достигнута только глубина проникновения около 250 мкм. Некоторые исследователи использовали системы регенеративных усилителей с высокой импульсной мощностью [57,58] для увеличения глубины изображения, а Denk et al. сообщили о визуализации на глубине 1000 мкм в мозге живых мышей с использованием регенеративного усилителя Ti: Al 2 O 3 [58]. Рисунок 10. Сравнение профилей возбуждения ( A ) одиночного фотона, ( B ) двухфотонного и ( C ) возбуждения с повышением частоты.Из диаграммы возбуждения света с помощью лазеров 488 и 960 нм (0,16 NA) в кюветах ясно видно, что только при двухфотонном возбуждении ( B ) возбуждающий луч фокусируется в пятно в фокальной плоскости. И наоборот, при однофотонном возбуждении ( A ) дополнительный свет исходит сверху и снизу фокальной плоскости. Нижние рисунки: повторное сканирование в фокальной плоскости (плоскость x-y) на пленке формвар, окрашенной флуоресцеином, показывает, что при двухфотонном возбуждении фотообесцвечивается только фокальная плоскость.Диаграммы Яблонского иллюстрируют различия в поглощении фотонов между различными системами. В TPE два фотона с одинаковой длиной волны должны прибыть одновременно во времени и пространстве, чтобы возбудить электрон. И наоборот, флуорохромы (C) с повышающим преобразованием содержат метастабильные состояния, как в этом примере для ионов европия (III), которые достаточно стабильны, чтобы обеспечить последовательное поглощение длинноволновых фотонов. В результате и TPE, и повышающее преобразование фотонов демонстрируют антистоксовы сдвиги. Частично воспроизведено из [59] с разрешения Macmillan Publishers Ltd: Nature Biotechnology © 2002. Рисунок 10. Сравнение профилей возбуждения ( A ) одиночного фотона, ( B ) двухфотонного и ( C ) возбуждения с повышением частоты. Из диаграммы возбуждения света с помощью лазеров 488 и 960 нм (0,16 NA) в кюветах ясно видно, что только при двухфотонном возбуждении ( B ) возбуждающий луч фокусируется в пятно в фокальной плоскости. И наоборот, при однофотонном возбуждении ( A ) дополнительный свет исходит сверху и снизу фокальной плоскости.Нижние рисунки: повторное сканирование в фокальной плоскости (плоскость x-y) на пленке формвар, окрашенной флуоресцеином, показывает, что при двухфотонном возбуждении фотообесцвечивается только фокальная плоскость. Диаграммы Яблонского иллюстрируют различия в поглощении фотонов между различными системами. В TPE два фотона с одинаковой длиной волны должны прибыть одновременно во времени и пространстве, чтобы возбудить электрон. И наоборот, флуорохромы (C) с повышающим преобразованием содержат метастабильные состояния, как в этом примере для ионов европия (III), которые достаточно стабильны, чтобы обеспечить последовательное поглощение длинноволновых фотонов.В результате и TPE, и повышающее преобразование фотонов демонстрируют антистоксовы сдвиги. Частично воспроизведено из [59] с разрешения Macmillan Publishers Ltd: Nature Biotechnology © 2002.Увеличенная достижимая глубина визуализации является значительным преимуществом микроскопии TPE по сравнению с обычными методами CLSM. Другие нелинейные методы, такие как микроскопия на основе второй гармоники или использование флуорохромов, которые проявляют свойства преобразования с повышением частоты, также были разработаны для множества биологических приложений. Общим для всех этих методов является то, что их возбуждение и испускание следуют антистоксовым сдвигам, т.е.е. длина волны возбуждения больше длины волны излучения.
Визуализирующая микроскопия второй гармоники (SHIM) основана на нелинейном оптическом эффекте генерации второй гармоники (SHG), при котором лазерный свет фокусируется на образце для генерации света с удвоенной частотой (два фотона с длиной волны λ гаснут, чтобы генерировать одиночный фотон с длиной волны 0,5λ [60,61]). В отличие от ТПЭ, ГВГ не включает возбужденное состояние, и поэтому при релаксации возбужденного состояния не теряется энергия, как в случае ТПЭ.Кроме того, SHG и SHIM предлагают несколько преимуществ при визуализации живых клеток: (i) SHG сохраняет энергию; (ii) сохраняет лазерную когерентность; (iii) не требует маркировки; (iv) поскольку возбужденное состояние не задействовано, фотообесцвечивание и фототоксичность практически отсутствуют; и, наконец, (v) имеет возможность секционирования, потому что в SHG амплитуда пропорциональна квадрату интенсивности падающего света, как в TPE [60,61]. В отличие от TPE, при повышающем преобразовании фотонов свойства хромофора позволяют последовательное поглощение длинных длина волны фотонов.Фундаментальные процессы, участвующие в повышающем преобразовании, сложны и состоят из нескольких конкурирующих процессов, включая последовательную передачу энергии, поглощение возбужденного состояния и фононное взаимодействие (квант колебательной энергии, возникающий из колебаний внутри кристалла) [62,63,64]. Обычно редкоземельные металлы (элементы d- и f-блока), такие как лантаноиды, используются в качестве люминесцентных комплексов с органическими усилителями или в качестве присадок в люминесцентных наночастицах. Менее эффективное преобразование с повышением частоты достигается при использовании актинидов или ионов переходных металлов [62,63].Материалы с повышающим преобразованием часто называют «люминофором с повышающим преобразованием», что может сбивать с толку. Как показано на рисунке 10C, появление метастабильных возбужденных состояний с большим временем жизни в мс-диапазоне устраняет необходимость одновременного прибытия фотонов и, следовательно, высоких локальных потоков фотонов. Для преобразования хромофоров обычная флуоресцентная микроскопическая установка с лазерами малой мощности — интенсивное антистоксово излучение уже возможно ниже 1 Вт / см 2 [64,65] — недорогие детекторы, такие как ФЭУ для счета фотонов, стандартный длинный -проходный фильтр возбуждения и узкополосный фильтр излучения с адекватными возможностями блокировки инфракрасного излучения, как правило, достаточны в качестве приборов.Необычные фотолюминесцентные характеристики материалов, преобразующих с повышением частоты, позволяют: (i) получать изображения на темном фоне, так как преобразование с повышением частоты не происходит в эндогенных клеточных биомолекулах; (ii) при возбуждении N (IR) могут быть достигнуты отличные глубины визуализации; (iii) использование обычных систем визуализации позволяет снизить вложения и затраты, (iv) их фотолюминесцентные свойства относительно нечувствительны к изменениям окружающей среды, таким как pH или поляризуемость растворителя; (v) фотообесцвечивания практически не происходит, и (vi) такие материалы имеют длительный срок хранения.Более подробное обсуждение апконверсии можно найти в ссылках [13,62,63,64,66]. Из приведенных выше соображений быстро становится ясно, что многофотонная флуоресцентная микроскопия является мощным инструментом в биомедицинских исследованиях, который предлагает уменьшение фотообесцвечивания и низкое фотообесцвечивание. — токсичность, более высокая глубина проникновения и более высокое пространственное разрешение по сравнению с другими методами визуализации in vivo. С постоянным развитием новых флуоресцентных белков, многофотонная микроскопия постоянно совершенствуется.Более того, из литературы можно сделать вывод, что в исследованиях биологических наук для решения научных вопросов в настоящее время широко применяются преимущественно двухфотонные методы. Подробное руководство по выбору правильного флуоресцентного белка и длины волны возбуждения для двухфотонных приложений, а также обзор двухфотонных спектральных свойств флуоресцентных белков были недавно представлены Дробижевым и соавт. [67]. Превосходные обзоры по двух- и многофотонной микроскопии, включая обсуждение преимуществ и недостатков, можно найти в [45,47,54,55,59,68,69,70,71].Как сделать самую умную доску Vision
Время чтения: 6 минутПочему так много людей с трудом получают то, что они хотят?
Как бы они ни старались, они застревают в шаблоне, вкладывая много усилий в то, что кажется совершенно бесполезным. Они хотят лучшей жизни или лучших результатов, но этого не происходит.
У этого есть одна глубокая причина; Процитирую американского писателя Ричарда Баха, : «Чтобы внести что-нибудь в свою жизнь, представьте, что это уже есть…»
Итак, в чем дело с Vision Boards?
В последнее время было много шумихи о Vision Boards i.д, Доски с вдохновляющими изображениями и словами, и как они могут помочь вам в достижении ваших целей. Но работают ли они?
Известные люди, использующие доски визуализации
Джим Керри, Эллен Дедженерес и мультимиллионер, основатель Spanx, Сара Блейкли — все приписывают свой успех своим доскам видения. Даже учителя по всему миру начали использовать доски Vision, чтобы привлечь внимание учеников! Но являются ли доски визуализации всего лишь модным инструментом самопомощи, которым выставляют напоказ известные люди, коучи и духовные наставники? Или они являются надежными, научно доказанными средствами, которые позволяют людям воплощать свои мечты в реальность?
(И какое отношение ко всему этому имеет платформа Powtoon для создания презентаций и видео?)
Получите здесь БЕСПЛАТНУЮ учетную запись в классе… и создавайте доски видения для всего класса!
Наука за досками технического зрения
Каждый раз, когда ваш мозг узнает что-то новое, нейроны внутри него создают путь.Больше обучения и мышления порождают больше путей и новых сетей. Это называется нейронной схемой, и она делает нас с вами более осведомленными и более связанными с тем, что происходит вокруг нас. По мнению Общества науки, этот процесс особенно полезен, когда речь идет о позитивном мышлении и визуализации. «Чем больше вы можете видеть и думать о том, чего вы хотите, тем больше ваш мозг осознает возможности для вас, чтобы достичь этого. Вы буквально можете перестроить свой мозг на успех »- DoseofBliss
Как работают платы Vision
Представьте, что вы просыпаетесь утром, улыбаясь, полная радости, когда теплые солнечные лучи целуют ваше лицо.Вы протягиваете руки над головой и смотрите в окно спальни дома своей мечты. вы живете с любящим и добрым супругом, занимаетесь плаванием, чтением, прыжками с парашютом и занятиями, которые вас волнуют. Вы недавно уволились с работы и делаете карьеру, о которой всегда мечтали (кого волнует, что кто-то думает, вы будете отличным инструктором по подводному плаванию). Когда вы делаете утренний фруктовый коктейль, вы благодарны за то, что боль в колене ушла, а сверхактивные мысли в вашей голове стали сосредоточенными и решительными.Отбросив своего ангельского ребенка в детский сад, вы сидите в уютном кафе со своим золотистым ретривером и пишете еще одну страницу этого романа…
Это твоя идеальная жизнь. Это ваш сценарий голубого неба.
Но давайте посмотрим правде в глаза, этого не произойдет, верно? Оглянитесь вокруг, пора вернуться к реальности.
НЕТ! Остановите себя. Вот где большинство людей ошибаются. Здесь люди блокируют себя от достижения своих целей. Слишком легко позволить этим негативным мыслям закрасться…
Как перестать блокировать себя от достижения целей
Тебе нужно вернуться к той мечте, той идеальной жизни.Детали того момента, когда вы чувствуете себя счастливым и вдохновленным… и материализуйте это. Вам нужно видеть постоянное напоминание о своих мечтах. Итак, скопируйте и вставьте эти сны в своей голове на настоящую физическую доску. Добавьте изображения, слова и цели всего, что вы желаете и хотите достичь в следующие 3 месяца или лет, и добавьте это на доску визуализации.
Где «Голубое небо» вступает в игру
Теперь возьмите эту доску Vision и сделайте ее больше, лучше, громче и портативнее. Powtoon создал полностью выполнимый шаблон для всех, он называется My Blue Sky Vision Board Template, а это Vision Board on Steroids! В любое время, когда вы захотите почувствовать вдохновение, достаньте доску или посмотрите видео «Голубое небо». Это зажжет небольшую искру удивительности, которая может помочь вам внести огромные изменения.
Итак, теперь, когда вы немного больше понимаете, как работают доски визуализации и почему они так важны для успеха, давайте приступим и создадим одну!
Шаг 1. Чего я действительно хочу?
Трудно поставить цель, если вы действительно не знаете, чего хотите.Но не волнуйтесь, сейчас самое время понять это. Создание доски визуализации — прекрасная возможность узнать, чего вы хотите от жизни! Немного самоанализа позволит вам перестать реагировать и стать проактивным, чтобы вы могли сосредоточиться на своих истинных желаниях и ставить цели.
Некоторые техники для обретения ясности ума:
Шаг 2 — Заполните пробел
Бесплатная доска визуализации Blue Sky отPowtoon — это буквально самая легкая, простая и сфокусированная доска визуализации в мире.Он также анимирован (и давайте не будем вдаваться в подробности о возможностях анимации) и портативен, так что вы можете получить к нему доступ откуда угодно и когда угодно. Каждый слайд затрагивает разные области жизни, такие как отношения, карьера и здоровье. Заполните детали своей идеальной работы, того, как вы хотите себя чувствовать и выглядеть, и насколько прекрасными вы будете строить отношения с теми, кого любите…
Шаг 3. Персонализируйте изображения
Процесс создания голубого неба является визуальным и ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ. В процессе поиска подходящих изображений, описывающих свои мечты и цели, вы можете встретить изображения, которые вы даже не представляли себе в сценарии «Голубое небо», но которые идеально соответствуют вашим мечтам и целям. Путь к созданию доски визуализации — огромная часть самого опыта. Возьмите эти изображения и загрузите их на свою доску Blue Sky Vision. (Ознакомьтесь с 11 потрясающими и бесплатными ресурсами изображений для вашей следующей презентации.)
Шаг 4 — Потрясающая музыка и вдохновляющие цитаты
Когда мы слышим песню, которую любим, мы становимся счастливее. Наука говорит сама за себя, музыка обладает способностью мгновенно мотивировать, возбуждать и поднимать нам настроение. Выберите песню, которая вам очень нравится, и загрузите ее в «Голубое небо».То же самое и с цитатами. Когда вы найдете цитату, которая вас мотивирует и вдохновляет, вдохновение бывает редкостью. Добавьте их на свою доску визуализации и получайте новое вдохновение каждый раз, когда вы их читаете!
Вот портативный шаблон доски Blue Sky Vision — создайте свое собственное «Голубое небо» прямо сейчас!
Вдохновение бывает редко. Создайте свою собственную доску видения, включите изображения всех своих целей и мечтаний и смотрите ее, когда захотите, чтобы почувствовать вдохновение! Скоро вы будете работать над достижением своих целей, даже не подозревая об этом! И в качестве бонуса: посмотрите на 23 самых вдохновляющих людей из ныне живущих:
.Удачи!
Что бы вы включили в доску Vision Board?
Дайте нам знать в комментариях ниже!
Следующие две вкладки изменяют содержимое ниже.Привет! На самом деле я не ковбой, но я очень рад быть здесь, оттачивая свое научное образование и опыт в маркетинге, чтобы помочь показать миру, как все, что вы хотите, мечтаете или говорите, можно сделать еще лучше с Powtoon!
Диагональная композиция и правило третей
Диагональная композиция и Правило третей — это основные правила композиции, которые использовались со времен живописи.Они по-прежнему широко используются в изобразительном искусстве. Узнайте больше о них в этой статье. (Сообщил: Тацуя Танака)
Предыдущие статьи из этой серии:
1. Обрамление, горизонтальность и вертикальность
2. Основные и второстепенные предметы; Треугольники
3. Центральная композиция, симметричная композиция
Диагональная композиция: создает динамизм и глубину
В диагональной композиции элементы изображения организованы по диагональной линии.Такая композиция может подчеркнуть перспективу, придать изображению ощущение глубины, а также добавить динамизма.
Примеры диагональной композиции
1. Одиночные диагональные линии
i) Использование линий на поверхности горы
Я случайно наткнулся на этот крутой склон горы поздней осенью и использовал телеобъектив, чтобы приблизить пейзаж. Кадр был составлен таким образом, чтобы диагональная линия совпадала с естественными линиями на поверхности горы.
ii) Архитектурные детали на фоне ночного пейзажа
(Фотография любезно предоставлена Canon)
Простой широкоугольный снимок ночного пейзажа может быть красивым, но есть масса похожих снимков. В этом кадре фотограф включил архитектурные детали обсерватории, из которой он снимал, на передний план. Он неожиданный, наглядный и делает снимок более динамичным.
Совет: диагональная линия не обязательно должна быть точно по центру
Для этого снимка диагональная линия (красная линия) расположена ниже центральной диагональной линии (синяя пунктирная линия).Неожиданный ракурс делает снимок еще интереснее.
2. Использование пересекающихся диагональных линий для направления и концентрации внимания
Если у вас есть две пересекающиеся диагональные линии, глаза зрителей будут обращены туда, где они встречаются. Вы можете использовать это, когда решите, где разместить ключевые элементы в вашей композиции.
В этом примере форма «X», образованная корпусом и крыльями самолета, расположена в верхней диагональной половине изображения.
Обратите внимание: Чем больше площадь под диагональными линиями, тем стабильнее композиция.
Состав по правилу третей: наиболее сбалансированный тип композиции
Композиция по правилу третей — одна из наиболее часто используемых техник. В этой композиции кадр изображения разделен на 9 равных сегментов, а главный объект располагается рядом с одним из пересечений линий.
Совет: включите сетку 3×3
Трудно представить себе трети в кадре изображения.Но не волнуйтесь — в вашей камере есть встроенное наглядное руководство. Просто включите отображение сетки 3×3 (инструкции см. В руководстве пользователя камеры). Это также может помочь вам увидеть, выровнены ли ваши линии по вертикали / горизонтали.
Примеры композиций по правилу третей
1. Размещение предметов в точках пересечения
Эти два цветка гибискуса, растущие бок о бок, размещены в двух точках, где пересекаются линии сетки 3×3.Фотограф также добавил третий цветок сзади в тени листьев, чтобы подчеркнуть глубину.
(Фотография любезно предоставлена Canon)
Этот снимок потолочных ламп в кафе может показаться простым неструктурированным снимком. Однако обратите внимание на то, как фотограф разместил абажуры или около пересечений на сетке 3×3, в результате чего получилась аккуратная, сбалансированная композиция.
2. Разделение композиции в соотношении 6: 3
(Фотография любезно предоставлена Canon)
На этом изображении небо и облака (основные объекты) занимают две трети изображения, а озеро и земля — последнюю треть.Такое разделение композиции в соотношении 6: 3 помогает создать стабильную композицию.
3. Сочетание правила третей с разделенной композицией
Одна техника композиции, которая часто используется вместе с Правилом третей, особенно в пейзажной фотографии, — это разделенная композиция. В этой технике рамка изображения делится по вертикали или горизонтали на две равные части. Это помогает создать ощущение стабильности.
Кадр, изображающий градацию неба и освещения. Здесь разделенная композиция была использована для эффективного выявления контраста.
Совет: как сделать ваши снимки более привлекательными
Композиция по правилу третей и разделенная композиция хороши для создания снимков с визуальным балансом и стабильностью, но они также могут легко привести к скучному снимку. Чтобы решить эту проблему, не попадайтесь в ловушку, механически размещая объект на линиях и пересечениях! Вместо этого найдите способы сделать ваш объект визуально более привлекательным.Вы можете начать с рассмотрения взаимосвязи между основным предметом и другими элементами. Мы рассмотрим это в следующей серии статей.
Подробнее о композиции по правилу третей см. Также:
Простые, но важные композиции (часть 1): правило третей и правило четвертей
Как применять правило третей в портретной и уличной фотографии
Получайте последние новости, советы и рекомендации в области фотографии.
Станьте частью сообщества SNAPSHOT.
Зарегистрироваться сейчас!Центр иммунологии опухолей и адресной терапии рака
Центр иммунологии опухолей и целевой терапии рака
Миссия:
Миссия Центра — улучшение ухода за онкологическими больными за счет развития и внедрение новых методов иммунотерапии и таргетной терапии рака.
Видение:
Для развития фундаментальных, трансляционных и клинических исследований в иммунологии опухолей и биологии рака. и персонализированной медицины в Фармацевтической школе посредством создания команда междисциплинарных и межведомственных следователей, работающих в среда сотрудничества и поддержки.
Аналитический прибор:
Проточный цитометр с мультиспектральной визуализацией с возможностью определения местоположения и количественного определения распределения сигналов внутри или внутри клеток и между клетками в клеточных конъюгатах.
Лазеры:
405 нм фиолетовый лазер
488 нм сапфировый лазер
658 нм красный лазер
785 нм
Создавайте высококачественные цифровые слайды с помощью сверхкомпактного устройства захвата изображений Aperio CS2. устройство — с рабочего стола.С возможностью пяти слайдов и 20- и 40-кратным увеличением Возможности, Aperio CS2 — высоконадежная рабочая лошадка для сайтов среднего объема.
Aperio CS2 — идеальный инструмент для подготовки слайдов и данных для обмена с другими члены команды для совместной работы. Удаленная оценка цифровых слайдов может улучшить учебу время выполнения работ и простота доступа для членов команды.
Компактный, компактный, высококачественный прибор для сканирования всей линии слайдов, Aperio CS2 занимает всего 1,6 квадратных фута рабочего места.
Основные характеристики:
- Внешний обмен и сотрудничество (от учреждения к учреждению)
- Внутренний обмен (сеть Hub & Spoke) и совместная работа
- Анализ изображений eIHC
- Контрактные исследования
- Тканевые микрочипы
Анализатор клеток BD LSR Fortessa
Анализатор клеток BD LSRFortessa ™ предлагает наилучший выбор для проточной цитометрии, обеспечивая мощность, производительность и стабильность.Разработан, чтобы быть доступным и расширяемым, BD LSRFortessa обладает гибкостью, чтобы удовлетворить растущие потребности в многоцветных проточная цитометрия. Анализатор BD LSRFortessa может быть сконфигурирован до 4 лазеры — синий, красный, фиолетовый и УФ — которые позволяют обнаруживать до 18 цветов одновременно. BD LSRFortessa может быть впоследствии модернизирован дополнительными или новыми лазерами от BD, как того требуют будущие требования.
Лазеры:
- 405 Фиолетовый лазер
- 488 Синий лазер
- 640 Красный лазер
Основные характеристики:
Гидравлическая система приводится в действие давлением.Гидродинамические фокусирующие силы кюветы с образцами
через кюветную проточную кювету, где они опрашиваются. Проточная ячейка зафиксирована
юстировка с помощью лазера и гель-связь с собирающей оптикой. Такая конструкция обеспечивает
что лазер точно сфокусирован на потоке пробы и максимальное количество
излучаемый свет может быть собран для дополнительной чувствительности в многоцветных приложениях.Фиксированный
выравнивание также минимизирует время запуска, улучшает воспроизводимость экспериментов,
и обеспечивает автоматизированный ежедневный контроль качества.
Оптическая система состоит из оптики лазерного возбуждения, которая освещает клетки в
оптика для образцов и собирающая оптика, которая направляет сигналы рассеяния света и флуоресценции через
спектральные фильтры к детекторам. Инновационный дизайн как оптики возбуждения, так и
собирающая оптика в системах BD LSRFortessa снижает потери возбуждения и оптимизирует
эффективность сбора для повышения чувствительности и разрешения.
Сортировщик клеток проточного цитометра BD FACSAria
Сортировщик клеток BD FACSAria устанавливает новый стандарт высокопроизводительной проточной цитометрии.Основанный на совершенно новой конструкции приборов, прибор BD FACSAria представляет собой первый настольный сортировщик, который включает проточную кювету с фиксированным выравниванием. В многочисленные технологические достижения, воплощенные в сортировщике клеток BD FACSAria, сокращают стоимость владения высокоскоростным сортировщиком и ускорение исследований за счет предоставления беспрецедентных, простая в использовании высокопроизводительная сортировка и анализ.
С 3 лазерами он может обнаруживать до 11 флуорохромов, всего 13 параметров:
- 488 нм: 7 детекторов (SSC + 6 флуорохромов)
- 633 нм: 3 детектора
- 405 нм (фиолетовый): 2 детектора
Основные характеристики:
- Высокоскоростная сортировка клеток
- 3 лазера с воздушным охлаждением (синий: 488, красный: 633 и фиолетовый: 407 нм)
- Скорость цифрового сбора данных до 70000 событий в секунду
- Многоцветный анализ (до 9 цветов)
- Двух- и четырехсторонняя сортировка в пробирках и 96-луночных планшетах
- Оптические фильтры для обнаружения флуорофоров в следующих девяти каналах:
- Цифровой сортировщик клеток с активацией флуоресценции
A1 — это мощная полностью автоматизированная система конфокальной визуализации Nikon, способная снимать высококачественные конфокальные изображения клеток и молекулярных событий на высокой скорости и улучшенные чувствительность.Идеально подходит для объектов с широким кругом пользователей, A1 был разработан с революционными нововведениями в оптических и электронных технологиях, обеспечивающими беспрецедентные качество и гибкость системы. Высокоточная моторизованная фокусировка и захват изображения в 3D и многие другие функции.
Оснащен 4 лазерами:
Основные характеристики:
- Высокоскоростной резонансный сканер позволяет визуализировать внутриклеточную динамику на 30 кадрах в секунду (Fps).Кроме того, возможно получение изображения со скоростью 420 кадров в секунду.
- Одновременная активация изображений и фото с помощью специального гибридного сканера. внутримолекулярное взаимодействие. Программное обеспечение для анализа FRAP и FRET входит в стандартную комплектацию.
- Быстрое получение спектрального изображения для 32 каналов с максимальной скоростью 24 кадра в секунду (512 x 32 пикселя) возможно.Новое спектральное разделение в реальном времени и функция V-фильтрации расширяют возможности диапазон использования спектральных изображений.
- Эффективность флуоресценции увеличена на 30 процентов, а также увеличено отношение сигнал / шум изображений. повысился. Благодаря разнообразным новым технологиям, таким как установка с отверстиями VAAS, превосходное изображение качество было достигнуто.
Участников центра:
Директор центра — Мацей Маркевский, M.D., Ph.D.
Профессор
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Магдалена Карбовничек, М.Н., К.
Профессор
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Нинь «Ирэн» Ла-Бек, Фарм.Д.
Доцент
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Доцент
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Доцент
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Санджай К.Шривастава, к.т.н.
Профессор и заведующий кафедрой
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Доцент
Кафедра иммунотерапии и биотехнологии
Фокус исследований:
Стивен Кесслер | Библиотека и общая картина — Santa Cruz Sentinel
Городские власти Санта-Крус во главе с городским менеджером Мартином Берналом и влиятельным членом совета Синтией Мэтьюз сделали гражданам ложный выбор в вопросе использования средств меры S для обновления, улучшения и отремонтировать главный филиал нашей публичной библиотеки в центре города.Нам сказали с миллионами долларов на исследования и консультантов для документации, что библиотека на Черч-стрит безнадежно ветхая, и единственный способ спасти ее — заменить ее новой, «современной» библиотекой как частью шестиэтажного здания. многофункциональный проект, который сначала включал в себя в основном парковку, а теперь в нем много «доступного жилья».
Нам говорят, что только объединив ресурсы для парковки с выделенным финансированием библиотеки, мы сможем получить библиотеку своей мечты. В противном случае забудьте об этом, старая библиотека зашла слишком далеко, и ее слишком дорого исправлять.Так что выбирайте: новую библиотеку как часть огромного гаража или вообще никакой новой библиотеки. Этот набор альтернатив или / или является самореализующейся катастрофой, которой должны стыдиться гражданские лидеры, такие как Мэтьюз и Бернал. Они неоднократно ссылались на финансовую необходимость этого паршивого выбора, но существует множество законных способов перемещения денег в бюджете — при наличии политической воли и видения для этого.
Почему его промоутеры так привязаны к своей химере гаража-библиотеки, что не видят однобокой народной оппозиции — это не столько политический, сколько психологический вопрос, и почему они хотят, чтобы их отождествляли с таким ужасным оскорблением городского пейзажа — разрушением города. последнее зеленое открытое пространство во все более высоком и массивном архитектурном окружении — загадка, но их приверженность своей ужасной идее непоколебима.
Может, это правда, что ты не можешь драться с мэрией. И все же это не диктатура, и власть имущие, такие как они, не всемогущи. Если народные настроения достаточно сильны, распространены и достаточно громко — письма редактору, электронные письма в городской совет и руководство, петиции, статьи, молва, — кто знает, они все равно могут прийти к уважению к людям, которых они якобы представляют. .
Библиотека, безусловно, может быть перестроена или отремонтирована на месте в Civic Center, особенно если объект смешанного использования на участке 4 будет заброшен как досадное заблуждение, а участок будет перепроектирован и преобразован в общественную площадь.Гараж, если он действительно необходим (который был подвергнут сомнению экспертами, мнение которых город запросил, а затем проигнорировал), может быть построен или перестроен на месте другой городской парковки или собственности. Часть денег, сэкономленных на хранении шестиэтажного дома-гаража-библиотеки-монстра, можно было бы перенаправить на ремонт и реконструкцию библиотеки.
У нас может быть наша современная библиотека со всеми необходимыми функциями — общественная комната, подростковая зона, детская секция, местная история, генеалогия, компьютеры и изобилие Интернета — не жертвуя ее характером и гражданской целостностью, помещая ее в бетонный мегалит.
Это всего лишь набросок реалистичного видения библиотеки как части социально и коммерчески оживленного и привлекательного центра города. Если бы люди, способные принимать решения, такие как городской совет и высшее руководство, признали и открыто признали бы пользу для сообщества возрождения библиотеки и отказа от своего чудовищного гаража, они могли бы развернуться и работать с доброй волей и поддержкой общественности. чем против, все объединяются в одном направлении.Но они должны захотеть это сделать.
Если есть деньги на парковку или жилье, то такой крупный социальный и культурный актив, как библиотека — возможно, более важный, чем сама мэрия, которая в основном состоит из офисов — также должна финансироваться из городской казны. С экономической точки зрения времена тяжелые, и какое-то время ничего не может быть доступным по цене. Но это возможность переосмыслить предыдущие предположения.
Если красивая, достойная библиотека не является главным приоритетом, независимой и более ценной, чем избыточная и разрушающая окружающую среду парковка, тогда душа нашего города находится в худшем состоянии, чем я думал.
Колонка Стивена Кесслера работает по средам и субботам.
.